菠菜铁型超氧化物歧化酶的纯化及性质

用聚丙烯胺梯度凝胶电泳法检测出菠菜ＳＯＤ同工酶谱带中含３条Ｆｅ－ＳＯＤ活性带,菠菜叶Ｆｅ－ＳＯＤ粗提取液经硫酸铵分部沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素－Ａ５２和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析,纯化出单一的Ｆｅ－ＳＯＤ活性带,纯化酶的分子量为４２．６ｋＤ,亚基分子量为２１ｋＤ。对金属元素的分析表明,该酶每分子含２．６个Ｆｅ原子,该酶紫外区最大吸收峰为２７８ｎｍ,等电点为４．６,氨基酸组成和其它来源的Ｆｅ－ＳＯ     

韭菜线粒体锰超氧化物歧化酶纯化及性质研究

经硫酸铵沉淀、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００凝胶过滤,将韭菜线粒体ＳＯＤ纯化到均一程度。从６０００ｇ韭菜叶片线粒体中纯化得到２．５ｍｇ酶,酶比活力达１２００Ｕ／ｍｇ蛋白。该酶对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ２都不敏感,热稳定性弱 外光区吸收峰在２８０ｎｍ,凝胶过滤法测得其分子量为８２００Ｄ,ＳＯＳ－ＰＡＧＥ法测定其亚基分子量的２２０００Ｄ,ＤＮＳ法测得其Ｎ－末端氨基酸为缬氨酸。上述结     

贻贝（Perna viridis）超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究

采用５５－６０℃热处理,硫酸铵分级深沉和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ柱层析将贻贝Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ纯化到均一程度。每１００ｇ鲜贻贝肉可得到ＳＯＤ制品,总活力３６８９ｕ,比活力７８２ｕ／ｍｇ,回收率为２１％。测得该酶分子量为３２ｋＤ,亚基分子量约为１６．４ｋＤ,最大紫外吸收波长为２６８ｎｍ,,贻贝Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ具有一定的耐热性,较强的抗酸、抗碱及抗脲性。     

甲基单胞菌Methylomonas sp.GYJ3中甲烷单加氧酶还原酶组分的纯化和性质

Ｍｅｔｙｌｏｍｏｎａｓｓｐ．ＧＹＪ３菌的甲烷单加氧酶（ＭＭＯ）粗酶提取液经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析和ＤＥＡＥ－ＴＳＫｇｅｌＨＰＬＣ分离纯化出ＭＭＯ还原酶组分．经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９５％,纯化倍数为４．４,加入至ＭＭＯ羟基化酶和调节蛋白Ｂ的体系中表现比活为２２８ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明还原酶由一种亚基组成,分子量４２ｋＤ．ＩＣＰ－ＡＥＳ测定还原酶的Ｆｅ含量为１．８３ｍｏｌＦｅ每ｍｏｌ蛋白．ＵＶ－Ｖｉｓ光谱表明还原酶除２８０ｎｍ蛋白质特征峰外在４６０ｎｍ有最大吸收峰,且Ａ２８０ｎｍ／Ａ４６０ｎｍ为２．５０,与其它黄素一铁硫蛋白相似,推测还原酶可能含一个ＦＡＤ辅基和Ｆｅ２Ｓ２中心．在厌氧条件下,还原酶能够和ＮＡＤＨ作用,ＵＶ－Ｖｉｓ光谱分析表明还原酶４６０ｎｍ处特征吸收峰消失,说明在ＭＭＯ催化过程中还原酶接受ＮＡＤＨ的电子．ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析分离出调节蛋白Ｂ,部分纯化的调节蛋白Ｂ的分子量大约在２０ｋＤ,它能够提高ＭＭＯ比活性４０倍,ＭＭＯ还原酶和调节蛋白Ｂ单独存在时不具有ＭＭＯ     

蚕豆种子超氧物歧化酶的纯化及性质

蚕豆种子粗提液经乙醇－氯仿混合物处理、丙酮沉淀、ＤＥＡＥ－纤维素层析和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ层析,获得比活性为２８５２单位ｍｇ－１蛋白的超氧物歧化酶．经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明酶已纯化到均一程度．该酶对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ２敏感,说明它为Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ．酶分子量和亚基分子量分别为３１０００和１４４００,说明它是由两个相同亚基组成。该酶在７０℃以下和在ｐＨ５—９条件下稳定．紫外区最大吸收峰为２７３．５ｎｍ。     

白及块茎铜,锌超氧物歧化酶的纯化及其性质

白及（Ｂｌｅｉｌｌａｓｔｒｉａｔａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｒｅｉｃｈｂ．ｆ．）的ＳＯＤ同工酶只有一条较宽的谱带,确认为Ｃｕ·Ｚｎ－ＳＯＤ。其块茎ＳＯＤ总活性和比活性都高,且含有丰富的白及胶;经丙酮分级沉淀,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱层析分离纯化,获得对ＣＮ￣－敏感的淡兰色Ｃｕ·ＺｎＳｏＤ粉末。在凝胶电泳染色图谱上,纯化后的酶与粗酶液的ＳＯＤ区带相对应,且其酶活性染色带与蛋白染色带位置对应,表明已纯化到均一程度。该酶分子量约３３ＫＤ,亚基分子量约为１６．４ＫＤ;紫外光区的吸收峰在２６４．６ｎｍ,等电聚焦电泳呈现一条蛋白区带,ｐＨ值在４．３５左右;该酶在ｐＨ６．０～１０．０,温度在５０℃范围内具稳定性。纯化后的酶为４５６３．２ｕ／ｍｇ·蛋白,纯化了５１倍,活力回收为２２．３％。上述酶没有过氧化氢酶活性。提取过程中还得到高质量的副产品白及胶。     

猴头子实体锰型超氧物歧化酶的纯化及其性质鉴定

猴头子实体的超氧物歧化酶仅Ｍｎ－ＳＯＤ１种,有其资源和学术研究上的意义。其粗酶液经（ＮＨ４）２ＳＯ４盐析,ＤＥ５２和ＣＭ５２离子交换柱层析,纯化到电泳单斑点均一程度,其比活性为３０９６．５ｕ／ｍｇ,活性回收率为１４．８％。纯化的Ｍｎ－ＳＯＤ分子量为４７．０ＫＤ,亚基分子量为２３．３ＫＤ。金属元素分析表明每个亚基含１个Ｍｎ原子。该酶在紫外区有２个吸收峰,分别在２１８．４ｎｍ和２７６．０ｎｍ。该酶的理     

盐生杜氏藻生油—3—磷酸脱氢酶的分离化及其特性的研究

利用ＰＥＧ分级,ＤＥＡＥ离子交换层析,Ｂｈｕｅ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ拟亲和层析,ＭｏｎｏＱ离子交换层析等手段,分离纯化直二氏藻甘油三磷酸（Ｇ－３－Ｐ）脱氢酶（ＥＣ１．１．１．８）得到比活为１２．６ｕ／ｍｇ的电泳纯的酶,并对此酶的生化特性进行了研究。４－２０％非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得全酶分子量约为２７０ｋＤ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明该酶只有一种分子量约为６５ｋＤ的亚基,据此推测该酶应为同四聚体。酶     

黑曲霉ρ-葡萄糖甘酶的提纯与性质

从黑曲霉Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｎｉｇｅｒ发酵液中分离提纯了β－葡萄糖苷酶。提纯步骤通过（ＮＨ４）２ＳＯ４分级沉淀,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００等三步纯化,得到凝胶电泳均一的β－葡萄糖苷酶。该酶的最适ｐＨ４．５,最适温度６０℃,Ｋｍ为０．４４（ＮＰＧ）,并有较好的热稳定性。用ＳＤＳ－凝胶电泳法和凝胶色谱法测得该酶的分子量为１２００００     

胞外青霉素酰化酶的纯化及部分理化性质

巨大芽孢杆菌产胞外青霉素酰化酶发酵液经硫酸铵分级抽提及Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００、羟基磷灰石、ＤＥＡＥ－纤维素ＤＥ５２等层析步,提纯了青霉素酰化酶,得到电泳均一的酶制剂,纯酶比活力约为２５Ｕ／ｍｇ蛋白,纯化４９倍,活力回收５８％,经ＰＡＧＥ及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测知该酶不含亚基,其分子量约为１４０ｋＤ。该酶最适ｐＨ为９．０,最适温度４７℃,用底物ＮＩＰＡＢ测活,其Ｋｍ值为６．２×１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ     

高压快速柱分离纯化牛血球超氧化物歧化酶的研究

以牛血球为材料,经溶血等处理和丙酮沉淀,获得牛血球超氧化物歧化酶粗品。此粗酶可以通过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ快速柱层析,获得超氧化物歧化酶纯品。纯化的酶比活可达１３５００ｕ／ｍｇ,经ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和快速蛋白液相色谱（ＦＰＬＣ）检测,结果表明,纯化酶是均一的Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤测得该酶分子量为３１,８００,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得亚基分子量为１５     

人血红素加氧酶同工酶的分离纯化初报

首次报道了人肝脏血红素加氧酶的同工酶的分离纯化,并初步探讨了它们的性质,采用ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５和羟基磷灰石柱层析法从人肝脏分离纯化ＨＯ的同工酶,酶活性检测、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析结果显示,人肝脏微粒体含量ＨＯ的同工酶,按洗脱先后顺序分别得到分子量为３００００和３６０００的ＨＯ－１和ＨＯ－２．酶促反应中需相同辅酶参与,其中酶活性ＨＯ－１明显高于ＨＯ－２,两之比为２．４：１,从分子量和     

海枣曲霉木聚糖酶Ⅲ糖组成及糖肽结构键研究

海枣曲霉木聚糖酶Ⅲ经ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后用Ｓｃｈｉｆｆ′ｓ试剂染色证明为糖蛋白。经硅胶薄层层析和毛细管毛相色谱测定,每分子酶约含４个葡萄糖和１个甘露糖残基,木聚糖酶Ⅲ经β－消除反应后在２４１ｎｍ处出现一个新的吸收峰,在Ｎ２保护下用含ＮａＢＨ４的ＮａＯＨ溶液处理后,其Ｓｅｒ和Ｔｈｒ减少,相对应丙氨酸增加,并出现α－氨基丁酸,估测酶分子中存在约３个Ｏ－糖苷键,糖残基通过Ｏ－糖苷键连接于肽链中丝     

胞外青霉素酰化酶的纯化及部分理化性质

巨大芽孢杆菌产胞外青霉素酰化酶发酵液经硫酸铵分级抽提及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００、羟基磷灰石、ＤＥＡＥ纤维素ＤＥ５２等层析步骤,提纯了青霉素酰化酶,得到电泳均一的酶制剂。纯酶比活力约为２５Ｕ／ｍｇ蛋白,纯化４９倍,活力回收５８％,经ＰＡＧＥ及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测知该酶不含亚基,其分子量约为１４０ｋＤ。该酶最适ｐＨ为９．０,最适温度４７℃,用底物ＮＩＰＡＢ测活,其Ｋｍ值为６．２×１０~（－４）ｍｏｌ／Ｌ,Ｖｍ值为１．２４×１０４ｍｏｌ／Ｌ。此外还探讨了部分金属离子对该酶的影响。     

豆壳过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

从豆壳抽提液经硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析,ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲合层析和Ｂｉｏ－ＧｅｌＰ－６０凝胶过滤,纯化了豆壳过氧化物酶（ｓｏｙｂｅａｎｈｕｌｐｅｒ－ｏｘｉｄａｓｅ,ＳｈＰ）．纯化酶的比活力为７０７７Ｕ／ｍｇ,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上显示出一条蛋白质带．ＳｈＰ分子量为３８０００,等电点为３．９;ＳｈＰ为一含血红素的糖蛋白,含糖量为１８．７％,光谱学分析揭示,在４０６ｎｍ处有一典型的Ｓｏｒｅｔ带,在５１０ｎｍ和６４０ｎｍ处有特征吸收峰．酶反应的最适ｐＨ在４．０附近,最适温度为４５℃;在ｐＨ２．５～１２．０之间较稳定,７５℃,保温６０ｍｉｎ,酶活力残余６８％,ＳｈＰ是一种良好的耐酸碱、耐热过氧化物酶．动力学分析求得ＳｈＰ的表观Ｋｍ（愈创木酚）为１．６２ｍｍｏｌ／Ｌ,表现Ｋｍ（Ｈ２Ｏ２）为０．３４ｍｍｏｌ／Ｌ．在所测定的化学试剂中,Ｎ－３、ＣＮ－、Ｆｅ３＋、Ｆｅ２＋和Ｓｎ２＋对酶有较强烈的抑制作用,而重金属离子Ａｇ＋、Ｈｇ２＋、Ｐｂ２＋、Ｃｕ２＋、Ｃｒ３＋以及ＳＤＳ和ＥＤＴＡ对酶活力无显著影响     

枸杞果实铁型超氧物歧化酶的纯化及性质

枸杞果实Ｆｅ－ＳＯＤ粗提液经硫酶铵盐析、离子交换柱层析及凝胶过滤,纯化到电泳单班点均一程度。纯化的Ｆｅ－ＳＯＤ分子量为４４．６ｋＤ,亚基分子量为２２．０ｋＤ。金属元素分析表明,每分子酶含１个Ｆｅ原子。该酶在紫外区最大吸收值为２７８ｎｍ。Ｈ２Ｏ２明显抑制该酶活性,ＫＣＮ对酶活性无影响。该酶氨基酸组成与高等植物和蓝绿藻的Ｆｅ－ＳＯＤ相似,但它具有较高甘氨酸,酸性氨基酸与碱性氨基酸比值高于等植物而与低等     

近江牡蛎铜锌超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究

经６５℃加热,硫酸铵分级沉淀,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤和ＤＥ－５２柱层析,从近江牡蛎（ＯｓｔｒｅａｒｉｖｕｌａｒｉｓＧｏｕｌｄ）软体部分提纯了铜锌超氧化物歧化酶（Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ）．对其理化性质鉴定表明,用此法纯化的酶纯度均一．该酶系由两个相同亚基组成的二聚体,分子量２７．９ｋＤ．该酶的紫外吸收峰在２７２．５ｎｍ,红外光谱表现出其氨基酸组成特征,与猪血ＳＯＤ存在差异．该酶在不同的升温速率下及经不同浓度的Ｈ２Ｏ２处理后的稳定性与猪血ＳＯＤ不同．其氨基酸组成与不同来源的同类酶存在差异．     

夏威环毛蚓纤溶酶的分离纯化及部分性质研究

以夏威环毛蚓（Ｐｈｅｒｅｔｉｍａ ｈａｗａｙａｎａ）为材料,采用磷酸盐缓冲液抽提、（ＮＨ４）２ＳＯ４分段盐析,离子交换树脂 Ｄ２９０、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００和 ＤＥＡＥ－ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－５０三种连续柱层析方法得到一种在 ＰＡＧＥ上显示单一区带的纤溶酶组份。采用凝胶柱层析和 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测其分子量为 １２ ０００和 １２３００,由一条肽链组成。该酶具有强烈的纤溶活力和水解ＢＡＥＥ的活力,能直接作用纤维蛋白和间接激活纤溶酶原。其最适反应温度为４５℃,最适反应ｐＨ为８．０。该酶水解ＢＡＥＥ的活力可被Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｈｇ２＋、金属离子和ＥＤＴＡ、巯基乙醇抑制,Ｃａ＋则有激活作用。该酶中性糖含量为５％,氨基酸组成中Ａｒｇ、Ｌｅｎ含量较多．     

地衣芽孢杆菌β—甘露聚糖酶的纯化及其性质的研究

地衣芽孢杆菌１Ｂａｃｉｕｕｓ Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ＢＬ－３０６产生的胞外β－甘露聚糖酶经硫酸铵分级盐析,ＤＥＡＥ－纤维素柱层析。Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ１００柱凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱再层析分离纯化,得到ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）均一样品。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得纯化后β－甘露聚糖酶分子量为２６０００道尔顿。用凝胶等电聚焦电泳（ＰＡＧＥＩＥＦ）测得等电点ＰＩ为５．０。该酶     

植物28kD蛋白的纯化及部分性质研究

经丙酮粉、硫酸铵分级沉淀和阴离子交换层析等方法,首次从玉米花粉细胞质粗提物中纯化了一种具有ＡＴＰａｓｅ活性的可溶性蛋白。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量为２８ｋＤ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点为８．３。免疫印迹鉴定结果表明该酶蛋白与抗牛脑动蛋白或动力蛋白的抗体无免疫交叉反应。最大紫外吸收波长为２７８ｎｍ,并作了ＣＤ谱分析。底物特异性研究表明：ＡＴＰａｓｅ水解活性最高。药理学研究表明：该酶蛋白可被矾酸钠强烈抑制,但对ＮＥＭ基本不敏感,氟化钠可使酶活力丧失５０％左右,寡霉素、硝酸钾及乌本苷对酶活力没有抑制作用．