探究杂交瘤技术制备单克隆抗体时与骨髓瘤细胞有效融合的细胞类型

杂交瘤技术制备单克隆抗体,一般取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,并通过筛选获得杂交瘤细胞后再生产。脾脏内含有B1细胞、Mz-B细胞、T1 B细胞、T2 B细胞、初始B细胞、致敏B细胞、短寿命浆细胞、中心母细胞、中心细胞、抗体分泌细胞等不同类型的细胞。制备单克隆抗体使用的抗原多为蛋白质,经典的免疫策略要用抗原反复刺激免疫动物,所获单克隆抗体类型多为高亲和力的免疫球蛋白G(IgG),结合近期发明的一些新技术等,可认为与骨髓瘤细胞有效融合的主要是由记忆B细胞增殖分化而来的抗体分泌细胞。     

单克隆抗体概述

本文简单回顾了单克隆抗体技术产生的背景及发展和逐步完善的过程。从生化角度阐明选择核酸代谢旁路酶缺陷型的骨髓瘤细胞株和正常免疫脾细胞作为两个母本细胞融合成杂交细胞的原因,因为只有这样的细胞才能在HAT培养液中无限生长,也就是单克隆技术能取得成功的基本原理。比较了单克隆抗体和常规方法得到抗体的优越性,前者不仅可以较大量地得到高度纯化的针对某特定抗原决定簇的抗体,并能获得在通常情况下不易得到的抗弱抗原抗体,又是一个纯化某些物质的新的途径。本文又简述了单克隆抗体的生产程序,讨论了可能产生的技术问题;指出了杂交瘤的不稳定性和单克隆抗体不可能具有全部免疫球蛋白的生物活性的原因,例如有些单克隆抗体不结合补体,无细胞毒作用,无血凝作用或不与金黄色葡萄球菌蛋白A结合等。最后提出了单克隆抗体技术的应用方面,在产生大量高特异性的纯净抗体和为研究免疫反应的调节方面都有宽广的前途。     

小鼠抗天花粉蛋白IgE单克隆抗体的制备、分离和鉴定(英文)

天花粉蛋白是中药天花粉的有效引产成份,在应用中它偶尔也引起过敏反应。我们用杂交瘤技术建立了一株分泌抗天花粉蛋白特异性IgE单克隆抗体的杂交瘤细胞系。在实验中,二次免疫的C57 BL/6 J小鼠的肠系膜淋巴结细胞和脾细胞分别被用来同NSI骨髓瘤细胞进行融合。虽然在融合前动物血清IgE抗体效价仅为40～160 PCA滴度,但用肠系膜淋巴结细胞进行的4次融合都产生了IgE杂交瘤。阳性率为1.0-6.7%。对比之下,用脾细胞进行的另外两次融合却没有观察到IgE杂交瘤产生,统计结果说明差异显著(P<0.05)。该IgE单克隆抗体可以在体内和体外诱发大鼠肥大细胞脱颗粒。56℃热处理2小时能使该抗体诱导PCA反应的能力完全丧失,然而却不影响其结合抗原的能力。对该单克隆抗体的特异性的鉴定表明,它可以特异性地识别精制天花粉蛋白和结晶天花粉蛋白上的抗原决定簇。     

东北虎免疫球蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

【目的】提纯东北虎免疫球蛋白并制备其单克隆抗体(McAb),为东北虎传染性疾病诊断试剂盒研制、疫苗免疫效果评估及基础免疫学研究奠定基础。【方法】以饱和硫酸铵和重组的Protein G相结合,提纯东北虎免疫球蛋白作为抗原,免疫C57BL/6小鼠,和骨髓瘤细胞系Sp2/0-Ag14相融合制备杂交瘤细胞,ELISA和蛋白免疫印迹筛选及鉴定阳性克隆,应用杂交瘤产生的McAb鉴定提纯免疫球蛋白及制备的McAb免疫学活性,非竞争性ELISA法测定了其亲和常数。【结果】得到3株稳定分泌抗东北虎免疫球蛋白McAb的杂交瘤细胞,产生的抗体全部识别免疫球蛋白的重链,通过对猫泛白细胞减少症病毒株(FPV-HLJ)灭活疫苗免疫东北虎的抗体消长的检测,证明提纯的免疫球蛋白及其McAb的免疫活性。【结论】Protein G能够用于东北虎免疫球蛋白的提纯,ATD11杂交瘤产生的McAb与抗原有较强的结合能力和免疫学活性,为今后开展东北虎传染病的诊断方法及疫苗研究奠定基础。     

小鼠杂交瘤单克隆抗体快速制备技术研究进展

小鼠杂交瘤单克隆抗体来源稳定、后期易制备、产量高,是免疫学中使用最为普遍的抗体。传统的耗时费力的杂交瘤制备技术无法满足日益增长的市场需求。文中从抗原设计筛选、B细胞富集与筛选、骨髓瘤细胞的改造、融合技术的改进、阳性杂交瘤细胞筛选及单克隆抗体性能快速测定中所涉及的快速制备技术方面进行阐述,以期为系统化的小鼠杂交瘤单克隆抗体的快速制备方法提供参考。     

提高抗原特异性杂交瘤生成率

<正>用脾细胞与骨髓瘤细胞杂交的技术以产生单克隆抗体,已经广泛地引起了学者们的兴趣。这项技术的主要缺点之一就是由于抗原特异性的杂交瘤细胞产生率很低,因此必须用大量的细胞进行融合,维持和筛选其是否产生抗体。这种令人失望的比率已经限制了杂交瘤技术的应用,并给杂交瘤的进一步发展带来了困难。作者们这里发表的两种技术,可在细胞融合后大大提高杂交瘤产量。     

重组恶性疟原虫DNA质粒免疫小鼠制备单克隆抗体

用恶性疟原虫MSP131基因片段的重组质粒DNA直接免疫BALB/c小鼠,诱导产生体液,免疫后取脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞在PEG1450作用下进行融合,获得了2株能分泌抗恶性疟原虫MSP131单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株9H9和8A2。用酶联免疫吸附试验检测,小鼠腹水抗体滴度最高为1∶10 000。经免疫球蛋白类型和亚类鉴定,2株杂交瘤细胞株均为IgG\-1\.蛋白免疫印迹试验表明,此单克隆抗体与MSP1\|31蛋白抗原有特异免疫反应,证明通过质粒DNA直接免疫小鼠可制备特异性单克隆抗体。     

癌胚抗原单克隆抗体的制备及免疫学性状的研究

用由结肠癌肝转移灶纯化的cEA抗原免疫BALB／c小鼠,其脾细胞与鼠骨髓瘤细胞sP2／0融合,制备产生cEAMcAb的杂交瘤。用ELIsA法检测与c已A,NcA、NcA一2的反应特异性。获得8株仅与cEA有结合反应的McAb,通过阻断抑制试验证明这8株McAb认识cEA分子上三个不同的抗原决定簇。它们的免疫球蛋白亚类同是IgG-．     

抗hAFP单克隆抗体的制备

人甲种胎儿蛋白(hAFP)是一种重要的分化抗原和肿瘤相关抗原,是癌肿早期诊断和胎儿产前诊断中的一个重要标志物。本文应用 B 淋巴细胞杂交瘤技术,将为 hAFP免疫的 BALB/C 小鼠脾细胞与 SP2/O 骨髓瘤细胞通过化学方式融合,从而筛选出稳定分泌抗 hAFP 单克隆抗体的二株杂交瘤细胞株。     

狂犬病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞系的建立

Wikter于1978年首先建立了狂犬病毒单克隆抗体(McAb),并用它发现了狂犬病毒株的抗原差异,而国内尚未见到有关狂犬病毒单克隆抗体的研究报道。为此,在建立快速检测狂犬病毒抗原和抗体的基础上又进行了狂犬病毒单克隆抗体的研究。 将感染狂犬病毒aG株(我国狂犬疫苗生产毒种)后发病的BALB/c乳鼠脑病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合。融合率为95.7％(401/419),阳性克隆占26.8％。经克隆化     

分泌抗北京鸭免疫球蛋白单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤CBH-2(简报)

淋巴细胞杂交瘤技术作为一种新的生物工程技术,已在生物学和医学领域内得到广泛的应用。我们继建立产生抗北京鸭红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞系CBH-1后,又建立了一株产生抗北京鸭免疫球蛋白(I_g)单克隆抗体的杂交瘤细胞系,命名为CBH-2。这种杂交瘤细胞经体外培养,能稳定地分泌抗北京鸭I_g的单克隆抗体。此单克隆抗体在以北京鸭抗体进行放射免疫和酶标等测定时,可用作第二抗体。现将主要结果简报于下。北京鸭I_g抗原的制备及免疫:从北京鸭颈动脉采血,分离血清,用50%和33%硫酸铵沉淀法提取二次。每只Balb/cJ小鼠腹腔免疫剂量为0.3毫克,共免疫三     

杂交瘤在临床和科研实验室中的作用

<正>迄今,临床和科研实验室的血清抗体依靠人源或动物源性。因此,长期以来存在着不少悬而未决的问题。杂交瘤的发现,已有可能排除这些问题中的一部分。一种杂交株是含有混合的核物质的细胞,它是小鼠骨髓瘤细胞与免疫小鼠脾细胞的融合体。当它单性增殖时,能继续不断产生单克隆抗体。单克隆抗体所显示的优点,已众所周知。它在科研和临床工作中的应用,已引起人们广泛的兴趣。     

癌/睾丸抗原在多发性骨髓瘤免疫治疗中应用的研究进展

多发性骨髓瘤是一种常见的血液系统恶性肿瘤,经治疗后仍然有很多患者复发,严重威胁人类的健康.癌/睾丸抗原(C/T)抗原是只表达于睾丸和癌细胞的一类抗原,由于睾丸细胞缺少MHCⅠ类分子,不会受到特异性CTL的攻击,但C/T抗原本身具有一定的免疫原性,可以激活机体产生特异性的CTL应答,因此其被认为是目前肿瘤免疫治疗的理想靶分子之一.C/T抗原从1991年被首次报道以来就倍受关注,在此,本文主要综述了C/T抗原在骨髓瘤细胞中的表达及其在多发性骨髓瘤免疫治疗中的价值和前景.     

分泌抗加压素单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立(之一)

基于深入研究加压素在体内的作用的需要,特制备其单克隆抗体。以赖氨酸加压素为抗原免疫小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,筛选出两株特异性高的杂交瘤细胞,产生的抗体对赖氨酸加压素有强的结合反应,对精氨酸压素有一定的交叉反应,对催产素基本无反应。鉴定证明,此抗体属IgG1亚类,为纯的、均一性的单克隆抗体。     

金黄色葡萄球菌肠毒素C3单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备稳定分泌抗金黄色葡萄球菌肠毒素C3（SEC3）单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的性质进行鉴定。方法以SEC3重组蛋白免疫Balb／c小鼠,应用细胞融合技术将小鼠的脾细胞与sR／0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA法检测筛选及2次有限稀释法克隆化培养,获得目的杂交瘤细胞株,并对其所产生的单克隆抗体进行效价、亲和常数及抗原识别表位等相关性质的鉴定。结果最终获得了两株能分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞1C12和2A2,两者细胞培养上清的效价分别为1：3200和1：1600。经分析可知1C12细胞株的亲和力高于2A2细胞株,同时相加实验表明两个单克隆抗体识别抗原表位相同。结论单克隆抗体制备成功,为进一步完善肠毒素SEC3的临床检测奠定了基础。     

放射免疫沉淀技术在流感病毒单克隆抗体鉴定中的应用

本文报道了用放射免疫沉淀自显影技术,对流感病毒 A/洛阳/3/57(H_1N_1)单克隆抗体的鉴定工作。用流感病毒免疫 BALB/C 小鼠的脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞(SPR/o)融合制备的单克隆抗体,此抗体经血凝抑制实验和神经氨酸酶抑制实验证明是对血凝素特异的。用蛋白 A—琼脂糖与单克隆抗体结合后,再与~(35)S 标记的病毒抗原结合,解析后,进行 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳。放射自显影后,图谱呈现二条主带与 HA_1、HA_2的位置相符,即证明此单克隆抗体是对血凝素特异的。本文还就蛋白 A—琼脂糖对 IgG 的特异性结合及避免杂抗原带的出现等问题进行了讨论。     

细胞工程

8 90742兽医诊断中单克隆抗体的应用一分泌单克隆抗体的杂文套的组珍〔会,法〕/Coppe,P.泌A红红.Med.Vet一19‘88,132(3)一243~250〔译自DBA.1988,7(16),88一08124」. 虽然代价比较昂贵,免疫荧光仍然是兽医诊断‘扣的一个重要工具。如果将荧光染料结合到单克隆抗体中,那么通过镜检就能观察到抗体及其所连接的组织。单克隆抗体可通过用纯化抗原免疫小鼠或大鼠而产生。然后用聚乙二醇(PEG)使鼠的B一淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合,再将所产生的杂种细胞培养在HAT选择培养基中。然后便可获得产生单克隆抗体的杂交瘤,可以将它住人适当的动物中…     

单克隆抗体在肿瘤免疫诊断、治疗中的进展

<正>自1975年Kohler与Miltem首次创建用淋巴瘤杂交技术产生单克隆抗体(McAb)以来,已制备出针对多种不同抗原的McAb,广泛地应用于基础和临床医学的许多方面。McAb是直接与抗原分子表面的某一抗原决定簇或表型相作用的一类结构相似的免疫球蛋白(Ig)。杂交瘤源源不断地分泌高效价,特异性强,单一的McAb,解决了多年来免疫测定因抗体不纯效价不高的     

细胞工程

862453生产肝炎病毒抗体及产此抗体的细胞系的方法〔专,英〕/Wands,J.R一// USPatent US 4491632.Pub.01.01.85.Appl.US 516672,filed 26.07.83〔译自CBA,1985,(4),1101〕从接触过抗原的脾细胞与骨髓瘤ATCCCRL一8017或CRL一8018的融'合产物产生了针对肝炎病毒的单克隆抗体。     

抗幽门弯曲菌单克隆抗体的制备

<正> 作者将培养出的幽门弯曲菌菌体用福尔马林灭活,分 4次注射到 6周龄BALB/c小鼠的腹腔内进行免疫。取脾细胞,同骨髓瘤细胞×63-Ag8.653进行细胞融合,获得杂交的细胞瘤。为筛选抗体和探讨其特定性,将幽门弯曲菌、空肠弯曲菌和大肠杆菌超声波破碎可溶性抗原,变成固体,用酶联免疫吸附测定法测异。再将幽门弯曲菌的可溶性抗原用10％SDS聚丙烯酸胺凝胶电泳,在硝化纤维素膜上转录,使其与各种单克隆抗体反应,充分洗净后,再与过氧化物酶标记的鼠免疫球蛋白抗体反应,然后以氯萘酚为基质染色鉴定。 结果:从100个克隆中筛选出与幽门弯曲菌呈强阳性反应的15种抗体产生克隆。再从这15种之中,挑选