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本研究旨在构建由细菌人工染色体(Bacteria artificial chromosome,BAC)携带的单纯疱疹I型病毒质粒及携带绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)的重组型BAC-HSV-1感染性子代病毒。构建了携带HSV-1同源臂的质粒C223-UL43左臂-UL47右臂。将该质粒线性化后与HSV-1基因组共转染至Vero细胞,通过真核细胞内同源重组产生了含有GFP报告基因的BAC-HSV-1重组病毒,噬斑纯化筛选出阳性重组病毒,并再次感染Vero细胞,Hirt法提取BAC-HSV-1环形基因组并将其电穿孔入DH10B感受态细胞,由PCR和酶切法鉴定BAC-HSV-1质粒。为研究BAC-HSV-1子代病毒的生物学特性,将实验组和对照组细胞分别给予BAC-HSV-1质粒和HSV-1基因组DNA,收取病变细胞的上清液,以MOI=0.1再次感染Vero细胞,半数组织培养感染剂量(50% tissue culture infective dose,TCID50)法测定两组的病毒滴度。PCR和酶切法分别鉴定BAC-HSV-1,结果示BAC-HSV-1构建成功。TCID50法测定实验组和对照组病毒滴度,经统计学分析两组病毒滴度间差异无统计学意义(P>0.05)。本研究成功地构建了真核细胞和原核细胞间穿梭的HSV-1-BAC重组病毒/质粒。 相似文献
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旨在构建HSV-1HF株的扩增子载体,研究其在不同血清型HSV辅助下的包装通用性。经酶切HF株的BAC-HSV-1,获得oriS和pac元件并测序。以pSilencer2.0-U6为骨架,以DsRed为报告基因构建HSV-1HF株的扩增子载体,利用脂质体2000转染扩增子载体至Vero细胞,分别应用HSV-1HF株和HSV-2HG52辅助HSV-1扩增子载体进行包装,待产生细胞病变效应后取上清,再次感染Vero细胞,观察Vero细胞内红色荧光蛋白表达情况。本研究首次构建了HSV-1HF株的扩增子载体,鉴定了HSV-1HF株oriS和pac元件,HSV-1HF株扩增子载体可以被HSV-1HF株和HSV-2HG52株包装并扩增。 相似文献
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