外源物质对灵芝多糖和β-葡聚糖发酵的影响

研究了14种外源物质（化合物）对灵芝细胞生长和发酵合成多糖和β-葡聚糖的影响。结果表明,连翘水提物（3g/L）对灵芝细胞生长具有显著促进作用;薏苡仁酯（3g/L）对灵芝胞内多糖和β-葡聚糖的合成均具有促进作用;而桔梗水提物、硝酸铈铵、硝酸镨、茉莉酸甲酯和硝普钠对灵芝细胞生长和产物合成均具有抑制作用。进一步通过Box-Behnken试验设计和响应面法分析,建立了添加薏苡仁酯发酵产β-葡聚糖的二次多项式模型,经分析得到产β-葡聚糖的最优条件为：薏苡仁酯添加量10.5g/L、接种量16%、添加时间第88小时、发酵初始pH 7.00。在此条件下获得β-葡聚糖的产量可达(40.67±8.43)mg/L,与未添加薏苡仁酯的对照组相比,提高了41.86%;多糖产量为(0.99±0.21)g/L,与对照组相比,提高了31.99%。结果提示所得添加薏苡仁酯的优化条件可定向诱导灵芝β-葡聚糖的合成,同时也表明在灵芝液体发酵体系中添加薏苡仁酯发酵产多糖和β-葡聚糖具有一定的实用价值。     

药用昆虫蜣螂对灵芝发酵和抗小鼠肝癌活性的影响

采用液体深层发酵方式,研究了药用昆虫蜣螂对灵芝细胞生长、关键活性产物发酵动力学和抗小鼠肝癌活性的影响。结果表明,药用昆虫蜣螂在各添加浓度下对灵芝的细胞生长均无显著促进作用;但在添加量为5g/L时,对灵芝多糖和灵芝三萜的发酵动力学有显著影响(P<0.05),在发酵第7天时,灵芝总多糖和总三萜的产量分别达到2.81g/L和539.0mg/L(对照组分别为2.25g/L和428.2mg/L)。小鼠体内抗肝癌结果表明,灵芝对照发酵物的抑癌率为41.61%,灵芝-蜣螂配合物的抑癌率为42.24%;而补加蜣螂发酵后的灵芝加蜣发酵物的抑癌率高达57.21%,与灵芝对照发酵物的抑癌率相比,提高了37.49%。研究表明,采用昆虫蜣螂补料-分批发酵后,灵芝发酵物抗小鼠肝癌的活性得到显著增强。     

药用昆虫蜣螂对灵芝多糖生物合成的影响

采用液体深层发酵方式,研究了几种药用昆虫对灵芝多糖生物合成的影响。结果表明,药用昆虫蜣螂在添加量为5g/L时能显著促进灵芝胞内多糖(IPS)和胞外多糖(EPS)的形成(P<0.05)。胞内多糖和胞外多糖的产量分别由对照的(1.93±0.09)g/L和(520.3±20.2)mg/L提高到(2.41±0.12)g/L和(608.9±20.2)mg/L。灵芝胞内多糖和胞外多糖在DEAE纤维素柱上都可分离得到5种主要组分,其中IPS-1和EPS-1分别为2类多糖的主要组分。进一步用凝胶柱分离显示,IPS-1由3个单个的组分组成,EPS-1由2个单个的组分组成。添加蜣螂发酵后,灵芝胞内多糖和胞外多糖中没有出现新的组分,且各组分的相对含量也没有显著变化(P>0.05),提示添加蜣螂发酵后,灵芝胞内多糖和胞外多糖主要组分的合成途径并未改变。     

虫药蜣螂对灵芝发酵物风味组成的影响

采用顶空-气相色谱-质谱联用对虫药蜣螂和添加蜣螂发酵后的灵芝发酵物的风味物质进行了测定,进而分析了添加蜣螂对灵芝发酵物风味组成的影响。结果表明,虫药蜣螂和灵芝发酵物(添加蜣螂)中分别含有40和30多种风味物质。添加蜣螂发酵后,灵芝发酵物跟对照相比新出现了5种风味物质,分别为苯甲醛、α-松油醇、苯乙醇、唑苯并噻和桃金娘烯醇。其中α-松油醇、苯乙醇和唑苯并噻是蜣螂中的风味成分,苯甲醛和桃金娘烯醇为新产生成分。所有5种风味物质均为食品香料物质。蜣螂中其它风味成分经灵芝发酵转化或降解后,未出现在灵芝发酵物中。因此,添加蜣螂发酵对灵芝发酵物的风味无不良影响。结果还提示灵芝细胞可生物转化或降解虫药蜣螂中的部分风味物质。     

紫芝酸性三萜类化合物体外抑癌和抑菌作用的研究

采用噻唑蓝比色(MTT)法研究紫芝酸性三萜对几种癌细胞体外增殖的影响,并用管碟法检测了紫芝胞内酸性三萜对几种细菌和霉菌的体外抑菌作用。结果表明,紫芝胞内酸性三萜和胞外酸性三萜在250μg/mL时,对人肝癌细胞BEL7402和人乳腺癌细胞MCF-7均有显著抑制作用(P<0.05),但对人胃癌细胞SGC-7901没有显著抑制作用(P>0.05)。BEL7402细胞的生长曲线试验表明,胞内酸性三萜组的细胞受到显著抑制,未出现指数增长期,且BEL7402细胞培养3d后,对照组细胞数目多、均匀,而胞内酸性三萜组的细胞数目明显减少,且细胞变小。抑菌试验结果表明,胞内酸性三萜在40mg/mL时,对大肠杆菌Escherichia coli和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus的生长均具有显著抑制作用(P<0.01),对枯草芽孢杆菌Bacillus subtitis和青霉的Penicillium chrysogenum抑制作用较弱;而在此浓度下对黑曲霉Aspergillus niger没有抑制作用。该样品对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉和青霉的MIC分别为20mg/mL、20mg/mL、40mg/mL、80mg/mL和40mg/mL。此外,该酸性三萜的抑菌成分在60℃下(处理2h)较稳定,但在80℃以上,热稳定性较差,活性降低。     

两面针药材挥发油的GC-MS分析

采用气相色谱-质谱（GC-MS）联用方法对广西产两面针药材的挥发油成分进行分析,共分离出80余个组份,通过质谱数据库检索和图谱分析,并参考相应的保留时间确定了其中的58个组分,总相对含量占挥发油的91．4％。其中含量最大的是斯杷土烯醇（55．21％）,其次有异斯杷土烯醇（6．35％）、异香树素环氧化物（3．88％）、2-十三烷酮（3．28％）和α-香附酮（2．14％）等。     

新疆雪莲的高效液相指纹图谱及液-质联用分析

建立新疆雪莲药材的高效液相指纹图谱。以Luna C18为分析柱,用乙腈-0.1%醋酸梯度洗脱,获得分离度较好的新疆雪莲药材HPLC分析条件。通过10批样品的分析和对照,标示出12个共有峰,相似度分析大于0.92。最后通过HPLC-UV-MS/MS联用分析鉴定出其中7个化学成分。该方法可为新疆雪莲药材指纹图谱和质量分析方法的建立提供参考。     

小鼠心肌肥厚发展过程中心电图动态变化

目的：探讨小鼠心肌肥厚发展过程中心电图的动态变化。方法：复制小鼠压力超负荷性心肌肥厚模型,连续动态监测小鼠从心肌肥厚早期至心力衰竭发展过程中的不同阶段体表心电图改变。结果：①对照组和模型组术后2周内小鼠未见自发性心律失常,而模型组术后5周、9周和13周小鼠出现自发性心律失常,主要表现为频发的室性早搏以及阵发性室性心动过速,心律失常发生率分别为15％、28％和63％。②与同期对照相比,术后2周、5周、9周和13周组动物伽间期以及帆间期明显延长,分别延长20．4％、32．7％、49．7％、61．0％和27．1％、32．1％、43．9％、59．1％（P〈0．01）。③心肌肥厚小鼠心电图的另一个特征为J波变化。所有对照组动物心电图均为正向J波,而模型组动物从2周开始J波正向值下降,5周逐渐变平,到13周时完全翻转。④与同期对照相比,模型组的PR间期没有改变,但术后2周RR问期轻微缩短。结论：心肌肥厚小鼠自发性心律失常发生率逐渐增加,QT间期进行性延长,J波幅值逐渐降低,表明随着疾病的进展心室复极化异常逐渐加重。     

原料药FDA注册中残留溶剂研究的基本原则

美国药监局实行FDA认证,并要求药品进入美国市场前,必须进行文件注册。在DMF文件"3.2.S.3.2原料药物特性确认"中,对残留溶媒的研究是一个重要内容。山东鲁抗医药拳头产品大观霉素、泰乐菌素系列产品都通过了FDA认证。笔者结合FDA认证注册较丰富的经验和ICH Q3C(R5)对残留溶剂的指导原则,总结了原料药FDA注册中残留溶剂研究的基本原则。     

HCV NS5A基因表达及其在血清学检测中的应用评估

Full-length NS5A gene of the hepatitis C virus was amplified by PCR using plasmid pBAC25 containing HCV nonstructural gene as template. The amplified fragment (about 1.34 kb) was cloned into plasmid pQE32, and the recombinant plasmid pQENS5A was expressed in JM109 strain. The NS5A protein was purified by NiSO4 metal chelating resin, and characterized by Western-blot. Its antigenecity was determined by ELISA. The positive detection rate of anti-NS5A was 75% (69/92) in ninety-two clinic sera. The positive rate of anti-NS5A was 82.5% (33/40) in fourty positive standand sera, and the negative rate of anti-NS5A was 100% (40/40) in fourty negative standand sera. The results showed that the Full-length NS5A proteinn had the higher sensitivity and specificity in the detection of HCV antibody in sera, we suggested that NS5A protein was a useful antigen for blood screening.