三乙醇胺基强碱性聚苯乙烯树脂共价固定胰酶的研究

用多孔强碱型三乙醇胺基聚苯乙烯阴离子交换树脂做为载体,用CNBr与载体上的多羟基作用共价偶联了胰酶。红外光谱表明:其共价偶联反应机理与用CNBr活化多糖类载体并接酶的机理相类似。最适偶联条件研究表明:CNBr用量增多,酶蛋白载量增加。但比活下降。偶联pH为10时,固定化酶有适宜的载量和较高的比活。由于胰酶水解蛋白反应释放出H~+质子,这些质子在载体内积累,使微环境内H~+质子浓度增加,进而使得固定化胰酶的pH—活性曲线在pH9～11范围内未出现下降。在变温和60℃恒温下对固定化酶的热稳定性测试表明:固相酶的热稳定性比天然酶的热稳定性有所提高。     

固定化酶的微环境效应—载体离子基团性质的影响

作者合成了阴离子型和阳离子型葡聚糖,以此为载体,用CNBr活化其剩余羟基,固定化了葡萄糖淀粉酶和葡萄糖异构酶。就离子型载体对固定化酶的蛋白载量、最适pH和热稳定性等的影响做了考察。发现固定化酶的蛋白载量不仅与载体的电性质有关,也与酶分子自身的电性质有关。当载体电性质与酶蛋白电性质相反时,固定化酶的蛋白载量增加,热稳定性提高、载体电性质与酶蛋白电性质相同时,固定化酶的蛋白载量不变或下降,其热稳定性不变。作者还发现当离子型载体孔度和体系缓冲液浓度一定时,酶分子能否进入多孔性载体内部,对其最适pH是否变化影响极大。若酶分子仅被连接在载体的外表层,其最适pH不发生变化,反之亦然。作者还观察到当多糖类载体引入氨基或羧基后,大大增强了其抵抗微生物侵蚀的能力。     

条件复制腺病毒的构建

条件复制腺病毒是针对第一代复制缺陷型腺病毒在临床应用中存在的问题而构建的能在肿瘤细胞特异复制的基因治疗载体。该从其构建机制、构建方式及效力评价等方面论述了为实现特异性高效复制所应考虑的诸多方面的问题,如特异性启动子的选择,基因重组方案的设计,以及相应的效力评价体系的构建等。     

固定化酶及双酶共反应

 <正> 葡萄糖异构酶(GI)将糖化酶(GA)的水解淀粉产物葡萄糖转化为果糖。这二种酶是生产高果糖浆(HFCS)不可缺少的酶。我们根据离子型载体可以改变固定化酶最适PH的道理,将GA固定在磺酸型聚苯乙烯载体上,其最适pH由4.6移到了6.8。将GI固定在季胺多羟基聚苯乙烯载体上,其PH-活力曲线变宽,在pH7.0的活力由48％提高到66％。本文首次创建了使两种酶的最适PH相向移动的双酶共反应体系。其意义在于更加广泛地利用固定化多酶体系的动力学优势。     

四川地区宫颈癌HPV59型感染及其E6基因突变

宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤,特定型别的人乳头瘤病毒(HPV)感染是引发宫颈癌的主要因素[1].根据HPV致癌性的不同可分为高危型,低危型.Munoz N[2]等对来自9个国家的1918例宫颈癌组织进行各型HPV筛查,最终确认HPV-16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73及82型为高危型.李洁等[3]用核酸印迹技术对1986至1994年间来自我国14个省市自治区的1008宫颈癌组织进行HPV型别检测,发现HPV-16、18、31、35、51、58等型的存在,并发现各地区主要流行型别随地理位置有所差异.     

离子型多孔聚苯乙烯固定化糖化酶

 用离子型多孔聚苯乙烯固定化了糖化酶。研究了制孔剂比例对载体孔径的影响。用麦芽糖做底物,三乙醇胺基聚苯乙烯载体使固定化糖化酶的最适pH向左移动约2个pH单位;磺酸基苯胺基聚苯乙烯载体使固定化糖化酶最适pH向右移动2个单位。固定化酶最适pH的移动值随缓冲液浓度的增加而减少。用可溶性淀粉为底物时固定化糖化酶的pH—活力曲线变宽。用dextrin作底物,天然糖化酶的Km为3.47×10~(-3)mol/L,固定化糖化酶的素质K_m为4.17×10~(-3)mol/L,表现K_m(app)为1.11×10~(-2)mol/L。延长重氮化反应时间,得到2000ug~(-1)干胶的高活力固定化糖化酶。     

四川地区宫颈癌HPV59型感染及其E6基因突变

宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤,特定型别的人 乳头瘤病毒(HPV)感染是引发宫颈癌的主要因 素。根据HPV致癌性的不同可分为高危型,低 危型。Munoz N[2]等对来自9个国家的1918例宫 颈癌组织进行各型HPV筛查,最终确认HPV-16、 18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、 68、73及82型为高危型。李洁等[3]用核酸印迹技 术对1986至1994年间来自我国14个省市自治区 的1008宫颈癌组织进行HPV型别检测,发现 HPV-16、18、31、35、51、58等型的存在,并发现各 地区主要流行型别随地理位置有所差异。     

中国野生葡萄葛蘲叶绿体DNA质粒文库的构建

限制性内切酶ＢａｍＨＩ水解中国野生葡萄葛（ＶｉｔｉｓｆｌｅｘｕｏｓａＴｈｕｎｂ）的叶绿体ＤＮＡ（ｃｐＤＮＡ）,电泳分离为３４条带,最大为１１．７ｋｂ,最小为０．２３ｋｂ,分别用ｐＵＣ和ｐＢＲ３２２质粒克隆所得片段,转化大肠杆菌,并从转化菌中提取质粒ＤＮＡ,经酶切电泳分析证明含有葛ｃｐＤＮＡ经ＢａｍＨＩ水解的不同片段,从而构建了葛ｃｐＤＮＡ的ＢａｍＨＩ质粒文库。     

固定化酶的微环境效应Ⅰ——最适pH的移动

以葡聚糖为载体,在葡聚糖上引入了不同量的羧甲基,采用CNBr法活化葡聚糖上剩余的羟基,使之与葡萄糖淀粉酶(GA)共价结合,从而观察载体羧甲基定量变化对固定化葡萄糖淀粉酶pH——活性曲线的影响。分别使用了两种不同孔度的葡聚糖(SephadxG100、G200)作为载体,首次发现在载体带有离子基因的情况下,载体的孔度变化对固定化酶的pH——活性曲线影响极大,甚至可以完全消除载体静电荷对此带来的影响。这些结果表明:固定化酶的微环境不仅与载体的静电势有关,也与载体分子空间结构的疏密程度有关。本文对固定化葡萄糖淀粉酶(IGA)的热稳定性也作了评价。