青蒿转杜松烯合成酶基因发根系的培养

将已克隆的棉花杜松烯合成酶的ｃＤＮＡ（ｃａｄＣ１４）插入到植物表达载体ｐＢＩ１２１中,构建含ＣａＭＶ３５Ｓ启动子驱动下的杜松烯合成酶基因的植物表达载体ｐＢＩＣ１４。用含ｐＢＩＣ１４质粒的发根农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）１５８３４感染青蒿（ＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａＬ．）叶片并诱导发根,共建立１２１个生长迅速的发根系。经浓度为２０ｍｇ／Ｌ的Ｋａｎ筛选,获得１２个抗Ｋａｎ阳性根系。ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ分析表明,外源杜松烯合成酶基因已整合到青蒿基因组中,其转基因频率为３％。ＲＴＰＣＲ分析表明,外源杜松烯合成酶基因在Ｃ３７根系中,在转录水平上已有表达。     

秦艽体细胞胚不同发育阶段几种同工酶的特性

以秦艽（ＧｅｎｔｉａｎａｃｒａｓｓｉｃａｕｌｉｓＤｕｔｈｉｅｅｘＢｕｒｋｉｌｌ）无菌苗幼嫩茎叶为外植体,在ＭＳ培养基上诱导出胚性愈伤组织及体细胞胚。本文比较了秦荒体细胞胚发育过程中几种酶的活性及同工酶变化。过氧化物酶与细胞色素氧化酶均在球形胚阶段出现一活性高峰;酯酶同工酶在体细胞胚发育过程中伴有特征带Ｅ＿２、Ｅ＿６的出现;酸性磷酸酯酶的活性与体细胞胚发育程度呈正相关。所以认为只要综合运用这几种同工酶的实验数据,就可以灵敏检测体细胞胚的发育进程。     

盐胁迫下三色苋甜菜碱及有关酶含量的变化

三色苋(Amaranthus tricolor)不同器官中的甜菜碱(GB)含量显著不同.除子叶外,根、茎和叶的GB含量和茎、叶中的胆碱单加氧酶(CMO)含量都因300 mmol/L的NaCl处理而增加.甜菜碱醛脱氢酶(BADH)的表达无论盐处理与否在所有器官中都能检测到,其含量变化不大.当种子发芽时,具备合成GB的能力,CMO含量增加;在此之前未能检测到CMO,也不能合成GB.研究结果表明三色苋响应盐胁迫而合成GB的关键酶是CMO.     

党参体细胞胚胎发生早期阶段内源脱落酸和细胞分裂素的变化

以党参为实验材料,在附加1mg／L2,4-D3％或7％蔗糖的MS培养基上,成功获得体细胞胚胎发生同步化较高的实验体系。用ELISA方法测定了胚性细胞形成球形胚的过程中,内源ABA和CTK的含量变化。结果表明,在这一过程中内源ABA含量持续增加;内源CTK的组分和含量均发生很大变化,表现在组分iPAs在球形胚形成前急剧增加,球形胚形成期急剧下降,组分ZRs在球形胚形成前上升较缓慢,球形胚形成期急剧上升。     

中麻黄悬浮培养体系的建立

本文用中麻黄无菌苗为外植体,其切段培养在附加２ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ和０．５ｍｇ／Ｌ　６　ＢＡ的ＭＳ培养基上,全部脱分化形成白色疏松愈伤组织。愈伤组织继代培养于ＭＳ＋０．５ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ＋０．２ｍｇ／Ｌ６ＢＡ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋４％蔗糖的培养某上。以继代培养愈伤组织为材料进行悬浮培养,培养基为附加０．２ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ＋０．１ｍｇ／Ｌ６ＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ＋２％蔗糖的ＭＳ液体培养基,得到分散性好,细胞形状接近圆形,细胞大小均一,细胞团多由２－３０个细胞组成的悬浮培养体系。第三代悬浮培养细胞增长率为０．３５ｇ·ｆｗ／２０ｍｌ·ｄ,细胞有丝分裂指数为１１．２％。条件培养和高密度接种可缩短延迟期,条件培养不能提高分裂指数,１ｇ／１０ｍｌ接种密度可使分裂指数提高至２１．２％。     

棉花法呢基焦磷酸合酶cDNA克隆、序列分析及其在种子发育过程中的表达特征

根据法呢基焦磷酸合酶（ＦＰＳ）保守域设计简并引物,应用ＮｅｓｔＰＣＲ和ＰＣＲ９６孔板筛库技术分离到亚洲棉（ＧｏｓｙｐｉｕｍａｒｂｏｒｅｕｍＬ．）法呢基焦磷酸合成酶的ｃＤＮＡ。序列分析表明,该ｃＤＮＡ全长１２８０ｂｐ,开放阅读框共编码３４２个氨基酸残基,推断蛋白质分子量约为３９ｋＤ,推测的氨基酸顺序与拟南芥和青蒿的ＦＰＰ合酶序列同源性为７８９％和８０７％。应用ＲＴＰＣＲ定量分析ｆｐｓ１基因在“苏棉６号”（Ｇ．ｈｉｒｓｕｔｕｍＬ．ｃｖ．“Ｓｕｍｉａｎ６”）种子发育过程中的表达特征,发现从胚珠开始形成种子（开花后２０ｄ）至种子成熟（开花后４０ｄ）,ｆｐｓ１ｍＲＮＡ转录水平发生明显变化。在种子发育早期,开花后２０ｄ至２７ｄｆｐｓ１基因保持相对稳定的表达水平;但从开花后２７ｄ到种子成熟,ｆｐｓ１ｍＲＮＡ的转录水平迅速增高,此期倍半萜棉毒素在种子中的积累亦呈明显的增长趋势,完全风干成熟的种子中倍半萜棉毒素的含量可达１３ｍｇ／ｇ。推测ｆｐｓ１基因在转录水平参与种子中倍半萜类物质合成的调控。