在中国发现的异常血红蛋白的化学结构研究

1957年,Ingram首次应用“指纹图谱法”(高压电泳和层析双向分离法)测定了HbS的化学结构。二十多年来,异常血红蛋白结构分析技术不断改善,迄今世界范围内已经鉴定了化学结构的异常血红蛋白达400多种。在国内,1979年上海市儿童医院医学遗传研究室发表了血红蛋白结构分析技术,以及HbS,Hb Siriraj和HbE的化学结构分析结果。以后,又有其它异常血红蛋     

高原鼢鼠组织中透明质酸提取工艺及分子表征

旨在建立高原鼢鼠组织中透明质酸(Hyaluronic acid,HA)提取工艺。采用单因素试验确定粗提、酶解和除杂等工艺的最佳条件,通过响应面法进一步优化粗提和酶解工艺条件。通过红外分光光度法确定HA的分子结构,Bitter-Muir法确定其葡萄糖醛酸的含量,黏度法和体积排阻色谱法确定透明质酸的分子量。高原鼢鼠最佳粗取工艺∶液料比4 m L/g(水/动物组织,V/W),提取温度26℃,提取时间1.6 h;最佳酶解工艺:酶解温度37℃,p H8.7,加酶量0.7%(1∶250胰蛋白酶/动物组织,W/W);最佳除杂工艺为:氯苯体积20%(氯苯/HA水溶液,V/V),以3倍体积95%乙醇沉淀,以7%活性碳(活性碳/HA水溶液,W/V)除杂,透析时间3 h。在此工艺条件下,每500 g高原鼢鼠组织可得到(144±3.61)mg HA粉末。平均回收率为72.73%。红外图谱显示提取物具有与Sigma公司的HA标准品一致的吸收峰,葡萄糖醛酸的质量分数为45.60%,蛋白质含量为0.11%,其分子量达到3×106 Da。本工艺提取的高原鼢鼠组织来源的HA回收率好,纯度高;高原鼢鼠组织中HA分子量大,含量高。     

乙醇-酶体系预处理结合水提法提取灵芝中β-葡聚糖的研究

采用乙醇-酶预处理体系,结合水提法较系统地研究了灵芝子实体中β-葡聚糖的提取技术。结果表明,乙醇-酶体系预处理的关键参数为:乙醇质量分数60%(V/V),加酶量1.5%(M/V,g/m L)、酶解温度45℃、酶解p H8.0;在乙醇-酶体系预处理的基础上,进一步采用单因素试验和Box-Benhnken试验设计与响应面分析法对灵芝子实体中β-葡聚糖的热水提取工艺进行了优化。结果显示水提温度、提取时间、水料比3个因素及水提温度与水料比二者的交互作用对β-葡聚糖的提取有显著影响。经优化后获得3个核心因素的最佳水平为:提取温度80℃、提取时间2.5h、水料比35:1。在乙醇-酶预处理结合水提取条件下,灵芝子实体中β-葡聚糖的提取得率可达0.412mg/g,是传统无水乙醇回流预处理结合水提法提取β-葡聚糖得率的2.1倍。本研究为灵芝β-葡聚糖的进一步提取放大试验奠定了技术基础。     

花蚬酶解物清除羟自由基作用研究

探讨了不同蛋白酶酶解花蚬蛋白所得酶解物对Fenton体系产生的羟自由基(.OH)的清除效果,然后进行Sephadex G-25凝胶柱分离酶解产物中的抗氧化活性肽,并测定活性肽相对分子质量分布。结果表明:木瓜蛋白酶在50℃、酶解30 min、pH=7.5、酶质量分数0.15%、m(底物)∶m(水)=1∶2的水解条件下,酶解物对羟自由基的清除效果最佳,清除率为86.9%;胰蛋白酶在温度55℃、酶解时间85 min、pH=8.0、酶质量分数0.30%、m(底物)∶m(水)=1∶2的水解条件下,酶解物对羟自由基清除效果最佳,清除率为89.5%。木瓜蛋白酶酶解物在最大洗脱峰时,清除率为84.73%,在最大峰处酶解物中活性肽的相对分子质量为5.68×103;胰蛋白酶酶解物有两个洗脱峰,在最大洗脱峰处分离组分对羟自由基的清除率很低,在较小洗脱峰处,其清除率为88.49%,该峰处活性肽的相对分子质量为1.165×104。     

高速逆流色谱分离雷公藤中的雷酚内酯异构体

利用高速逆流色谱法从雷公藤植物粗提物分离得到一个化合物.两相溶剂体系为正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水(2∶3∶3∶2,V/V/V/V),水相作流动相,有机相作固定相.经单晶X-衍射分析确定该化合物为雷酚内酯异构体.晶体参数为:晶体为正交晶系,空间群为P2(1)2(1)2(1);晶胞参数为:a=0.71913(10) nm,...     

镰刀形红细胞的形成

镰刀形红细胞贫血症是一种严重的溶血性疾病,其特点是在氧分压低的情况下,红细胞就由正常的双凹圆饼状变成镰刀形。产生镰刀形细胞贫血症的根本原因是基因突变,导致转录、翻译错误,使血红蛋白分子的β多肽链上,第六位的谷氨酸被缬氨酸代替,这一个氨基酸分子的改变是怎样引起红细胞形成镰刀状的呢? 从蛋白质分子的一级结构看,正常血红蛋白(HbA)与镰刀形红细胞血红蛋白(HbS)的差异,是位于β链N端第六位上的氨基酸残基不同,其氨基酸残基顺序如下: HbA:缬-组-亮-酷-脯-谷-谷-赖…… HbS:缬-组-亮-酪-脯-缬-谷-赖……谷氨酸的侧链基团带负电荷,缬氨酸的侧链基     

糖化血红蛋白与糖尿病视网膜病变黄斑区厚度的关系

目的:研究早期糖尿病视网膜病变患者黄斑区视网膜厚度与相关生化指标糖化血红蛋白(HbA1C)的关系。方法:糖尿病组20例40眼,男12例,女8例;糖尿病病程为5~10年;对照组20例40眼,男14例,女6例,应用光学相干断层扫描(OCT)测量黄斑区视网膜厚度,应用相关生化仪检测糖尿病组的糖化血红蛋白比(HbA1C)。比较两组黄斑区视网膜的厚度,包括黄斑中央厚度(CPT),黄斑中心凹下厚度(SCMT),黄斑容积(TMV),分析糖尿病组黄斑区厚度与相关生化指标的HbA1C关系。结果:糖尿病组所选患者黄斑区厚度比正常组大t=4.0772(P0.01),黄斑区视网膜厚度与糖化血红蛋白(HbA1C)比呈正相关t=3.927(P0.05)。结论:对于糖尿病视网膜病变的患者,检测糖化血红蛋白(HbA1C)变化,有利于预测早期糖尿病视网膜病变并发症的发生。     

复合酶预处理法对银杏叶总萜内酯提取率的影响

为研究复合酶预处理法对银杏叶总萜内酯浸出率的影响。本文采用单因素实验对银杏叶酶解预处理过程中的酶种类、酶用量、酶解时间、酶解温度、p H值五个关键因素进行探索,酶解后用20%乙醇-水溶液对银杏叶酶解液进行回流提取,LX-5型大孔吸附树脂对提取液进行纯化,浓缩干燥得银杏叶提取物产品。高效液相色谱法检测其总萜内酯含量。结果表明,银杏叶酶解预处理法的最佳工艺为:复合酶(纤维素酶∶果胶酶=1∶1),用量为银杏叶的1/300、酶解时间4.0 h、酶解温度50℃、初始p H值4.0。在该工艺条件下获得的银杏叶总萜内酯提取率为0.55%,银杏叶提取物中总萜内酯含量为8.96%,高于银杏叶提取物国际商务标准(总内酯含量≥6%)。说明复合酶预处理条件下银杏叶总萜内酯提取率高,研究为工业化生产高质量银杏叶提取物提供了理论依据。     

pH-区带精制逆流色谱分离高F值寡肽新技术研究

高F值寡肽是一种由2～8个氨基酸组成的生理活性肽.本研究采用胃蛋白酶和α-胰凝乳蛋白酶对草鱼蛋白进行了两步酶解,高效液相色谱对酶解液进行了肽谱分析,以制备改善肝性脑病的高F值寡肽.结果表明,草鱼蛋白酶解液中含有高支低芳氨基酸的寡肽组分,开发一种pH-区带精制逆流色谱分离新技术,所用体系为甲基叔丁基醚:正丁醇:乙腈:水(2:2:1:5,、V/V/V/V),上相中加入20 mM三乙胺和20%磷酸二(2-乙基己基)酯(DEHPA)作为固定相,下相分两部分,分别加入10 mM HCl和20 mM HCl作为流动相,进行梯度洗脱.成功地对酶解液中的混合组分进行了分离,得到了5个高F值(F>20)的分离组分,估测其F值(F=OD214nm/DD280nm)高达24.7～36.4.该结果为利用低值鱼蛋白酶解制备功能性活性肽提供了新的制备方法.     

琼胶酶酶解2种紫菜及酶解成分分析

研究琼胶酶对坛紫菜和条斑紫菜的降解作用,以降解获得的还原糖为指标,通过正交试验获得酶解的最佳工艺:料液比为1∶30(V/V),酶与底物比4.0∶2(m L/g),温度38℃,反应时间3 h。在此条件下制备坛紫菜和条斑紫菜酶解液,以两种紫菜酶解前原液作为对照,对其成分进行测定比较。结果表明:坛紫菜和条斑紫菜均可被琼胶酶有效降解,降解后总糖、还原糖、氨基酸态氮、游离氨基酸及可溶性固形物含量均明显增加,尤以总糖和还原糖的增加量最为突出,分别为43.68 mg/g和14.87 mg/g;蛋白质、灰分在酶解前后含量变化不大;根据各物质含量测定结果,坛紫菜的酶解效果优于条斑紫菜,条斑紫菜的呈味氨基酸含量优于坛紫菜,具有较好的风味。     

中国人血红蛋白New York的研究

本文报告在中国大陆发现的10个快速异常血红蛋白家系的研究结果,这种异常血红蛋白的电泳迁移率属于K型,血红蛋白稳定性轻度降低,血红蛋白变型的结构分析,包括珠蛋白肽链的分离,氨基乙基化β链的酶解和指纹分析,以及异常肽段的氨基酸组成和顺序测定,证实其β链113位(G15)的缬氨酸被谷氨酸替代,称为血红蛋白New York(α_2β_2~((?)23(G15)Val→Glu)) 在10个家系的调查中共发现35例Hb New York患者,他们都没有临床症状。其中2例是Hb New York和α~O地中海贫血基因的双重杂合子,血红蛋白New York的含量达90％以上;其余患者都尾Hb New York杂合子,血红蛋白New York含量大约50％。从血红蛋白New York的地理分布可以看出,这种异常血红蛋白在我国南方发生频率较高,接近0.4％。Q##原图像不清晰     

在包头地区汉族中检出的一种快泳血红蛋白——血红蛋白包头(Hb Paotow)

1.在包头市约1,000名汉族中,发现一例快泳异常血红蛋白。2.家族调查结果表明,这种血红蛋白为遗传变异产物。3.分子杂交结果证明其为p链异常。4.这种血红蛋白在碱性pH下的电泳速度,是位于HbA与HbH之间。5.进行酸性琼脂电泳时,它泳向阴极,速度近似HbF。6.这种血红蛋白的紫外区吸收光谱,与HbA及HbF都不一样。7.鉴于它与已知血红蛋白都不相同,故命名为血红蛋白包头(Hb Paotow)以示区别。     

连钱草药材的高效毛细管电泳指纹图谱研究

建立了不同产地连钱草药材的高效毛细管电泳(HPCE)指纹图谱,并进行了比较。连钱草药材采用体积分数75%乙醇蒸馏提取;采用毛细管区带电泳法制定指纹图谱,电泳条件如下:未涂层融熔石英毛细管50μm I.D.×375μm O.D.(总长62 cm,有效长度53.5 cm),电泳缓冲液为含体积分数15%乙腈的50 mmol.L-1硼酸缓冲液(pH9.2),检测波长278 nm,操作电压25 kV,柱温25℃;以对乙酰氨基酚为参照物,建立了连钱草药材的数据化指纹图谱(相对迁移时间和相对峰面积)。结果表明:5种连钱草药材(4个产地和对照药材)具有16个共有指纹峰,不同产地连钱草药材指纹图谱的峰重叠率都低于60.3%,共有峰相对峰面积及8强峰均差异较大;连钱草药材的主要化学成分种类和质量分数均因产地不同而有差异;HPCE指纹图谱法具有较好的稳定性、精密度和重现性,简便,快速,可作为连钱草药材的质量控制方法。     

在包头地区汉族中检出的一种快泳血红蛋白——血红蛋白包头(Hb Paotow)

1.在包头市约1,000名汉族中,发现一例快泳异常血红蛋白。2.家族调查结果表明,这种血红蛋白为遗传变异产物。3.分子杂交结果证明其为β链异常。4.这种血红蛋白在碱性pH下的电泳速度,是位于HbA与HbH之间。5.进行酸性琼脂电泳时,它泳向阴极,速度近似HbF。6.这种血红蛋白的紫外区吸收光谱,与HbA及HbF都不一样。7.鉴于它与已知血红蛋白都不相同,故命名为血红蛋白包头(Hb Paotow)以示区别,     

纤维素酶提取红景天总黄酮的研究

以总黄酮为考察指标,确定纤维素酶提取红景天有效成分的最佳工艺.研究酶解条件对总黄酮浸出率的影响,并对不同提取方法的提取效果和粗提物的DPPH清除活性进行了比较.纤维素酶提取法的最佳工艺条件为:加酶量为1.95%(以原料干重计),液料比为70∶1(mL∶g),pH值为5.5,酶解温度为40℃,酶解时间为5 h,红景天总黄酮的浸出率为4.385%.酶解技术可明显提高红景天总黄酮的浸出率,粗提物得率高且DPPH清除活性较强.     

类肌肽4(5)-丙氨酰胺-5(4)-羧酸咪唑的酶促合成及表征

肌肽(β-Ala-L-His)是一种高效抗氧化剂,广泛应用于生物、化工、医药等领域。应用微水相酶促合成类肌肽,效率高价格低,且具有相似性质,开发前景广阔。本研究以L-丙氨酸和4,5-二羧酸咪唑制备类肌肽4(5)-丙氨酰胺-5(4)-羧酸咪唑,正交实验下的最佳合成条件为:四氢呋喃:pH8磷酸缓冲溶液=10:1.6(V/V),L-丙氨酸:4,5-二羧酸咪唑=1:3(m/m),α-胰凝乳蛋白酶:底物=1:200(m/m),35oC下磁力搅拌1.5h。硅胶G60薄层色谱(TLC)分离反应产物,Rf=0.81处出现新斑点;刮下该点纯化后进行紫外扫描,高效液相色谱(HPLC)和核磁共振,紫外光谱253nm处吸收明显增强,310nm处出现新吸收峰;253nm、310nm、330nm高效液相色谱保留时间均为4.0min;13C核磁共振显示8组碳原子。结合胰凝乳蛋白酶的催化机理,得出产物结构为4(5)-丙氨酰胺-5(4)-羧酸咪唑。     

酶法联合闪式提取红叶李花多糖及单糖初步分析

采用酶法联合闪式提取红叶李花中多糖,对多糖进行纯化和分离,利用气相色谱-质谱(GC-MS)初步分析多糖的组成。以单因素实验为基础,以响应面设计优化确立最佳提取工艺,以DEAE-52纤维素柱和Sephadex G-150分离多糖,乙酰化后分析单糖组成。最佳提取工艺为:酶解温度为45℃,酶解时间为2h,酶用量为0.17%,闪式提取时间为3 min,液料比35倍,转速为3000 rpm。多糖得率达到13.02%。多糖由PPCS-Ⅰ和PPCS-Ⅱ两部分构成,PPCS-Ⅰ的单糖组成和比例为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖和葡萄糖(摩尔比为12.11∶3.16∶7.06∶1∶4.92),PPCS-Ⅱ的单糖组成和比例为鼠李糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖(摩尔比为5.02∶1∶13.65∶11.76∶8.39)。     

血红蛋白G Taipei生化遗传学研究(附三个家系分析)

本文报道了在我国四川、湖北和江西省发现的三个β链慢速异常血红蛋白家系的分析结果。三个家系中共有七名成员为异常血红蛋白基因的杂合子,按电泳迁移率可鉴定为G组异常血红蛋白。三名先证者的异常血红蛋白相对含量分别为27.0%,32.3%和36.5%。血红蛋白变型的结构分析,包括珠蛋白肽链的分离,氨基乙基化β链的酶解和指纹分析,以及异常肽段的氨基酸组成和顺序测定,证实其β链第22位谷氨酸被甘氨酸替代,证明它是血红蛋白G Taipei(β22(B4)Glu→Gly)。血红蛋白G Taipei是分布于中国黄河南北诸省的一种异常血红蛋白,迄今仅在中国人中发现。虽然这种异常血红蛋白病并不引起临床症状,但对于研究这种基因突变的发生,以及它的地理分布都是有意义的。本文还讨论了DABITC/PITC双偶合法在测定血红蛋白异常肽段氨基酸顺序中的应用,认为这种微量顺序分析技术具有经济、快速和准确的优点,值得推广应用。     

血红蛋白G Taipei生化遗传学研究(附三个家系分析)

本文报道了在我国四川、湖北和江西省发现的三个β链慢速异常血红蛋白家系的分析结果。三个家系中共有七名成员为异常血红蛋白基因的杂合子,按电泳迁移率可鉴定为G组异常血红蛋白。三名先证者的异常血红蛋白相对含量分别为27.0%,32.3%和36.5%。血红蛋白变型的结构分析,包括珠蛋白肽链的分离,氨基乙基化β链的酶解和指纹分析,以及异常肽段的氨基酸组成和顺序测定,证实其β链第22位谷氨酸被甘氨酸替代,证明它是血红蛋白G Taipei(β22(B4)Glu→Gly)。血红蛋白G Taipei是分布于中国黄河南北诸省的一种异常血红蛋白,迄今仅在中国人中发现。虽然这种异常血红蛋白病并不引起临床症状,但对于研究这种基因突变的发生,以及它的地理分布都是有意义的。本文还讨论了DABITC/PITC双偶合法在测定血红蛋白异常肽段氨基酸顺序中的应用,认为这种微量顺序分析技术具有经济、快速和准确的优点,值得推广应用。     

兔抗金黄地鼠酶标抗体的制备及应用

目的 纯化金黄地鼠血清IgG,制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(IgG-HRP),开展金黄地鼠仙台病毒的初步检测.方法 采用亲和层析纯化法纯化金黄地鼠IgG,用SDS- PAGE电泳测定IgG纯度并制备兔抗金黄地鼠IgG抗体(second antibody,Ab2);用免疫双扩散法检测抗血清效价后,再用亲和层析纯化抗血清IgG( Ab2);采用改良过碘酸钠标记法制备兔抗金黄地鼠酶标抗体( rabbit anti-hamster IgG-HRP);用直接ELISA和Western-blot法对兔抗金黄地鼠IgG酶标抗体进行工作浓度测定;应用金黄地鼠酶标抗体对金黄地鼠仙台病毒进行酶免检测(IEA).结果 金黄地鼠血清IgG纯度达95％;兔抗金黄地鼠IgG抗体(Ab2)免疫双扩散效价为1(:)64;兔抗金黄地鼠IgG -HRP经直接ELISA和Western-Blot测定工作浓度分别为1∶5000和1∶2000;酶免(IEA)效价为1:2000.结论 高效快速纯化了金黄地鼠IgG,制备了金黄地鼠IgG-HRP,为金黄地鼠病原微生物的血清学检测提供了条件.