阴沟肠杆菌Tn5—nifA重组质粒的构建及其nifA的表达分析

构建的生组质粒ＰＢＦ１０１带有阴沟肠植菌Ｅ２６固氮基因ｎｉｆＡ片段,该质粒具有广泛宿主范围接合转移特性和转座子Ｔｎ５的转座作用。验证了Ｅ２６ｎｉｆＡ产物能激活肺炎克氏杆菌ｎｉｆＨ启动子的表达。解除氨对固氮酶合成的阻遏作用。发现当ＰＨＦ１０１引入自生固氮催娩克氏杆菌ＮＧ１３后,可观罕到固氮酶的组成型生成,同时在３９℃高温条件下的细菌仍能检测到部分固氮活性。     

阴沟肠杆菌(nifL－Ac)工程菌株的构建

采用基因定位突变的方法,在体外把来自ｐＢＲ３２２ 的四环素抗性（Ｔｃｒ） 基因片段插入由ｐＳＴ１１４２ 质粒所携带的阴沟肠杆菌ｎｉｆＬ基因３’端的Ｓｍａ Ⅰ位点,再经细胞体内同源基因片段的重组交换,选择获得了在染色体上ｎｉｆＬ突变的阴沟肠杆菌Ｅ１２ 和Ｅ１３ ,两者Ｔｃｒ 基因插入ｎｉｆＬ的转录方向相反。经分析显示,Ｅ１３（ ｎｉｆＬ－ ） 由于Ｔｃｒ 基因插入后,在ｎｉｆＡ上游产生具有启动子功能的核苷酸序列（ＴＴＴＣＡＴＡ） ,激活ｎｉｆＡ 的表达。当Ｅ１３ 和Ｅ１２ 被引入多拷贝组成型ｎｉｆＡ 质粒ｐＢＦ１０１后,在有氨条件下ｎｉｆ 基因去阻遏表达,呈高的固氮酶活力,与野生型Ｅ２６（ｐＢＦ１０１） 比较,其比活力提高近１ 倍     

水稻对耐氨固氮工程菌株的响应

耐氨固氮工程菌（下称工程菌）催娩克氏杆菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ＮＧ１３９０和阴沟肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｃｌｏａｃａｅ）Ｅ２６１３的基因组带有组成型ｎｉｆＡ,其固氮酶的生成不受氨的阻遏,因此在有氨条件下具有固氮能力。接种固氮菌分别在两个水稻品系,即籼稻品种Ｃ５４４４和粳稻品种秀水－０４进行试验。水稻种植在灭菌土壤的塑料桶,生长至扬花后期取样分析表明,接种固氮菌能促进水稻的生长和植株含氮量的增加。接种工程菌ＮＧ１３９０的植株其生物量、总氮和固氮率（Ｎｄｆａ％）超过接种野生型ＮＧ１３的水稻。Ｅ２６１３接种Ｃ５４４４也获得类似的结果。应用１５Ｎ同位素稀释法证明了固氮菌接种水稻形成的联合固氮体系,存在细菌的固氮作用,而植株中氮素成分的增加可能来自细菌固定的氮。     

异源nifA^C对根癌土壤杆菌nif基因表达的调节作用

用三亲水交配方法分别将载有褐球固氮菌（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒｃｈｒｏｏｃｏｃｃｕｍ）呈组成型表达的ｎｉｆＡＣ的质粒ｐＣＫ５和肺炎克氏杆菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）含有ｎｉｆＡ＾Ｃ和ｎｉｆＡ－ｎｔｒＣ基因的质粒ｐＣＫ３,ｐＳＺ３６和ｐＳＺ２３－ＣＡ导入根癌土壤杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｎｅｆａｃｉｅｎｓ）Ｃ５８／ｐＧＶ３８５０所得转移接合子的生长速率和野生型相似。在１０ｍ     

巴西固氮螺菌 Yu62 draTG 基因启动子区域的核苷酸序列及其功能分析

对巴西固氮螺菌ｄｒａＴＧ上游区域进行了全序列分析,结果表明该区域除了编码部分ｎｉｆＨ基因外（ｎｉｆＨ与ｄｒａＴＧ转录方向相反）,不编码任何其它已知的基因。但在该区域发现了一些可能的调控序列,它们包括上游激活序列（ＵＡＳ）、下游启动子组份（ＤＰＥ）和富Ａ＋Ｔ区。这说明：ｎｉｆＨ与ｄｒａＴ间的区域可能主要起调控功能而非编码功能;ｄｒａ操纵元（ｏｐｅｒｏｎ）的启动子很可能是ＲｐｏＮ－依赖型。用ｐＡＦ３００做载体,构建了ｄｒａＴ∷ｃａｍ转录融合质粒ｐＡＴ１,并通过检测Ｃｍｒ以检测ｄｒａＴ在大肠杆菌和巴西固氮螺菌中的表达,结果表明ｄｒａＴ在ＬＤ丰富培养基上,好氧条件下,只在巴西固氮螺菌中才表达。这说明,ｄｒａＴ的转录需要某种大肠杆菌中没有的因子,同时也表明ｄｒａＴＧ上游区域有启动子功能。利用启动子探针质粒载体ｐＣＢ１８２,构建了ｄｒａＴ∷ｌａｃＺ转录融合质粒ｐＣＴ１。在大肠杆菌中测定肺炎克氏杆菌ＮｉｆＡ对ｄｒａＴ∷ｌａｃＺ的转录激活作用。结果表明ｎｉｆＡ并不参与ｄｒａＴ的转录调控。     

日本血吸虫26kD抗原基因在BCG中的表达

研究了外源基因日本血吸虫２６ｋＤ抗原（Ｓｊ２６ＧＳＴ）在卡介苗（ｂａｃｉｌｕｓＣａｌｍｅｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ,ＢＣＧ）、耻垢分枝杆菌（Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）和大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中的表达．运用重组ＤＮＡ和聚合酶链反应（ＰＣＲ）等分子生物学技术,以表达Ｓｊ２６ＧＳＴ的Ｅ．ｃｏｌｉｐＧＥＸ衍生质粒为模板,经ＰＣＲ得到编码Ｓｊ２６ＧＳＴ的全长ｃＤＮＡ片段．将其按正确的阅读框顺序,克隆到人结核杆菌热休克蛋白（ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎ,ＨＳＰ）７０的启动子下游,再将ＨＳＰ７０启动子和Ｓｊ２６ＧＳＴ基因一起亚克隆到Ｅ．ｃｏｌｉ－分枝杆菌穿梭质粒ｐＢＣＧ－２０００中,得到Ｅ．ｃｏｌｉ－分枝杆菌穿梭表达质粒ｐＢＣＧ－Ｓｊ２６．ｐＢＣＧ－Ｓｊ２６电转化入ＢＣＧ和Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓｍｃ２１５５中表达Ｓｊ２６ＧＳＴ抗原,所表达的天然重组Ｓｊ２６ＧＳＴ（ｒＳｊ２６ＧＳＴ）为可溶性蛋白,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上分子量为２６ｋＤ处可见明显的表达蛋白带．其表达量分别占ＢＣＧ和Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ菌体总蛋白的１５％和１０％．可见,Ｓｊ２６ＧＳＴ基因能在ＢＣＧ中高效表达．     

阴沟肠杆菌基因nifA经转座子Tn5整入催娩克氏杆菌NG13的基因组

根际固氮细菌与禾谷类作物如水稻、小麦、玉米等进行联合固氮,能使作物有不同程度的增产（APp等1980,Watanable和hn1984）。水稻是世界上主要粮食作物之一,因此,研究增强水稻根际细菌的联合固氮作用,吸引着科学家们的兴趣。催娩克氏杆菌（KMFithemp）NG13与水稻能进行有效的联合固氮（Yoo等1986）。但是在有氨的生长条件下,细菌的固氮活力受到阻遏。ZhU等将带有nifA的重组质粒引进阴沟肠杆菌EZ6后,观察到有氨存在条件下固氮酶组成型生成。我们实验室构建了具有广泛接合转移特性的阴沟肠杆菌Tns－nifA嵌合质粒PBF101,基因nif…     

nifH—gfp表达载体的构建及其在Enterobacter gergoviae 57—7中的表达

采用ＰＣＲ技术,从ＧＦＰｍｕｔ２中扩增得到三位点突变的报告基因ｇｆｐＳ６５Ｔ、Ｖ６８Ｌ、Ｓ７２Ａ片段,并将它和肺炎克氏杆菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（Ｓｃｈｒｏｅｅｔｅｒ）Ｔｒｅｖｉｓａｎ）Ｍ５ａ１的固氮酶结构基因ｎｉｆＨ的启动子和其起始密码子相融合,获得ｎｉｆＨ－ｇｆｐ表达载体ｐＭＧＦＰ２;再在ｐＭＧＦＰ２上插入卡那霉素抗性基因,获得可在日勾维肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ     

信号肽疏水性的提高促进青霉素G酰化酶分泌

设计和合成了一段具有连续１０仆亮氨酸强疏水核心的信号肽（ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｓｉｇｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ,ＡＳＰ）,由ＥｃｏＲＩ－ＫｐｎＩ位点融合到青霉素Ｇ酰化酶（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ Ｇａｃｙｌａｓｅ,ＰＡＣ）信号肽（ｗｉｌｄ ｔｙｐｅｓｉｇｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ,ＷＴＳＰ）的－４Ｐｒｏ位点,分别构建了ＰＡＣ表达质粒：ｐＫＫｐａｃ△ＳＰ,ｐＫＫｐａｃＷＴＳＰ,ｐＫＫｐａｃＡＳＰ,ｐＥＴｐａｃ     

阴沟肠杆菌nirL对nirA蛋白激活固氮基因表达的影响

通过基因定位突变的方法,构建色肠杆菌Ｅ２６染色体上基因ｎｉｒＬ突变菌Ｅ１１和Ｅ１２,并对其固氮特性进行分析。结果显示,当细菌在有ＮＡ＾＋４的条件下,ｎｉｒＬ作为固氮基因的负调节因子,可能是通过ｎｉｆＬ蛋白与ｎｉｆＡ蛋白之间的相互作用。形成某种复合物,导致ＮｉｒＡ的失活,从而关闭ｎｉｆ基因的表达。高温条件下（３７℃）,ｎｉｒＬ并不参与对ｎｉｆ基因表达的阻遏作用,但是ｎｉｆＬ的突变影响ＮｉｆＡ激活ｎｉ     

音乐治疗效应的动物实验研究

近年来国内外关于音乐治疗效应的动物实验研究认为：音乐能影响动物的情绪;音乐还对动物的免疫功能、学习及记忆能力、以及动物的神经系统结构和功能等均有一定影响。该领域的研究有利于深入探索音乐疗法的作用机理。     

壳聚糖固定化木瓜蛋白酶的研究

以自制的壳聚糖作为载体,用戊二醛作交联剂,优化了固定化条件,研制成壳聚糖固定化木瓜蛋白酶。其活性回收率达到42—53％,操作半衰期达到一个月以上,对热、乙醇以及尿素的稳定性有很大的提高,Km值为0.67×10~2mg/mL,最适温度65—70℃,最适pH8.0,能使啤酒中的蛋白质浓度从56.5mg/L减少到2.7mg/L,可以消除啤酒的低温混浊现象。     

蚕丝固定化脂肪酶的研究

研究了蚕丝固定化脂肪酶的工艺条件,并考察了固定化脂肪酶的稳定性。试验结果表明：蚕丝与对-β-硫酸酯乙砜基苯胺(SESA)进行反应的最适条件是PH=10．8,SESA：2．0g／g蚕丝,反应生成的对氨基苯磺酰乙基蚕丝(ABSE-蚕丝)经重氮化后与脂肪酶偶联的最适条件是：pH=7．5,偶联时间>10h。加酶量为168～308u／g蚕丝时,所得固定化脂肪酶活力为106～160u√g蚕丝．此时固定化冀的活力回收率较高(>52％)。固定化脂肪酶稳定性较高．其操作半衰期约为250h。     

Effects of light on size-selectivity of kokanee feeding on Daphnia

Planktivory by fingerling kokanee Oncorhynchus nerka feeding on Daphnia became more size-selective with increased illumination (0·1 v . 15 lux). The average difference in length of Daphnia ( D. pulex and D. galeata ) in trial arenas before and after kokanee feeding was 0·107 mm ( P  = 0·0007) at 0·1 lux and 0·371 mm ( P  < 0·0001) at 15 lux.     

若羌红枣多糖提取方法的研究

目的:比较研究几种提取若羌红枣多糖的方法.方法:通过正交实验设计研究影响若羌红枣多糖提取的诸因素如提取料液比、温度、提取时间、提取次数等,确定条件范围,优化提取条件,得到提取若羌红枣多糖的最佳工艺条件.结果:热水法提取红枣糖的最佳条件:提取温度100℃、料液比1:16、提取时间4h,提取1次;酶法提取红枣多糖提取的最佳条件:pH4.5,温度60℃、时间1h,酶用世0.03%;碱法提取红枣多糖的对佳条件:Na2 CO3,温度80℃、时间3h,料液比1:20.结论:三种提取方法以酶提取法的效率最高,碱提取法次之,热水提取法的效率最低.     

热带气旋对红树林的影响研究进展——基于文献计量分析

红树林在防风消浪、促淤保滩、固岸护堤等方面发挥重要的作用,是抵御台风、风暴潮、海岸侵蚀等自然灾害的重要天然屏障。热带气旋是红树林面临的最主要自然威胁之一,削弱了红树林对自然灾害的抵御及生物多性维持等功能发挥。然而,尽管热带气旋对红树林的影响日益受到全球的广泛关注,但缺乏对该领域研究进展的系统分析和总结。以Web of science核心集数据库为数据源,利用CiteSpace软件对1995—2021年间热带气旋对红树林影响研究进行文献计量分析和可视化图谱绘制,以厘清该领域研究的现状、趋势和热点,并揭示未来的发展方向。研究表明：（1）该领域研究年发文量随时间处于波动上升的趋势,尤其2013年后迅速增加,表明该领域的研究日益受到重视;（2）美国、澳大利亚和印度等国家在该领域的研究走在前列,美国的中介中心性最高,其次是德国,美国广泛地与德国、法国、日本等许多国家有密切合作;（3）美国佛罗里达、加勒比地区、澳大利亚北部和印度南部等是当前研究的热点区域;（4）研究热点随时间推移而不断发展,从红树林植被的干扰损害逐渐发展到固碳储碳、海岸防护等功能的影响。全球变化背景下热带气旋对红树林的影响、红树林对热带气旋干扰的弹性、基于遥感和大数据处理的模型模拟等日益受到关注,量化热带气旋对红树林功能的影响、探明热带气旋与海平面上升的关系及对红树林影响、构建完善的观测体系数据集等将是未来研究的重要方向。研究对长期关于热带气旋对红树林影响的研究进展进行定量和可视化分析,可为预测热带气旋对红树林的影响和风险、及减缓和应对其风险等研究提供借鉴参考。     

芦笋对高脂饮食小鼠体质量的影响

目的探究芦笋对高脂饮食小鼠体质量的影响。方法将实验动物随机分为正常组、高脂饮食组、高脂饮食低剂量芦笋组、高脂饮食中剂量芦笋组、高脂饮食高剂量芦笋组、高脂饮食阳性对照组。其中正常组喂食正常饲料,其余组喂食高脂饲料。分别灌胃蒸馏水(正常组、高脂饮食组)、芦笋1.05g/(kg·d)(高脂饮食低剂量芦笋组)、芦笋2.10g/(kg·d)(高脂饮食中剂量芦笋组)、芦笋4.20g/(kg·d)(高脂饮食高剂量芦笋组)、降脂理肝汤1.19g/(kg·d)(高脂饮食阳性对照组),每天2次,每次0.35mL。比较分析各组小鼠的体质量变化,同时对各组之间的雌性小鼠和雄性小鼠体质量变化进行对比。结果随饲养时间的增加,服用芦笋后的三组小鼠体质量均低于高脂饮食组,但与高脂饮食组相比差异无统计学意义(P0.05)。高脂饮食低剂量芦笋组、高脂饮食中剂量芦笋组、高脂饮食高剂量芦笋组小鼠的体质量变化率低于高脂饮食组,差异无统计学意义(P0.05)。对各组之间的雌性小鼠和雄性小鼠体质量变化进行对比可以发现雄性小鼠的体质量变化大于雌性小鼠的,差异有统计学意义(P0.05)。结论芦笋能降低高脂饮食小鼠的体质量,雄性小鼠和雌性小鼠的体质量变化存在差异。     

丹皮酚对过氧亚硝基阴离子致大鼠成骨细胞分化抑制的影响

探讨丹皮酚（Pae）拮抗过氧亚硝基阴离子（ONOO^-）对体外培养大鼠成骨细胞分化的影响。用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,采用淬灭流动反应方法体外制备ONOO^-,以不同终浓度加入成骨细胞培养体系,在作用不同时间后,用对硝基苯二钠动力学（PNPP）法检测细胞内碱性磷酸酶（ALP）的活性,用Lowry法测定蛋白含量,并以不同终浓度Pae消除ONOO^-（1000μmoL/L）对成骨细胞分化的影响。结果显示,不同浓度的ONOO^-（50-1000μmoL/L）均能抑制碱性磷酸酶的活性,影响分化;高浓度的丹皮酚（10^-3-10^-6mol/L）能消除ONOO^-（1000μmoL/L）对碱性磷酸酶活性的抑制,拮抗ONOO^-抑制成骨细胞分化的作用。     

论心理对生理的影响和作用

本文阐述了心理对生理的能动作用。在一定的条件下,人的心理可影响其生理功能,两者互为因果、相互影响。生理是心理活动的物质基础,心理是其生理的驱动力和标志。本文论述了精神、情绪、意念、信念、暗示等心理活动对生理的影响和作用及中医论心理对生理的作用,中医利用情志疗法的理论达到心理对生理趋向健康的作用。同时论证了肠道菌群通过心理间接影响生理功能,通过微生态制剂调节肠道菌群的微生态平衡,可改善患者的神经症状,使之心理活动达到最佳状态,进而使人的生理趋向健康。     

放牧对草场植被动态的影响

放牧对草场植被动态的影响吴德东,周景荣,朱德华,刘淑玲（辽宁省固沙造林研究所,章古台１２３２０３）王志海,马占信,赵建平（阜新市阿尔乡畜牧场,１２３２０４）ＩｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆＧｒａｚｉｎｇｏｎＶｅｇｅｔａｔｉｏｎＤｙｎａｍｉｃｓｏｎＰａｓｔｕｒｅ...