ING1抑癌基因

采用ｃＤＮＡ消减杂交和体内选择技术,Ｇａｒｋａｒｔｓｅｖ等分离了一个新的肿瘤抑制基因－ＩＮＧ１。该基因定位于人类染色体１３ｐ３３－３４,其ｃＤＮＡ长约２ｋｂ;编码了一种分子量为３３ｋＤ的核蛋白－ｐ３３＾ＩＮＧ１。研究发现,ｐ３３＾ＩＮＧ１的过表达可有效抑制细胞生长,促进无生长因子条件下的细胞凋亡。     

p53蛋白多肽片段在大肠杆菌中的表达

在所有研究过的人体肿瘤组织或细胞中,ｐ５３似乎是突变频率最高的一个基因,研究和检测ｐ５３基因及其编码产物的变化将具有重要的意义。我们将野生型ｐ５３基因编码区３’端７０３ｂｐ的ｃＤ－ＮＡ片段插入到大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２０中,得到了一个重组体表达质粒ｐＲＲ３３,经热诱导表达,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法证实ｐ５３蛋白多肽在大肠杆菌中得到了表达,它不仅可用于抗ｐ５３蛋白抗体的制备,而且也可用于对ｐ５３蛋白羧基端多肽功能的研究。     

p53的两种结合蛋白：53BP1和53BP2

ｐ５３基因是一种广谱的肿瘤抑制基因,其产物ｐ５３为一多功能的转录调节因子,可以发挥调节细胞生长、细胞凋亡和ＤＮＡ修复的作用。在人类肿瘤已发现多种ｐ５３基因的点突变,但突变不是ｐ５３蛋白质丧失功能的唯一途径。胞内蛋白可能影响其活性和功能。５３ＢＰ１和５３ＢＰ２是ｐ５３在胞浆中的两种结合蛋白。本文阐述了有关这两种蛋白质的研究进展。     

p53蛋白多肽片段在大肠杆菌中的表达

在所有研究过的人体肿瘤组织或细胞中，ｐ５３似乎是突变频率最高的一个基因，研究和检测ｐ５３基因及其编码产物的变化将具有很需要的意义，我们将野生型ｐ５３基因编码３＇端７０３ｂｐ的ｃＤＮＡ片段插入到大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２０，得到了一个重组体表达质粒ｐＲＲ３３，经热诱导表达，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法证实ｐ５３蛋白多肽在大肠杆菌中得到了表达，它不仅可用于抗ｐ５３蛋白抗体的制备，而且也可用     

蛋白激酶C对CNE-2Z细胞p53基因表达的影响

用抗人ｐ５３蛋白单抗,进行免疫细胞化学染色,研究了蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）对ＣＮＥ－２Ｚ细胞ｐ５３基因表达的影响。结果发现：对照组Ｐ５３蛋白阳性细胞百分比为６７．６９±２．９７。ＰＫＣ催化区抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴ）和调节区抑制剂Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ）终浓度分别为２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ和４×１０－５ｍｏｌ／Ｌ诱导细胞２４ｈ后,Ｐ５３阳性细胞百分比分别为３０．４４±４．２５和２９．１９±２．３９,较对照组均明显降低,Ｐ＜０．０１。用终浓度为２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ的ＴＰＡ和终浓度为４ｕｇ／ｍｌ的ＯＡＧ分别作用２４ｈ后,Ｐ５３阳性细胞百分比分别为３３．７５±４．３４和６８．１８±４．４２,前者较对照组明显降低,Ｐ＜０．０１,后者变化不明显。阳性细胞中对照组和ＯＡＧ组以胞核和胞浆均着色为主,而ＳＳ、ＳＴ和ＴＰＡ组以胞核着色为主。以上结果表明：突变型ｐ５３基因在ＣＮＥ－２Ｚ细胞中有较高表达;通过抑制细胞ＰＫＣ活性和耗竭ＰＫＣ含量后,均可降低ｐ５３基因的表达;ＰＫＣ激活剂ＯＡＧ对该细胞ｐ５３基因的表达无明显影响。     

野生型p53基因对内皮细胞细胞间粘附分子-1表达的影响

细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）是介导白细胞与内皮细胞粘附的重要粘附分子．为研究野生型ｐ５３基因对内皮细胞ＩＣＡＭ－１表达的影响,分别采用流式细胞术和ＲＴ－ＰＣＲ／ＨＰＬＣ方法测定ＩＣＡＭ－１蛋白及ｍＲＮＡ水平．静息状态的内皮细胞表面结构性地表达有少量的ＩＣＡＭ－１,在肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα,１０～１０００Ｕ／ｍｌ）诱导下,其表达呈剂量依赖性增加．将ｐ５３基因导入内皮细胞,则显著抑制ＴＮＦα诱导的内皮细胞表面ＩＣＡＭ－１的表达．ｐ５３基因的导入对静息状态内皮细胞表面结构性表达的ＩＣＡＭ－１影响较小．ｐ５３基因主要通过降低ＩＣＡＭ－１的ｍＲＮＡ水平而抑制内皮细胞表面ＩＣＡＭ－１的表达,但对蛋白的抑制程度小于对ｍＲＮＡ的抑制程度．提示：ｐ５３基因对内皮细胞ＩＣＡＭ－１表达的影响除转录水平控制外,还存在转录后水平的调控     

p73基因

ｐ７３基因黄君富房殿春鲁容（第三军医大学西南医院分子生物学实验室,重庆４０００３８）关键词ｐ７３ｐ５３抑癌基因人们对抑癌基因ｐ５３在肿瘤发生中的作用已进行了较为深入的研究,ｐ５３基因的缺失及失活与５０％的人类肿瘤发生有关。人们早就认为,在复杂的生物学...     

棉铃虫核型多角体病毒凋亡抑制基因对p35基因失活病毒的功能拯救

野生型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）能感染棉铃虫细胞,不引起细胞凋亡,用ＬａｃＺ基因使ＡｃＮＰＶ凋亡抑制基因ｐ３５插入失活,得到缺陷病毒Ａｃｐ３５Ｚ能迅速引起棉铃虫细胞凋亡,但缺陷病毒本身不能复制。用ＡｃＮＰＶ即早期基因ＩＥ１启动子带动棉铃虫杆状病毒（ＨａＮＰＶ）ｐ３５基因在棉铃虫细胞中瞬时表达,能拯救ｐ３５基因失活病毒Ａｃｐ３５Ｚ复制。通过Ｘ－ｇａｌ显色反应和ｄｏｔＥＬＩＳＡ分别检测到了半乳糖苷酶的活性和ｐ３５基因的表达,证明了所克隆的ＨａＮＰＶｐ３５基因不仅是一个凋亡抑制基因,也是一个与杆状病毒复制相关的基因,它的瞬时表达能支持Ａｃｐ３５Ｚ在棉铃虫细胞中复制。     

绿茶对人胃癌细胞株中p21,p53蛋白表达的影响

应用免疫细胞化学方法检测ＳＧＣ—７９０１胃癌细胞株中ｐ２１、ｐ５３蛋白的表达,以探讨绿茶的抗癌作用机理。结果表明：绿茶提取物明显抑制ＳＧＣ—７９０１胃癌细胞株中ｐ２１ｒａｓ、ｐ５３蛋白的表达,并有剂量效应。提示绿茶对ｐ２１、ｐ５３基因突变可能有修复作用     

p18^INK4C,p19^INK4D的结构,功能及细胞分化

ｐ１８＾ＩＮＫ４Ｃ和ｐ１９ＩＮＫ４Ｄ是细胞周期调控中的两种抑制因子,属于ＣＫＩｓ中的ＩＮＫ４家族蛋白,具有周期依赖性表达模式,特异性抑制Ｇ１ＣＤＫ４／６的激酶活性。同时也参与一些组织的终末分化过程,在细胞增殖周期与分化调控方法发挥偶联作用。     

DMBA、垂体移植诱发性乳腺瘤内172~（Arg－Leu）突变型p53的特性及其与基因重排和扩增关系的研究

ｐ５３最早发现于ＳＶ４０转化的细胞系,后来几乎在所有不同类型的细胞内均检测到这种蛋白质,野生型Ｐ５８是一种有效的肿瘤抑制因子,但突变体ｐ５２可与ｒａｓ－肿瘤基因协同转化体外的腺代细胞,而且在肿瘤发生时常伴随有ｐ５３基因的突变。乳腺癌内,ｐ５３基因的突变率为４０％,并可见到某些肿瘤基因参与癌症的形成过程,暗示ｐ５３基因结构和功能的改变可能与这些基因的重排和扩增有关。本实验选择４种不同年龄的１７２~（Ａｒｇ－Ｌｅｕ）突变型ｐ５３转基因小鼠为受试动物,将同系动物的垂体腺植入小鼠的肾脏后,再以致癌剂ＤＭＢＡ处理,以使动物乳腺内的ｐ５３基因表达和诱导小鼠乳腺癌形成。从乳腺癌小鼠分别摘取乳腺组织,提取ＤＮＡ和ＲＮＡ,以Ｈ－ｒａｓ、ＰＣＮＡ、ＣｙｌｉｎＤ１、ｐ５３基因的ＤＮＡ片段作为特异性核酸探针,进行ＳｏｕｔｈｅｒｍＢｌｏｔｔｉｎｇ和ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ分析,以检测在突变体Ｐ５３表达的情况下,ＰＣＮＡ、Ｈ－ｒａｓ、ＣｙｉｎＤ１等基因在体内的变化规律。实验发现,在４组不同的受试动物中,其乳腺癌细胞的ＰＣＮＡ和Ｈ－ｒａｓ两种基因发生了基因重排,特征是其ＤＮＡ标本中分别出现了一条很强的额外杂交带,但对照动物乳腺该类     

二酰甘油－蛋白激酶C信使系统在LA90细胞转化中的作用

以ＬＡ９０细胞（ＲＳＶ温度敏感突变株ＬＡ９０转化的小鼠成纤维细胞〕为模型,研究了二酰甘油（ＤＧ）－蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）信使系统在细胞转化中的作用。通过免疫沉淀法观察到ＬＡ９０细胞在允许温度（３３℃）时具有很高的ｐｐ６０ｖ－ｓｒｃ激酶活性,远高于非允许温度（３９℃）,当从３９℃转至３３℃１０分钟,激酶活性就已显著升高。同时运用３Ｈ－甘油掺入并结合板层析分离方法和酶活性测定,发现ＬＡ９０细胞中ＤＧ含量和ＰＫＣ活性在３３℃条件下高于３９℃,当由３９℃转至３３℃１０分钟,细胞内ＤＧ含量和ＰＫＣ活性均明显增加。我们进一步探讨了ＰＫＣ活性与癌基因ｖ－ｓｅｒ、ｐ５３基因表达的相关性,实验表明,ＰＫＣ的激活剂ＴＰＡ可刺激３９℃条件下的ＬＡ９０细胞中ｖ－ｓｒｅ和ｐ５３基因表达,ＰＫＣ选择性抑制剂Ｈ７可抑制３３℃条件下ＬＡ９０细胞中ｖ－ｅｒｃ和ｐ５３基因表达。看来,ｐｐ６０ｖ－ｓｒｃ可通过刺激磷脂酰肌醇（ＰＩ）代谢激活ＤＧ－ＰＫＣ（ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ－ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ）信使系统,后者通过某种途径调控ｖ－ｓｒｃ和ｐ５３等癌基因之表达。因此ＤＧ－ＰＫＣ信使系统可能是ｐｐ６０ｖ－ｓｒｃ转化细胞及被转化细胞维持转     

人胃癌细胞系中p53抑癌基因变异的检测及其序列分析

ｐ５３抑癌基因由于点突变,缺失或易位等方式而丧失活性是多种肿瘤发生发展的重要机理之一。本文应用聚合酶链式反应─—单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法,对四种人胃癌细胞系ＭＧＣ８０３,ＢＧＣ８２３,ＧＣ７９０１和ＰＡＭＣ－８２中ｐ５３基因的第５、６、７、８四个外显子进行检测,结果发现,ＰＡＭＣ－８２的第５和第８外显子,ＧＣ７９０１的第６外显子存在突变。ＰＣＲ－直接测序证明,它们分别在１７４位、２８０位、２０４位密码子发生缺失Ｇ,ＧＣ→ＣＧ,ＡＴ→ＣＧ转变,因而可使其编码的ｐ５３蛋白分别发生移码突变,Ａｒｇ→Ｔｈｒ,Ｇｌｕ→Ａｌａ,而丧失肿瘤抑制功能。实验结果表明,ｐ５３基因在胃癌发生发展过程中,尤其是较晚阶段具有重要作用。     

甲状腺肿瘤p53mRNA及p53蛋白表达的研究

本文采用原位杂交法、免疫组织化学方法分别检测了甲状腺癌ｐ５３ｍＲＮＡ、ｐ５３蛋白的表达,结果显示：２０例甲状腺癌ｐ５３ｍＲＮＡ、ｐ５３蛋白均呈阳性反应,８例甲状腺瘤仅１例呈弱阳性反应,８例Ｇｒａｖｅｓ病全部呈阴性反应。细胞质和细胞核ｍＲＮＡ、ｐ５３蛋白灰度检测发现,甲状腺瘤细胞质、核ｐ５３ｍＲＮＡ灰度值和ｐ５３蛋白灰度值均明显高于Ｇｒａｖｅｓ病,而甲状腺癌其细胞质、核ｐ５３ｍＲＮＡ灰度值和ｐ５３蛋白灰度值又明显高于良性甲状腺瘤,提示甲状腺癌ｐ５３ｍＲＮＡ和ｐ５３蛋白的高表达可能与甲状腺肿瘤细胞分化程度有关     

PCR—SSCP检测肺癌细胞p53基因点突变

应用溴化乙锭（ＥＢ）染色的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对１０例非小细胞性肺癌组织标本ｐ５３基因外显子５￣８进行分析,其中１例在外显子５￣６;１例在外显子７;２例在外显子８发现异常电泳带。对１例经ＳＳＣＰ检测异常的ｐ５３基因进行核酸序列分析,发现第２８０位密码子ＡＣＡ,其编码的氨基酸由丝氨酸变成半胱氨酸。结果证实：非小细胞性肺癌与ｐ５３基因突变有关;ＥＢ法ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术是一种简便、可靠的点突变检测法。     

p16基因的功能及与肿瘤的关系

ｐ１６基因是新近发现的一种肿瘤抑制基因,它的编码蛋白是Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ／ｃｄｋ４激酶的特异性抑制剂,通过抑制细胞周期进程而抑制细胞增殖。ｐ１６基因在多种肿瘤中有高频率的纯合缺失和点突变,使之成为继ｐ５３之后肿瘤基础及临床研究中又一热点之一。     

人p53蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表达

将人ｐ５３ 基因装入 Ｐｉｃｈｉａ 分泌型质粒ｐ Ｈ Ｉ Ｌ Ｓ１ 中,酶切线性化后电穿孔导入酵母细胞进行整合,经筛选得到一高表达ｐ５３ 蛋白的克隆。 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 显示表达量约占分泌总量的３０ ％ 。 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 验证重组人ｐ５３ 存在免疫学活性。在诱导时就降低 Ｐｉｃｈｉａ 酵母系统水解酶活力等方面进行优化,经 Ｆ Ｐ Ｌ Ｃ 分离纯化得到约２００ ｍ ｇ／ Ｌ 表达量。     

p16抑癌基因和肿瘤

ｐ１６基因（又名ＭＴＳ１,多肿瘤抑制基因）所编码的蛋白是细胞周期蛋白Ｄ／ＣＤＫ激酶的抑制蛋白,在细胞周期的调控中起着重要作用,能和ＣＤＫ４结合,抑制ＣＤＫ４／ｃｙｃｌｉｎＤ复合物的催化活性。当ｐ１６基因发生突变和缺失,就会丧失对细胞分裂的调控,导致细胞的异常增殖,最终形成肿瘤。研究表明：ｐ１６基因的突变和缺失,和许多肿瘤的发生有关。ｐ１６基因是一种新的肿瘤抑制基因。     

外源性Rb基因对平滑肌细胞p21基因表达的影响

应用ＲＴ－ＰＣＲ和免疫组化法测定ｐ２１ｍＲＮＡ及蛋白表达水平;蛋白质印迹法观察Ｒｂ蛋白的磷酸化;流式细胞术分析细胞周期,并以细胞形态观察和β－半乳糖苷酸染色检测细胞衰老。结果发现,外源性Ｒｂ基因导入人脐动脉血管平滑肌细胞后,诱导ｐ２１基因表达,使Ｒｂ主要怍于非磷酸化状态,引起约７０％的细胞生长停滞在Ｇ０／Ｇ１期,平滑肌细胞发生衰老。结果提示,Ｒｂ基因通过诱导ｐ２１基因表达以调节细胞周期和促进细胞衰     

p53基因对人胃癌细胞系恶性生长的影响

以ｐ５３ｃＤＮＡ为探针,用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法对人胃癌细胞系ＢＧＣ８２３进行了检测,发现该细胞中ｐ５３基因存在异常,将可在真核细胞表达的重组野生型Ｐ５３质粒ｐＣ５３－ＳＮ３和突变型ｐ５３质粒ｐＣ５３－ＳＣＸ３,用指质体介导法,分别导入ＢＣＧ８２３细胞,获得了较长时间受Ｇ４１８的多个阳性克隆。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ抑迹法证实阳性克隆细胞中有外源性ｐ５３基因存在。