苎麻原生质体培养及植株再生

用苎麻（Ｂｏｅｈｍ ｅｒｉａ ｎｉｖｅａ）子叶诱导愈伤组织并建立悬浮细胞系． 用４．５％ 纤维素酶、０．８％ 离析酶、０．８％ 半纤维素酶的混合酶液分离悬浮培养细胞,可得到２×１０６ 个／ｇ ｆｒ．ｗｔ的原生质体．这些原生质体以海藻酸钠包埋方式培养在附加２,４－Ｄ ０．５ ｍ ｇ／Ｌ、ＫＴ ０．５ ｍ ｇ／Ｌ 的ＫＭ８ｐ 培养基中,５０ ｄ 左右可形成肉眼可见的小愈伤组织．愈伤组织经过扩增,在不同的分化培养基上可诱导芽、根的形成,再生出完整植株． 子叶原生质体则仅能进行几次有限的分裂     

菜心下胚轴原生质体培养和植株再生

以萌发３—４ 天（长约４ ｃｍ ）的菜心（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｖａｒ．ｐａｒａｃｈｉｎｅｓｉｓ）无菌苗苍白下胚轴为材料,酶解分离原生质体。经纯化的原生质体,在含０．５ ｍ ｇ／ＬＺＴ、０．５ ｍ ｇ／Ｌ２,４－Ｄ、１．０ ｍ ｇ／ＬＮＡＡ 和０．４ ｍ ｏｌ／Ｌ葡萄糖的Ｋ８ｐ 培养基中,进行微滴培养。在起始培养１４—１８小时,原生质体再生新的细胞壁。３６ 小时再生细胞开始第一次分裂。第三天分裂细胞频率可达３５％ 。培养第８—９ 天,可见含８—１６个细胞的小细胞团,植板率为１５％ —１８％ 。３ 周后将发育成直径为２ ｍ ｍ 的白色小愈伤组织,转到含０．３ ｍ ｇ／Ｌ ２,４－Ｄ并用ｇｅｌｒｉｔｅ半固化的培养基上,增殖成４—５ ｍ ｍ 直径的愈伤组织。在ＭＳ＋ ３．２（或１．６） ｍ ｇ／Ｌ ＢＡ＋ １．６（或０．８） ｍ ｇ／ＬＺＴ＋ ０．０１ ｍ ｇ／Ｌ ＮＡＡ＋ ０．１ ｍ ｇ／ＬＧＡ３ 和０．２％ 蔗糖的分化培养基上,获得芽的分化。切下约２ ｃｍ 长的芽苗,转移到含０．２ ｍ ｇ／ＬＩＡＡ 和２％ 蔗糖的培养基上,生根形成完整植株     

党参原生质体再生植株

党参下胚轴愈伤组织原生质体在附加１．２ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ,０．２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ,０．２ｍｇ／Ｌ ＢＡＰ和０．１ｍｇ／Ｌ ＺＴ的ＭＳ,Ｃ８１Ｖ,ＤＰＤ及ＫＭ８ｐ培养基中进行液体体层培养。在ＫＭ８ｐ中获得了最高的分裂频率。葡萄糖作渗透剂优于甘露醇,两结合使用效果更好。在合适的条件下,原生质体培养３天出现第１次分裂,４周内形成大细胞团,培养６周后形成０．５－１．０ｍｍ大小的小愈伤组织。在附加２％蔗糖     

硬粒小麦单倍体原生质体培养及植株再生

由硬粒小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ｄｕｒｕｍ Ｄｅｓｆ．）×玉米（Ｚｅａ ｍａｙｓＬ．）建立的单倍性胚性愈伤组织,在继代培养４ 个月后置于含２．０ ｍ ｇ／Ｌ２,４－Ｄ、３％ 蔗糖、２００ ｍ ｇ／Ｌ水解酪蛋白、１４６ ｍ ｇ／Ｌ谷氨酰胺和３００ ｍ ｇ／Ｌ天冬氨酸的ＭＳ液体培养基中进行悬浮培养,４ 个月后形成了生长迅速、由大小不同（０．５ ～５ ｍ ｍ ）的愈伤组织块组成的愈伤组织悬浮系。酶解试验表明,２．０％ 纤维素酶ＲＳ和０．５％ 的离析酶效果最好,而液体悬浮培养物和固体培养的愈伤组织（在酶解时用锋利的解剖刀片切成１ ｍ ｍ 左右的小块）都能释放出大量原生质体,但悬浮培养物释放出的原生质体状态较好,胞质更浓厚,用ＫＭ８ｐ 培养基以琼脂糖包埋培养方式培养时分裂频率可达５％ 左右。由原生质体再生的小愈伤组织经增殖、筛选后可获得胚性愈伤组织,将其转移至分化培养基Ⅰ（０．２ ｍ ｇ／Ｌ ２,４－Ｄ、１．０ ｍ ｇ／Ｌ ＢＡＰ、０．１ ｍ ｇ／ＬＮＡＡ、３％ 蔗糖、２００ ｍ ｇ／Ｌ 水解酪蛋白、１４６ ｍ ｇ／Ｌ谷氨酰胺和３００ ｍ ｇ／Ｌ天冬氨酸的ＭＳ固体培养基）和Ⅱ（不含２,４－Ｄ,其它成分同Ⅰ）上进行分步分化培养可再生出完整植株,分化频率约为２０％     

百脉根愈伤组织原生质体再生植株

百脉根无菌苗幼茎在含２．０ｍｇ／Ｌ－,２,４－Ｄ,０．１ｍｇ／Ｌ２－ｉｐ的ＭＳ培养基上诱导和继代培养愈伤组织。选取绿色松散颗粒愈伤组织分离原生质体。原生质体培养在调整珠ＫＭ８Ｐ,Ｖ－ＫＭ,ＭＳ和ＳＨ培养基上「含３００ｍｇ／Ｌ,ＣＨ,２％ＣＷ,２％蔗糖,６％葡萄糖,２．０ｍｇ／Ｌ,２,４－Ｄ,０．５ｍｇｇ／Ｌ,ＢＡ,５ｍｍｏｌ／Ｌ ＭＥＳ」,原生质体再生细胞均能分裂,并形成小愈伤组织,但以ＫＭ８０为     

埃斯基红豆草下胚轴愈伤组织原生质体的培养与植株再生

埃斯基红豆幼苗的下胚轴切段在附加２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ,ＫＴ１ｍｇ／Ｌ的ＭＳ中形成胚性愈伤组织。来自１１－１３个月龄、继代６－１５天的愈伤组织的原生质体,在改良的Ｖ－ＫＭ液体培养基中可持续分裂形成细胞团,培养１０天时的分裂率和克隆率分别为６５．８８％和５３．３８％周后就可将将原生质体形成的小愈伤组织转于培养基上。原生质体在改良的Ｂ５液体培养基也可以分裂形成小愈伤组织,但分裂率低于Ｖ－ＫＭ。来自原     

水稻游离花粉培养的高频率再生植株

用二个水稻栽培品种（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａＬＳｕｂ．ｊａｐｏｎｉｃａ．）中花１１号和盐粳的花粉处于单核靠边期的共药,经低温处理１０－２０天,在无糖培养基中预培养２－４天后游离花粉进行培养。培养基为ＫＭ８Ｐ,附加１ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ,１００ｍｇ／Ｌ脯氨酸,５００ｍｇ／Ｌ水解酷蛋白,９％蔗糖。培养５天,花粉进行一次分裂,１０天后分裂频率为２１．３％,２１天可见小愈伤组织形成。随即将直径为０．５－１．     

土人参原生质体培养再生植株

分别由土人参（Ｔａｌｉｎｕｍ ｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ （Ｊａｅｑ．） Ｇａｅｒｔｎ．）组织培养再生苗的叶片和幼茎诱导的愈伤组织游离出原生质体．叶肉原生质体在培养中未能进行正常分裂,存活不过１ 周．愈伤组织原生质体在Ｐ４ 培养基中（Ｋ８ｐ＋ ２,４－Ｄ ０．２ ｍ ｇ／Ｌ＋ ＮＡＡ １．０ ｍ ｇ／Ｌ＋ ＺＴ ０．５ ｍ ｇ／Ｌ＋椰乳５０ ｍ Ｌ／Ｌ＋ 葡萄糖０．５ ｍ ｏｌ／Ｌ）培养３ ｄ 开始第一次分裂,培养７ ｄ 时分裂频率为３６．７％ ． 愈伤组织再生率在液体培养中为０．３１％ ,在双层培养中为０．３４％ ． 愈伤组织在含有较低浓度的６－ＢＡ 的分化培养基上分化出不定芽． 幼苗生根后移栽到花盆中继续生长,２～３个月后开花结实,长出粗壮的肉质根． 再生小植株在试管中继代培养２～３ 个月开花结实． 研究结果还表明∶（１）愈伤组织在液体培养基或增殖培养基中培养时间过长,或继代次数过多均不利于分化．（２）较低浓度的６－ＢＡ （０．５～０．７ ｍ ｇ／Ｌ）对愈伤组织的分化是合适的．（３）ＧＡ３ 对幼苗的发育有促进作用． （４）多效唑（ＭＥＴ）对土人参试管苗有明显的壮苗和壮根作用     

毛花猕猴桃原生质体再生植株

从毛花猕猴桃（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｅｒｉａｎｔｈａ Ｂｅｎｔｈ．）试管培养的实生苗新展开叶片分离的原生质体,培养在液体ＭＳ（除去ＮＨ４ＮＯ３）附加２,４－Ｄ １．０ ｍ ｇ／Ｌ和葡萄糖０．４ ｍ ｏｌ／Ｌ的培养基上。培养３周后植板率达到１９．４％ 。在未添加新鲜培养基的情况下,原生质体再生的细胞可持续分裂,并于３个月时长成２ ｍ ｍ 大小的愈伤组织。将该愈伤组织转移到附加玉米素０．５ ｍ ｇ／Ｌ和ＩＡＡ ０．１ ｍ ｇ／Ｌ的固体ＭＳ培养基上,分化出苗。试管苗经诱导生根,长成完整小植株     

向日葵下胚轴原生质体高频率愈伤组织形成与根发生

向日葵籽苗下胚轴原生质体,培养在含有ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ,２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ,ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ和葡萄糖０．５５ｍｇ／Ｌ的改良Ｋａｏ培养基中,２４～２８ｈ后,原生质体开始分裂。包埋在琼脂糖０．６％中的原生质体,培养５ｄ后,分裂频率达９５％以上。生长旺盛的小愈伤组织转移到含有２ｉｐ０．１ｍｇ／Ｌ,ＩＡＡ０．０１ｍｇ／Ｌ,腺嘌呤４０ｍｇ／Ｌ和ＧＡ３０．０１ｍｇ／Ｌ的Ｔｈｏｍｐｓｏｎ液体培养基上１３ｄ后,原生质体诱导的少数愈伤组织发生根分化。