巴豆油对单纯疱疹病毒诱发小鼠宫颈和/或阴道癌的促进作用

自1966年以来,许多研究表明,阴部单纯疱疹Ⅱ型病毒(HSV-2)感染与宫颈和阴道癌的发生密切相关。这些研究包括:细胞病理学观察;血清流行病学调查;HSV-2感染对体内及体外细胞的转化;转化细胞和宫颈癌细胞内HSV-2痕迹的检测等。为了进一步研究HSV-2感染与宫颈和阴道癌发生的关系及进行实验性治疗和预防,多     

螺旋藻多糖抗单纯疱疹病毒作用的实验研究

在体外进行了钝顶螺旋藻多糖(polysaccharides fromSpirulina platensis,PSP)抗单纯疱疹病毒活性的研究。以不同剂量的PSP分别作用于HSV-1及HSV-2病毒复制周期的各个环节,以病毒半数感染量(TCID50),细胞病变效应(CPE),蚀斑形成单位(PFU),MTT染色细胞保护率(MTT法)作为评价指标,判断PSP的抗病毒效果;FQ-PCR检测PSP抗病毒作用的时效关系。结果表明PSP对Vero细胞毒性极低(TC50为1750μg/mL),对HSV-1及HSV-2均无直接灭活作用,可阻滞HSV-1及HSV-2病毒吸附和抑制感染细胞内病毒的复制,但不影响病毒的释放;FQ-PCR结果显示随着PSP浓度及作用时间的增加,PSP对HSV-1病毒DNA的抑制作用明显增强,具有良好的剂量和时效关系。提示PSP抗HSV-1及HSV-2病毒作用的机制与抑制病毒吸附和感染细胞内病毒的生物合成有关。     

人中性粒细胞多肽HNP1,3体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的作用

体外观察人中性粒细胞多肽1,3(Human neutrophil peptide,HNP1,3)及阿昔洛韦(Acyclovir,ACV)对单纯疱疹病毒Ⅰ型(Herpes simplex virus 1,HSV-1)的抑制作用.以Vero细胞为靶细胞,用各种浓度HN1,3与游离病毒颗粒(直接失活组)及感染病毒后的靶细胞(复制抑制组)进行相互作用,镜下观察各药物对HSV-1致细胞病变效应的抑制作用,并采用ELISA法测定感染48h后药物对HSV-1囊膜糖蛋白分泌的抑制作用.MTT法检测各药物对细胞的毒性作用.结果显示直接失活组中,HNP1,3可使HSV-1的致细胞病变效应减轻,对HSV-1直接失活的50%有效浓度(ECs0)为8.1μg/mL、10.03μg/mL;复制抑制组中,ACV使HSV-1的致细胞病变效应减轻,EC5o为0.68μg/mL.MTT检测结果表明HNP1,3在治疗浓度范围内无明显细胞毒性.以上结果表明HNP1,3除具有较强的抗菌作用和抗人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(Human immunodeficiency virus 1,HIV-1)活性外,还能失活HSV-1病毒颗粒,从而逆转病毒及其蛋白的病毒效应(致细胞病变)和抑制病毒蛋白质的合成.     

Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒的某些生物学特征和用内切酶分型的研究

本实验观察了Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒(简称HSV-1和HSV-2)的空斑特征和对温度的敏感性。病毒接种豚鼠胚细胞3天后,HSV-2形成的空斑较HSV-1的大,边缘也较整齐。两者对热(37℃水浴)灭活无明显差别,但HSV-2对低温(-70℃)的耐受性比HSV-1弱。HSV-1 DNA经EcoRI消化后,在我们的实验条件下,凝胶电泳可分辨出5条清晰的DNA带,而在此分子量范围内,HSV-2仅有两条带;用Hpa Ⅰ消化后,HSV-1有8条以上分辨清晰的带,HSV-2仅有一条可分辨的带。 本研究为HSV-1和HSV-2的分型鉴定、保藏提供了简便、准确的检测手段和实验依据。     

人中性粒细胞多肽HNP1，3体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的作用

体外观察人中性粒细胞多肽1,3(Humanneutrophilpeptide,HNP1,3)及阿昔洛韦(Acyclovir,ACV)对单纯疱疹病毒-Ⅰ型(Herpessimplexvirus1,HSV-1)的抑制作用。以Vero细胞为靶细胞,用各种浓度HNP1,3与游离病毒颗粒(直接失活组)及感染病毒后的靶细胞(复制抑制组)进行相互作用,镜下观察各药物对HSV-1致细胞病变效应的抑制作用,并采用ELISA法测定感染48h后药物对HSV-1囊膜糖蛋白分泌的抑制作用。MTT法检测各药物对细胞的毒性作用。结果显示直接失活组中,HNP1,3可使HSV-1的致细胞病变效应减轻,对HSV-1直接失活的50%有效浓度(EC50)为8.1μg/mL、10.03μg/mL;复制抑制组中,ACV使HSV-1的致细胞病变效应减轻,EC50为0.68μg/mL。MTT检测结果表明HNP1,3在治疗浓度范围内无明显细胞毒性。以上结果表明HNP1,3除具有较强的抗菌作用和抗人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(Humanimmunodeficiencyvirus1,HIV-1)活性外,还能失活HSV-1病毒颗粒,从而逆转病毒及其蛋白的病毒效应(致细胞病变)和抑制病毒蛋白质的合成。     

疱疹病毒Ⅱ型感染SH-SY5Y细胞的生物学效应

目的：探讨疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）感染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y的生物学效应。方法：病毒液接种SH-SY5Y细胞后,用相差和电子显微镜观察感染细胞的形态变化,RT-PCR检测病毒在细胞中的增殖,MTT法检测病毒感染对细胞增殖的影响,流式细胞仪测定感染后的细胞凋亡状况。结果：相差显微镜显示细胞病变,从24～72h,细胞变性、坏死的程度和数量随感染时间延长而增加;电镜结果显示感染24h后,细胞核染色质固缩,出现多核巨细胞,线粒体内嵴紊乱、断裂,出现不同程度的自噬化、溶酶体化、空泡化,并可见大量鹰眼样已包装成熟的病毒颗粒及正在包装的病毒粒子;HSV-2LAT基因RT-PCR扩增表明,病毒能在SH-SY5Y细胞中增殖;凋亡检测显示HSV-2在体外细胞感染中并未使细胞出现凋亡现象;感染后24、48及72h,SH-SY5Y细胞的抑制率分别为11.3%、31.2%和63.1%,与对照组相比均存在显著性差异（P〈0.05）;分别用0.1、1、10MOI的病毒感染SH-SY5Y细胞,上述不同组在24、48、72h时细胞形态变化基本一致,感染结果相似,各组之间病毒毒力无明显差异（P〉0.05）。结论：初步在人神经母细胞瘤细胞株SH—SY5Y中建立了HSV-2感染的细胞模型,并研究了感染对细胞生物性状的影响,为探讨HSV-2的潜伏与激发机制、了解HSV-2的致病机制打下基础。     

HSV-2阴道感染并诱导小鼠阴道粘膜上皮细胞凋亡

最近的报道指出,某些病毒有诱导体外细胞凋亡的作用,借以限制病毒的扩散.为探讨HSV-2在体内诱导细胞凋亡的效果及其形态学特点,用HSV-2 333株感染小鼠阴道,于感染后不同天数处死动物,取其阴道,固定于10%中性福尔马林,TUNEL末端标记染色显示凋亡的细胞,光镜下进行原位观察.结果显示感染后的第1天粘膜上皮内即出现大量的凋亡细胞,第2天至11天凋亡细胞的数量及在上皮内的分布范围达最高水平.早期的凋亡细胞见于感染后所有标本,其核染色质形态及分布似正常细胞,但它被TUNEL标记染成棕黄色;晚期的凋亡细胞亦见于所有标本,其胞核缩小,染色质浓缩并在核周边集聚,核中心空化.载有凋亡细胞的上皮在阴道粘膜上分布很广,最广的可占全阴道上皮的2/3.同时可见HSV-2引起的上皮细胞坏死及疱疹形成,二者均由凋亡细胞包围.凋亡细胞不断地由上皮表面脱落至阴道,未见凋亡小体及吞噬现象.结果提示,HSV-2 333株阴道感染可同时诱导细胞坏死及凋亡,细胞凋亡可能在限制病毒产生子代及限制感染区域扩展起重要作用.     

甘草甜素抗单纯疱疹病毒Ⅰ的实验研究

目的 旨在观察甘草甜素对HSV-1的抑制作用,为临床更为有效的治疗单纯疱疹病毒性脑炎探索新的药物.方法 分体外及体内实验两个部分.体外培养Vero细胞,在病毒吸附Vero细胞后加入甘草甜素,观察空斑形成单位来评价甘草甜素对HSV-1的抑制作用;建立单纯疱疹病毒性脑炎小鼠模型,于小鼠腹腔内给药.通过观察实验组和对照组的小鼠死亡率来评价甘草甜素在体内对HSV-1的抑制作用.结果 甘草甜素能明显抑制病毒所致的空斑形成,IC50为0.56 mM;实验组小鼠的死亡率明显低于对照组.结论 甘草甜素能明显的抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型的复制,能明显降低单纯疱疹病毒性脑炎小鼠的死亡率.     

紫外线对单纯疱疹病毒Ⅱ型灭活作用的研究

单纯疱疹病毒Ⅱ型(以下简称HSV-Ⅱ)与宫颈癌的密切关系以及对正常细胞的转化作用已经肯定。用于HSV-Ⅱ转化试验以紫外线灭活方法为最好。合适灭活剂量的标志是HSV-Ⅱ基本上完全灭活的最小剂量。一般为17—46 erg/mm~2/sec。本试验目的在于找到     

重复感染疱疹二型病毒吴株诱发小白鼠宫颈癌的实验研究

关于疱疹二型病毒(HSV-2)与宫颈癌的关系,从各方面都进行了研究,包括HSV-2感染和宫颈癌的流行病学之间的关系、HSV-2感染对体内和体外细胞的转化、转化细胞和宫颈癌细胞内HSV-2痕迹的检测等。但是就目前取得的进展和有限的     

下调细胞P21WAF1/CIP1基因表达可抑制单纯疱疹病毒Ⅱ型复制

为了揭示细胞P21蛋白在单纯疱疹病毒Ⅱ型（herpes simplex virus type 2, HSV-2）复制中的作用,通过用HSV-2感染和感染前用特异性小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA) 抑制P21基因表达,应用Western 印迹方法检测宿主细胞和病毒蛋白水平,用终点滴定法测定病毒半数组织培养感染量（50% tissue culture infectious dose, TCID50）,以及观察感染细胞的细胞病变效应（cytopathic effect, CPE）等3个方面,揭示细胞P21蛋白水平的变化对病毒复制的影响.结果表明,HSV-2在细胞内复制时可引起P21蛋白水平增高;而用特异性siRNA下调细胞P21基因表达时,可显著地抑制HSV-2 gB蛋白水平,减少培养细胞上清液中病毒TCID50.提示P21蛋白对HSV-2的复制具有重要的作用.     

2型单纯疱疹病毒体外感染周期的研究进展

2型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus type 2,HSV-2)是引起生殖器疱疹的主要病原体。生殖器疱疹主要表现为生殖器和肛周皮肤黏膜疱疹或溃疡,是一种慢性、复发性、难以治愈的性传播疾病,临床治疗多以抑制病毒复制的核苷类药物阿昔洛韦及其衍生物更昔洛韦、喷昔洛韦等为主。这些药物对缓解症状、缩短病程有一定作用,但难以达到根治的目的,长期应用易产生耐药,且对其合并症基本无效。作用于HSV-2其他感染周期的药物成为人类探索的新领域。HSV-2感染宿主细胞是一个复杂的多阶段过程,包括黏附、穿入、核转运、基因组复制、衣壳组装、子代病毒释放等多个步骤,涉及多种细胞和病毒蛋白的活性。本文对HSV-2体外感染周期详细步骤及其分子机制作一综述,以期深入了解其感染机制,并为研制作用于不同感染阶段的抗HSV-2药物提供参考。     

甘草甜素抗单纯疱疹病毒I的实验研究

目的旨在观察甘草甜素对HSV-1的抑制作用,为临床更为有效的治疗单纯疱疹病毒性脑炎探索新的药物。方法分体外及体内实验两个部分。体外培养Vero细胞,在病毒吸附Vero细胞后加入甘草甜素,观察空斑形成单位来评价甘草甜素对HSV-1的抑制作用;建立单纯疱疹病毒性脑炎小鼠模型,于小鼠腹腔内给药。通过观察实验组和对照组的小鼠死亡率来评价甘草甜素在体内对HSV-1的抑制作用。结果甘草甜素能明显抑制病毒所致的空斑形成,IC50为0．56mM;实验组小鼠的死亡率明显低于对照组。结论甘草甜素能明显的抑制单纯疱疹病毒I型的复制,能明显降低单纯疱疹病毒性脑炎小鼠的死亡率。     

细胞MEK1/2蛋白及其相关通路在单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）复制中的作用

基于细胞Raf/MEK/ERK信号通路与病毒复制的关系,应用Western印迹检测 p-ERK1/2蛋白的表达、用终点滴定法测定病毒增殖量（TCID_５０）,以及观察感染细胞的细胞病变效应（CPE）等,揭示单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)复制与 ERK通路的关系. 结果表明,HSV-2的复制可引起细胞ERK通路的活化;用U0126预先抑制ERK通路的活化,或用特异性siRNA敲减MEK1/2基因的表达可显著地抑制病毒复制.提示ERK信号通路以及MEK1/2蛋白对HSV-2的复制具有重要的作用.该研究对进一步阐明细胞ERK通路各激酶蛋白在病毒复制中的作用机制、寻找抗病毒作用靶标等奠定了良好的基础.     

Ⅰ型单纯疱疹病毒感染的细胞培养系统的建立

目的:建立稳定的HSV-1感染的细胞培养系统,为HSV-1感染性皮肤病的基础及临床研究提供稳定的平台。方法:以猴肾细胞(Vero)为繁殖细胞,选择人鼻咽癌上皮细胞(Hep-2)为靶细胞,观察HSV-1在Hep-2株中的致细胞病变效应(CPE)。结果:HSV-1在Vero细胞中能稳定、大量地繁殖;HSV-1感染Hep-2细胞后可出现明显的细胞病变;结论:以Vero为繁殖细胞,Hep-2为靶细胞的稳定的细胞培养系统可作为HSV-1感染性皮肤病的基础及临床研究的平台。     

固相分子杂交技术在植物病毒鉴定和分类研究中的应用

在用斑点杂交试验对属于10个病毒组的44个不同病毒进行鉴定和分类研究中观察到,杂交现象不仅出现在同源病毒之间,也同样出现在相同病毒组或不同病毒组的异源病毒之间。定量的斑点杂交试验对仅有轻微血清学区别的病毒很敏感。在避免竞争和饱和现象对实验结果影响的情况下,检测了番茄丛矮病毒组五个病毒的RNA之间的同源性程度,结果表明,这五种病毒之间的同源性程度与Koenig和Gibbs所做的血清学结果相近。     

携带GFP绿色荧光标记的重组BAC-HSV-1HF株的构建及其子代病毒的特性研究

本研究旨在构建由细菌人工染色体(Bacteria artificial chromosome,BAC)携带的单纯疱疹I型病毒质粒及携带绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)的重组型BAC-HSV-1感染性子代病毒。构建了携带HSV-1同源臂的质粒C223-UL43左臂-UL47右臂。将该质粒线性化后与HSV-1基因组共转染至Vero细胞,通过真核细胞内同源重组产生了含有GFP报告基因的BAC-HSV-1重组病毒,噬斑纯化筛选出阳性重组病毒,并再次感染Vero细胞,Hirt法提取BAC-HSV-1环形基因组并将其电穿孔入DH10B感受态细胞,由PCR和酶切法鉴定BAC-HSV-1质粒。为研究BAC-HSV-1子代病毒的生物学特性,将实验组和对照组细胞分别给予BAC-HSV-1质粒和HSV-1基因组DNA,收取病变细胞的上清液,以MOI=0.1再次感染Vero细胞,半数组织培养感染剂量(50% tissue culture infective dose,TCID50)法测定两组的病毒滴度。PCR和酶切法分别鉴定BAC-HSV-1,结果示BAC-HSV-1构建成功。TCID50法测定实验组和对照组病毒滴度,经统计学分析两组病毒滴度间差异无统计学意义(P>0.05)。本研究成功地构建了真核细胞和原核细胞间穿梭的HSV-1-BAC重组病毒/质粒。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏、激活细胞模型建立

【目的】建立单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)潜伏感染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y及激活的细胞模型。【方法】分别加入20,40,60,80,100,120,140μmol/L的阿昔洛韦(ACV),观察对SH-SY5Y细胞生物性状的影响;在ACV存在的情况下,分别将含有0.1、1、10、100MOI的病毒液接种SH-SY5Y细胞,运用相差显微镜观察病毒对细胞的影响,确定潜伏的建立;分别用41℃、42℃、43℃、44℃、45℃加热0.5h、1.0h、1.5h、2.0h、2.5h,观察加热时间及温度诱导HSV-2在SH-SY5Y细胞中激发的最适条件;加入25、50、75、100、125μmol/L福斯高林(Forskolin)诱导病毒在细胞中激活,探讨诱导的最佳浓度;对HSV-2在SH-SY5Y细胞中的潜伏及激发进行验证并测序;运用相差显微镜观察病毒激活后细胞形态的变化。【结果】60μmol/LACV的存在最适合HSV-2在SH-SY5Y细胞中建立潜伏状态;1-10MOI的感染量均能取得较好的病毒潜伏及激发效果;通过观察,病毒在SH-SY5Y细胞中最长可潜伏14d;43℃,1.5h及75μmol/LForskolin均为诱导病毒潜伏激发的最佳条件;相差显微镜观察病毒激发后细胞病变,从24h到72h,细胞变性、坏死的程度、数量随感染时间延长而增加;HSV-2LAT、gG基因PCR扩增及电泳结果,证实病毒在细胞中的潜伏及激活。【结论】初步在人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y上建立了HSV-2潜伏感染及激活的细胞模型,为下一步研究HSV-2的潜伏与激发机理,了解HSV-2的致病机制打下基础。     

一种1型单纯庖疹病毒载体系统的建立

1型单纯疱疹病毒（HSV-1）作为溶瘤病毒和病毒载体的研究已有很长的历史. 本研究利用细菌人工染色体技术建立了一种HSV-1载体系统. 首先,将HSV-1内部反向重复序列（internal inverted repeat sequences, IR）两侧的片段克隆入pKO5获得穿梭质粒pKO5/BN,其电转含pHSV-BAC的大肠杆菌后筛选获得删除IR区重组DNA的 pHSVΔIR-BAC. pHSVΔIR-BAC转染Vero细胞获得删除IR区的重组病毒HSVΔIR（MH1001）.上述pKO5/BN和含pHSVΔIR BAC的大肠杆菌构成了HSV-1载体系统. 利用该系统获得了表达绿色荧光蛋白EGFP的重组病毒HSVΔIR/EGFP（MH1002）.MH1001和MH1002在感染的Vero细胞中增殖水平略低于野生型HSV-1,但无显著差异|Western印迹检测表明,重组病毒早期蛋白质ICP0、ICP4、ICP8、ICP22、ICP27在感染细胞中的表达水平下降|免疫荧光及激光共聚焦检测表明,重组病毒与野生型病毒均存在于细胞质中.以上结果表明,删除IR区的重组HSV-1保留了复制能力,能够携载并表达外源基因,建立的HSV-1载体系统可用于构建携载外源基因的复制型重组HSV-1.     

人精浆,厌氧菌培养液在HSV—2诱导宫颈癌中的作用

本实验应用HSV-Z诱导小鼠宫颈癌的动物模型,发现人精浆或厌氧菌培养液只引起宫颈上皮轻度增生,二者混合(SB)不仅可致宫颈癌(11.5％),而且使HSV-2诱癌率从23.1％提高到50％,同时发现SB具有抑制机体细胞免疫功能的作用,抑制ConA刺激的淋巴细胞转化及NK细胞的活性。上述结果提示SB具有促癌作用,因而也讨论了SB促癌的可能机制。