百脉根愈伤组织原生质体再生植株

百脉根无菌苗幼茎在含２．０ｍｇ／Ｌ－,２,４－Ｄ,０．１ｍｇ／Ｌ２－ｉｐ的ＭＳ培养基上诱导和继代培养愈伤组织。选取绿色松散颗粒愈伤组织分离原生质体。原生质体培养在调整珠ＫＭ８Ｐ,Ｖ－ＫＭ,ＭＳ和ＳＨ培养基上「含３００ｍｇ／Ｌ,ＣＨ,２％ＣＷ,２％蔗糖,６％葡萄糖,２．０ｍｇ／Ｌ,２,４－Ｄ,０．５ｍｇｇ／Ｌ,ＢＡ,５ｍｍｏｌ／Ｌ ＭＥＳ」,原生质体再生细胞均能分裂,并形成小愈伤组织,但以ＫＭ８０为     

杨树新品种叶肉原生质体培养和植株再生

从１ 个月龄的ＮＬ－８０１０６ 杨（Ｐｏｐｕｌｕｓｄｅｌｔｏｉｄｅｓ×Ｐ． ｓｉｍ ｏｎｉｉ）无菌苗叶片分离得到大量原生质体,纯化后其原生质体产量为４×１０７／ｇ ｆｒ．ｗ ｔ． 纯化的原生质体在含２,４－Ｄ ２ ｍ ｇ／Ｌ、ＮＡＡ ０．５ ｍ ｇ／Ｌ和ＫＴ ０．５ ｍ ｇ／Ｌ的ＫＭ８ｐ 和ＭＳ培养基中进行高密度液体浅层培养,渗透势为０．４０ ｍ ｏｌ／Ｌ的ＫＭ８ｐ 培养基中原生质体分裂频率最高． 培养第５ 天观察到第一次细胞分裂,培养１０ ｄ 的分裂频率为４．５％ ,１２ 周内可形成大量的细胞团和小愈伤组织． ＮＬ－８０１０６杨叶肉原生质体在富含有机氮并以葡萄糖为碳源的培养基中具有较高的分裂频率和植板率．小愈伤组织在ｇｅｌｒｉｔｅ 固化的ＮＬＺ１ 培养基上增殖生长,３ 周后形成４—６ ｍ ｍ 结构紧密的鲜红色愈伤组织,转至ＮＬＦ分化培养基,分化成苗率为１００％ ． 待芽伸长到３ ｃｍ 时,从基部切下转至１／２ ＭＳ培养基上诱导生根,形成完整植株     

埃斯基红豆草下胚轴愈伤组织原生质体的培养与植株再生

埃斯基红豆幼苗的下胚轴切段在附加２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ,ＫＴ１ｍｇ／Ｌ的ＭＳ中形成胚性愈伤组织。来自１１－１３个月龄、继代６－１５天的愈伤组织的原生质体,在改良的Ｖ－ＫＭ液体培养基中可持续分裂形成细胞团,培养１０天时的分裂率和克隆率分别为６５．８８％和５３．３８％周后就可将将原生质体形成的小愈伤组织转于培养基上。原生质体在改良的Ｂ５液体培养基也可以分裂形成小愈伤组织,但分裂率低于Ｖ－ＫＭ。来自原     

向日葵下胚轴原生质体高频率愈伤组织形成与根发生

向日葵籽苗下胚轴原生质体,培养在含有ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ,２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ,ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ和葡萄糖０．５５ｍｇ／Ｌ的改良Ｋａｏ培养基中,２４～２８ｈ后,原生质体开始分裂。包埋在琼脂糖０．６％中的原生质体,培养５ｄ后,分裂频率达９５％以上。生长旺盛的小愈伤组织转移到含有２ｉｐ０．１ｍｇ／Ｌ,ＩＡＡ０．０１ｍｇ／Ｌ,腺嘌呤４０ｍｇ／Ｌ和ＧＡ３０．０１ｍｇ／Ｌ的Ｔｈｏｍｐｓｏｎ液体培养基上１３ｄ后,原生质体诱导的少数愈伤组织发生根分化。     

中麻黄悬浮培养体系的建立

本文用中麻黄无菌苗为外植体,其切段培养在附加２ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ和０．５ｍｇ／Ｌ　６　ＢＡ的ＭＳ培养基上,全部脱分化形成白色疏松愈伤组织。愈伤组织继代培养于ＭＳ＋０．５ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ＋０．２ｍｇ／Ｌ６ＢＡ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋４％蔗糖的培养某上。以继代培养愈伤组织为材料进行悬浮培养,培养基为附加０．２ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ＋０．１ｍｇ／Ｌ６ＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ＋２％蔗糖的ＭＳ液体培养基,得到分散性好,细胞形状接近圆形,细胞大小均一,细胞团多由２－３０个细胞组成的悬浮培养体系。第三代悬浮培养细胞增长率为０．３５ｇ·ｆｗ／２０ｍｌ·ｄ,细胞有丝分裂指数为１１．２％。条件培养和高密度接种可缩短延迟期,条件培养不能提高分裂指数,１ｇ／１０ｍｌ接种密度可使分裂指数提高至２１．２％。     

大叶紫花苜蓿愈伤组织原生质体再生植株

大叶紫花苜蓿下胚轴诱导的愈伤组织在继代培养基上生长快速,易于分散。继代第１２ｄ的愈伤组织原生质体的得率为６．５×１０７／ｇ鲜重。原生质体培养基为ＳＨ基本培养基,含有１．０ｍｇ／Ｌ２,４－０、０．５ｍｇ／ＬＢＡ、２．０ｇ／ＬＣＨ、２％蔗糖、６％葡萄糖、５ｍｍｏｌ／ＬＭＥＳ,培养密度为１．０×１０５／ｍＬ。培养至第１２ｄ时的原生质体再生细胞植板率为３．７％。由原生质体形成的小愈伤组织在含２．０ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ的ＭＳ固体培养基上大量增殖。增殖的愈伤组织转移至２．０ｍｇ／Ｌ２－ｉｐ＋０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ的Ｂ５培养基上,形成体细胞胚并发育成完整植株。     

甘薯叶柄原生质体有效植株再生

将甘薯（Ｉｐｏｍｏｅａｂａｔａｔａｓ（Ｌ．）Ｌａｍ．）‘元气’和‘白星’（‘ＷｈｉｔｅＳｔａｒ’）的叶柄原生质体培养在含有０．０５ｍｇ·Ｌ－１２,４Ｄ和０．５ｍｇ·Ｌ－１ＫＴ的改良ＭＳ液体培养基中,３～４ｄ后细胞开始分裂。培养８～９周后,将直径达１～２ｍｍ的愈伤组织转移到添加０．０５～０．２ｍｇ·Ｌ－１２,４Ｄ和０～０．５ｍｇ·Ｌ－１ＫＴ或添加０．５～２．０ｍｇ·Ｌ－１ＮＡＡ和１．０～３．０ｍｇ·Ｌ－１ＢＡＰ的ＭＳ固体增殖培养基上使其增殖。转移３～５周后,将愈伤组织再转移到ＭＳ基本培养基或转移到添加２．０～３．０ｍｇ·Ｌ－１ＢＡＰ的ＭＳ培养基上。当进一步转移到ＭＳ基本培养基上后,从愈伤组织或从愈伤组织形成的不定根上再生出植株。‘元气’植株再生率高达６０．０％,ＷｈｉｔｅＳｔａｒ高达４３．４％。     

苎麻原生质体培养及植株再生

用苎麻（Ｂｏｅｈｍ ｅｒｉａ ｎｉｖｅａ）子叶诱导愈伤组织并建立悬浮细胞系． 用４．５％ 纤维素酶、０．８％ 离析酶、０．８％ 半纤维素酶的混合酶液分离悬浮培养细胞,可得到２×１０６ 个／ｇ ｆｒ．ｗｔ的原生质体．这些原生质体以海藻酸钠包埋方式培养在附加２,４－Ｄ ０．５ ｍ ｇ／Ｌ、ＫＴ ０．５ ｍ ｇ／Ｌ 的ＫＭ８ｐ 培养基中,５０ ｄ 左右可形成肉眼可见的小愈伤组织．愈伤组织经过扩增,在不同的分化培养基上可诱导芽、根的形成,再生出完整植株． 子叶原生质体则仅能进行几次有限的分裂     

水稻游离花粉培养的高频率再生植株

用二个水稻栽培品种（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａＬＳｕｂ．ｊａｐｏｎｉｃａ．）中花１１号和盐粳的花粉处于单核靠边期的共药,经低温处理１０－２０天,在无糖培养基中预培养２－４天后游离花粉进行培养。培养基为ＫＭ８Ｐ,附加１ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ,１００ｍｇ／Ｌ脯氨酸,５００ｍｇ／Ｌ水解酷蛋白,９％蔗糖。培养５天,花粉进行一次分裂,１０天后分裂频率为２１．３％,２１天可见小愈伤组织形成。随即将直径为０．５－１．     

南苜蓿组织和原生质体培养及转化试验

主要探讨南苜宿子叶和下胚轴外植体,子叶原生岳体培养中的器官发生及遗传转化。南苜蓿子叶和下胚细外植体培养在附加１ＡＡ０．５－１ｍｇ／Ｌ和细胞分裂素（ＢＡ或ＺＴ）０．５－２ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上,在有当照的条件下诱导形成不定芽,进而再生成完整植株。子叶原生质体培养在附加２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ和ＫＴ０．２ｍｇ／Ｌ的Ｂ５液体培养基中,细胞分裂频率可达３０－４１％,原生质全来源的愈伤组织在ＭＳＢ培养基（Ｍ     

硬粒小麦单倍体原生质体培养及植株再生

由硬粒小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ｄｕｒｕｍ Ｄｅｓｆ．）×玉米（Ｚｅａ ｍａｙｓＬ．）建立的单倍性胚性愈伤组织,在继代培养４ 个月后置于含２．０ ｍ ｇ／Ｌ２,４－Ｄ、３％ 蔗糖、２００ ｍ ｇ／Ｌ水解酪蛋白、１４６ ｍ ｇ／Ｌ谷氨酰胺和３００ ｍ ｇ／Ｌ天冬氨酸的ＭＳ液体培养基中进行悬浮培养,４ 个月后形成了生长迅速、由大小不同（０．５ ～５ ｍ ｍ ）的愈伤组织块组成的愈伤组织悬浮系。酶解试验表明,２．０％ 纤维素酶ＲＳ和０．５％ 的离析酶效果最好,而液体悬浮培养物和固体培养的愈伤组织（在酶解时用锋利的解剖刀片切成１ ｍ ｍ 左右的小块）都能释放出大量原生质体,但悬浮培养物释放出的原生质体状态较好,胞质更浓厚,用ＫＭ８ｐ 培养基以琼脂糖包埋培养方式培养时分裂频率可达５％ 左右。由原生质体再生的小愈伤组织经增殖、筛选后可获得胚性愈伤组织,将其转移至分化培养基Ⅰ（０．２ ｍ ｇ／Ｌ ２,４－Ｄ、１．０ ｍ ｇ／Ｌ ＢＡＰ、０．１ ｍ ｇ／ＬＮＡＡ、３％ 蔗糖、２００ ｍ ｇ／Ｌ 水解酪蛋白、１４６ ｍ ｇ／Ｌ谷氨酰胺和３００ ｍ ｇ／Ｌ天冬氨酸的ＭＳ固体培养基）和Ⅱ（不含２,４－Ｄ,其它成分同Ⅰ）上进行分步分化培养可再生出完整植株,分化频率约为２０％     

陆地棉胚性愈伤组织原生质体的制备,培养及植株再生

以陆地棉栽培品种“鲁棉６号”下胚轴的胚性愈伤组织为材料,制备并培养原生质体。采用继代培养７￣９ｄ、活力旺盛的胚性愈伤组织,在１％纤维素酶、１％果胶酶、０．７ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４、２．５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｃａ＾２＋、０．５ｍｏｌ／Ｌ甘露醇、ｐＨ５．８、３０℃的条件下,具活力的原生质体得率最高。经分离纯化后,原生质体在含有０．４５ｍｏｌ／Ｌ葡萄糖的Ｋ３无机盐、ＮＴ有机物并附加０．１ｍｇ／Ｌ,２,４－     

土人参原生质体培养再生植株

分别由土人参（Ｔａｌｉｎｕｍ ｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ （Ｊａｅｑ．） Ｇａｅｒｔｎ．）组织培养再生苗的叶片和幼茎诱导的愈伤组织游离出原生质体．叶肉原生质体在培养中未能进行正常分裂,存活不过１ 周．愈伤组织原生质体在Ｐ４ 培养基中（Ｋ８ｐ＋ ２,４－Ｄ ０．２ ｍ ｇ／Ｌ＋ ＮＡＡ １．０ ｍ ｇ／Ｌ＋ ＺＴ ０．５ ｍ ｇ／Ｌ＋椰乳５０ ｍ Ｌ／Ｌ＋ 葡萄糖０．５ ｍ ｏｌ／Ｌ）培养３ ｄ 开始第一次分裂,培养７ ｄ 时分裂频率为３６．７％ ． 愈伤组织再生率在液体培养中为０．３１％ ,在双层培养中为０．３４％ ． 愈伤组织在含有较低浓度的６－ＢＡ 的分化培养基上分化出不定芽． 幼苗生根后移栽到花盆中继续生长,２～３个月后开花结实,长出粗壮的肉质根． 再生小植株在试管中继代培养２～３ 个月开花结实． 研究结果还表明∶（１）愈伤组织在液体培养基或增殖培养基中培养时间过长,或继代次数过多均不利于分化．（２）较低浓度的６－ＢＡ （０．５～０．７ ｍ ｇ／Ｌ）对愈伤组织的分化是合适的．（３）ＧＡ３ 对幼苗的发育有促进作用． （４）多效唑（ＭＥＴ）对土人参试管苗有明显的壮苗和壮根作用     

菜心下胚轴原生质体培养和植株再生

以萌发３—４ 天（长约４ ｃｍ ）的菜心（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｖａｒ．ｐａｒａｃｈｉｎｅｓｉｓ）无菌苗苍白下胚轴为材料,酶解分离原生质体。经纯化的原生质体,在含０．５ ｍ ｇ／ＬＺＴ、０．５ ｍ ｇ／Ｌ２,４－Ｄ、１．０ ｍ ｇ／ＬＮＡＡ 和０．４ ｍ ｏｌ／Ｌ葡萄糖的Ｋ８ｐ 培养基中,进行微滴培养。在起始培养１４—１８小时,原生质体再生新的细胞壁。３６ 小时再生细胞开始第一次分裂。第三天分裂细胞频率可达３５％ 。培养第８—９ 天,可见含８—１６个细胞的小细胞团,植板率为１５％ —１８％ 。３ 周后将发育成直径为２ ｍ ｍ 的白色小愈伤组织,转到含０．３ ｍ ｇ／Ｌ ２,４－Ｄ并用ｇｅｌｒｉｔｅ半固化的培养基上,增殖成４—５ ｍ ｍ 直径的愈伤组织。在ＭＳ＋ ３．２（或１．６） ｍ ｇ／Ｌ ＢＡ＋ １．６（或０．８） ｍ ｇ／ＬＺＴ＋ ０．０１ ｍ ｇ／Ｌ ＮＡＡ＋ ０．１ ｍ ｇ／ＬＧＡ３ 和０．２％ 蔗糖的分化培养基上,获得芽的分化。切下约２ ｃｍ 长的芽苗,转移到含０．２ ｍ ｇ／ＬＩＡＡ 和２％ 蔗糖的培养基上,生根形成完整植株     

毛花猕猴桃原生质体再生植株

从毛花猕猴桃（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｅｒｉａｎｔｈａ Ｂｅｎｔｈ．）试管培养的实生苗新展开叶片分离的原生质体,培养在液体ＭＳ（除去ＮＨ４ＮＯ３）附加２,４－Ｄ １．０ ｍ ｇ／Ｌ和葡萄糖０．４ ｍ ｏｌ／Ｌ的培养基上。培养３周后植板率达到１９．４％ 。在未添加新鲜培养基的情况下,原生质体再生的细胞可持续分裂,并于３个月时长成２ ｍ ｍ 大小的愈伤组织。将该愈伤组织转移到附加玉米素０．５ ｍ ｇ／Ｌ和ＩＡＡ ０．１ ｍ ｇ／Ｌ的固体ＭＳ培养基上,分化出苗。试管苗经诱导生根,长成完整小植株     

可乐茄叶肉原生质体培养再生植株

本文报道茄属果树可乐茄（ＳｏｌａｎｕｍｑｕｉｔｏｅｎｓｅＬａｍ．）叶肉原生质体的分离、培养及植株再生。幼嫩叶片原生质体经酶游离、纯化后,以１×１０４个／ｍｌ密度培养于稍加改良Ｋ８ｐ（附加２,４－Ｄ０．５ｍｇＬ（－１）、ＮＡＡ１．０ｍｇＬ（－１）和ＢＡ０．５ｍｇＬ（－１））的培养基中,三天后开始分裂,一周分裂３—４次。一个月形成小细胞团,植板率为０．１—０．２％,小细胞团转培养于ＭＳ＋２,４－Ｄ０．５ｍｇＬ（－１）上增殖后进行分化。原生质体来源愈伤组织在ＩＡＡ（０．１—１．０ｍｇＬ（－１））与ＢＡ或ＺＴ组合的培养基中能诱导器官发生,芽分化率最高可达４２．９％;但ＩＡＡ、ＢＡ、ＺＴ三者一起使用未见任何器官分化。小芽在ＭＳ＋ＩＡＡ０．２ｍｇＬ（－１）中生根成植株。可乐茄叶肉原生质体的植株再生,可应用于育种和茄属植物遗传工程研究。     

杏愈伤组织的超低温保存

杏茎段在附加１．０ｍｇ／Ｌ ２,４－Ｄ和０．１ｍｇ／Ｌ ＢＡ的改良ＭＳ培养基中诱导出愈伤组织,放入１０％ＤＭＳＯ＋０．５ｍｏｌ／Ｌ山梨醇或葡萄糖的冰冻保护剂中,以１Ｃ／ｍｉｎ的降温速度降至－４０℃,停留２ｈ后投入液氮保存,在４０℃水浴中化冻。继代培养８次生长１５－２０ｄ的愈伤组织保存后的相对存活率最高,不同品种基因型保存效果差异很大,保存后的愈伤组织生长量比对照减少,但经过２次继代培养后不再表现差     

影响大麦叶肉原生质体分离和培养的一些因子（简报）

从大麦幼苗分离叶肉原生质体，５ｄ苗龄的较４ｄ及６ｄ以上苗龄的得率高。提高Ｃａ＾２＋浓度有利于原生质体的分离，浓度为１０ｍｍｏｌ／Ｌ时的得率最高。在以添加０．５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ、１．０ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ及０．５ｍｇ／Ｌ ＺＴ的改良ＭＳ培养基和微弱的光照条件下，原生质体能持续分裂，并形成小细胞团。     

红豆草耐盐愈伤组织的筛选及植株再生

将红豆草种子在含１．２％ＮａＣｌ的ＭＳ培养基上萌发以消除盐敏感的幼苗,把存活的幼苗下胚轴切段在含１ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ、０．５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ及１．２％ＮａＣｌ的ＭＳ培养基上诱导愈伤组织,通过连续筛选得到可耐受１．８％ＮａＣｌ的愈伤组织,在有０．２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ和１ｍｇ／Ｌ ＩＡＡ存在下该愈伤组织分化出芽,待幼,待幼苗长至３ｃｍ左右时转至含２ｍｇ／ＬＮＡＡ和或ＩＢＡ的１／２ＭＳ培养基上生根。对对照     

海甘蓝愈伤组织再生植株的研究

海甘蓝种子在附加有２～５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０１ｍｇ／ＬＮＡＡ的ＭＳ培养基上,幼苗生长健壮。幼苗的下胚轴和子叶柄在ＭＳ＋１ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ＋０５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ的培养基上可以获得较好的愈伤组织。将来源于下胚轴的愈伤组织培养于含有０５ｍｇ／ＬＮＡＡ,２ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ的ＭＳ培养基上分化出的丛生芽状态最好。最佳生根培养基为１／２ＭＳ＋０５ｍｇ／ＬＢＡ。