介绍鸡胚体外无壳培养方法

鸡蛋作为生物学的实验材料,其历史已经相当悠久。鸡蛋取材方便,孵化条件简单,且一年四季都有新鲜材料可取,是胚胎学,发育生物学教学、科研的良好材料。但鸡胚在壳内发育,观察、实验又有其不便之处。鸡胚体外无壳培     

鸡胚壳外培养的探讨

鸡胚是胚胎学、发育生物学教学及科研的良好材料.鸡的种蛋作为生物学的实验材料,其历史已经相当悠久.鸡的种蛋取材方便,不受季节限制,只要有适当的温度(37.5°-38℃)、湿度(55-70%)、空气就能孵化,继续它的胚胎发育,供教学、科研使用.以前用鸡胚做研究,一般是鸡胚发育不脱离蛋壳,这就需要在蛋壳上开天窗进行手术和观察,不太方便,观察也有局限.如果能在壳外培养,那将提供很大方便.这     

鸡胚早期神经系统发育中凋亡细胞的分布研究

研究鸡胚18S（Stage）神经系统发育中凋亡细胞的分布及其生物学意义。采用HNK－1和TUNEL免疫组化双染及改变切片方向的方法观察了神经管和神经嵴的凋亡细胞,结果显示：凋亡的细胞在间隔10张横向切片上呈非均匀分布,但在矢状切面凋亡细胞有节段性分布趋势。体节处连续神经嵴没有发现凋亡细胞,而体节与体节之间神经嵴迁离神经管呈游离状并有凋亡细胞,神经管腹侧面体节处间充质细胞呈现细胞凋亡节段性分布。结果表明：鸡胚早期神经系统发育中选择性发生细胞凋亡作用。     

动物体节发生模型及其相关基因研究进展

脊椎动物在胚胎发育的过程中沿身体前后轴形成一定数目的暂时性结构—体节（somite）,随着胚胎的继续发育每个体节分化成为生骨节,生皮节和生肌节,继而生成各种组织。近三十年来,研究者们就体节的发生和发育提出了多种解释模型,这包括时钟波阵面模型,反应扩散模型,时钟诱导模型,时钟痕迹模型等,虽然这些模型能从不同角度不同程度来解释动物体节发生和发育的不同现象, 但无一能够解释体节发生和发育的全部。然而,大多数模型都提出了时钟分割（segmental clock）这一概念。鸡胚中的c-hairy1和c-hairy2,鸡胚、小鼠中的lunatic fringe以及斑马鱼中的her1, Delta C等几种基因的表达图式的研究为模型中分割时钟的存在提供了分子生物学上的有力证据。     

鸡胚不同发育时期原始生殖细胞的分离方法

采用Ficoll密度梯度离心法和EDTA-胰酶酶解法两种方法,分别提取第14期(孵化53h)血液、第19期(孵化72h)和第28期(孵化132h)生殖腺中的PGCs,以比较两种分离方法对3个发育时期的鸡胚原始生殖细胞在相同体外培养条件下存活时间的差异。结果发现,两种分离方法均能分离到一定数量的原始生殖细胞,但是酶解法分离到的原始生殖细胞的相对数量较Ficoll密度梯度离心法的多,存活时间较长,是一种适宜的分离方法;对鸡胚发育第14、19、28期3个时期提取的原始生殖细胞进行体外培养,存活时间分别为：72h、88h和80h,三者之间差异显著。结果表明：在鸡胚孵化的第19期,因原始生殖细胞大量聚集在肢体后端的生殖嵴原基处,因而较容易收集,体外培养较为适宜,具有较强的可操作性[动物学报49(6)：835～842,2003]。     

Scribble在原肠期鸡胚表达的研究

旨在研究极性脚手架蛋白Scibble(Scrib)在原肠期的表达及意义,明确Scrib在早期鸡胚发育中的作用.以含有全长人Scrib的质粒pEGFP-N2-Scrib作为模板克隆出N端一段770 bp左右的片段,从而构建一个新的质粒pSPT18-Scrib;以pSPT18-Scrib为模板进行体外转录制备cRNA探针;并采用原位杂交的方法用此探针检测鸡原肠胚各个时期Scrib的表达情况.结果显示,Scrib在鸡胚四期开始逐渐在原条顶端及两侧的外胚层表达,并随着发育过程向外胚层两侧蔓延扩散,并且在发展到十期时呈现包括神经管和体节在内的广泛的弥散性表达.Scrib的表达规律提示在胚胎发育早期Scrib对外胚层细胞迁移和分化以及而后的器官发生起到重要的作用,为进一步研究Scrib在鸡胚早期发育中的作用提供参考.     

真水狼蛛胚胎发育过程中形态和主要化学物质含量的变化

采用常规石蜡切片和液体石蜡透明卵壳的方法,系统地观察了真水狼蛛的胚胎早期,体节期,胚胎速转期和幼虫期4个发育阶段的形态特征和发育过程,并测定了胚胎发育过程中卵的内主要化学物质含量的变化,在28度时,真水狼蛛的卵从产卵到孵化共需144小时,其中胚胎早期42小时,体节期33小时,胚胎逆转期27小时,在胚胎逆转期后进入前幼虫期,前幼虫期42小时,真水狼蛛的胚胎逆转现象很明显,表明真水狼蛛的进化程度较高,在胚胎发育过程中,卵的含水量,含脂量和卵重在胎发育24hr后开始下降,卵的蛋白质含量在48小时后也开始下降,含糖量下降不明显。     

高温对方形黄鼠蚤各发育期生存发育的影响

本文报告了方形黄鼠蚤松江亚种各发育期半数致死高温(TD_(50))的测定及经1小时高温处理后各期的生存发育情况。试验测得各发育期的TD_(50)分别为:卵期37.49℃;三龄幼虫期37.69℃;茧蛹期39.32℃;成虫期雌虫40.81℃、雄虫41.03℃。卵鞠、三龄幼虫期、茧蛹期经39～40℃处理1小时,对其孵化、化蛹结茧和羽化过程有显著危害,但对发育期限无影响。     

EGTA影响鸡胚水晶体生长的研究

本文采用专一性颇强的Ca~(++)螯合剂EGTA改变眼腔内的Ca~(++)水平,研究细胞外钙在鸡胚水晶体发育过程中的调节作用。 我们用特制的鸡胚去壳培养“摇篮”,在39℃培养箱中培养鸡胚。发育至20期时,向右侧眼腔内注射EGTA水溶液;同胚未注射的左侧眼作为对照。注射后继续培养24小时,然后固定,并剥出水晶体进行     

回转器旋转对鸡胚脑细胞内游离Ca~(2+)水平的影响

采用ｆｕｒａ－２双波长荧光法,测定了孵化第６至１６天鸡胚脑细胞内游离Ｃａ２＋的浓度。并且利用回转器模拟微重力的生物效应,研究了不同胚龄鸡胚旋转不同时间后,脑细胞内游离Ｃａ２＋水平的变化。结果表明,孵化第８至１６天鸡胚旋转不同时间后,其脑细胞内游离Ｃａ２＋浓度均有所下降,其中第１０天鸡胚旋转４或７小时及第１３天鸡胚旋转２４小时后,脑细胞内Ｃａ２＋浓度比对照组显著降低（ｐ＜０．０１）。第１０天和１３天鸡胚分别旋转４和２４小时后再静置恢复相同时间,细胞内Ｃａ２＋浓度均有所增加,但仍低于对照组水平。结果显示,回转器旋转引起的鸡胚脑细胞内游离Ｃａ２＋水平降低是可逆的     

鸡种系嵌和体的研制及其AFLP检测

利用密度梯度离心等方法从孵化51-56 h的石歧杂鸡胚血液中提取PGCs,用自制的玻璃注射针将PGCs注射到孵化2.5 d的H系受体鸡胚中制备种系嵌和体鸡;通过筛选AFLP引物建立起家禽嵌和体的AFLP检测方法;经检测20个发育的PGCs受体鸡胚中有８个种系嵌和体,嵌和率为40%。     

“观察鸡卵的结构和鸡胚的发育”的实验教学

对"观察鸡卵的结构和鸡胚的发育"实验在实验材料的选择、实验装置的改进等方面进行优化。通过实验观察鸡胚的完整发育过程,有助于理解鸡卵的结构和鸡胚的发育,帮助学生构建动物个体发育的概念。     

钉螺体内日本血吸虫尾蚴发育期的形态及其扫描电镜观察

本文通过活体标本、连续切片、全封标本及扫描电镜观察了大陆品系日本血吸虫Schistosomajaponicum子胞蚴体内尾蚴发育期的形态。日本血吸虫尾蚴发育分为五期,即胚细胞期、胚球期、尾蚴雏体期、成熟前期和成熟期。与曼氏血吸虫尾蚴发育进行比较,日本血吸虫尾蚴在胚球期无极化现象;尾蚴雏体期的尾芽形态多非圆球形,尾叉形成较早。钻腺及焰细胞均在此期发生,较曼氏血吸虫尾蚴早。除了上述头器、头腺、钻腺、焰细胞及消化器官进一步发育外,体内散在胚细胞结集为生殖始基,体表感觉乳突分化与体尾肌细胞的发育,尾蚴从成熟前期过渡到成熟期。 电镜首次原位观察尾蚴发育在子胞蚴育腔内的自然状态。尽管偶尔可见到胞蚴体壁与胚元之间某些结构联系,但大部份的胚元各自独立混杂在育腔之中。此外尚注意到尾蚴体棘发生在成熟前期,但其密度较成熟尾蚴小,而其大小却比成熟尾蚴的大。尾蚴头器上感觉乳突和围褶可能先于内部腺体细胞的分化。     

不同时期鸡胚原始生殖细胞分离的研究

采用Ficoll密度梯度离心,酶解离两种方法在鸡胚孵化的第14期、19期、28期,分离、培养鸡胚中的原始生殖细胞(PGCs)。探索PGCs分离、培养的适宜时期及方法,以期获得较多数量,较高活力的PGCs作介导生产转基因鸡。结果表明：1．提取、分离PGCs的最佳时期依次为19期、28期。2．两种分离方法均能分离到一定数量的PGCs细胞。但在19期和28期,酶解离法分离到的PGCs的相对数量较多,存活时间较长,是一种较适宜的分离方法。     

四刺泡角跳（Ceratophysella duplicispinosa）个体发育的初步研究

描述了北方菜园优势跳虫四刺泡角跳（Ceratophysella duplicispinosa）的胚胎发育及胚后发育过程。结果表明：①四刺泡角跳为聚产卵,每窝卵数22-53粒,卵粒D=220μm。②其胚胎发育历时约8．3d（200h）,行完全均等卵裂,以内陷方式形成二胚层;③组织器官分化早期背面中部出现凹陷,成为头部与胸腹部最早的界限,同时在腹面出现附肢原基;④无体节幼虫期的触角、口器、足、腹管、弹器及腹部尾叶等器官都以附肢原基的形式出现,至孵化前期显现出各器官形态：出壳前3d开始出现一对红色眼斑。⑤胚后发育（自孵化出壳至首次产卵）历时29d,体色先后为白色（初孵化幼体）、棕红至灰色（亚成体）、紫黑色（成体）。     

鸡胚发育后期心电图的无损测定及心率变化

目的：测量鸣胚发育后期心电图,测定鸡胚发育后期心率及其变化.方法：利用壳膜外电极测量鸡胚心电图,根据RR间期计算鸡胚心率。结果：引出了具有较为清晰Q波、R波（振幅在8—20μV波动）、S波的鸡胚心电图。鸡胚的QRs间期在发育后期无明显变化,心率在D14～D20早期的心率变化较小,在D20后期和D21显著增加（P〈0．01）。结论：建立了壳膜外记录鸡胚心电图的方法,鸡胚在啄壳期心率显著增加.     

鸡胚原肠胚期原条细胞命运决定于其所处的局部微环境

在果蝇、斑马鱼、鸡等三胚层动物胚胎早期发育的原肠胚期,原条两侧的上胚层细胞进入原条经历上皮-间充质转化(EMT),迁移进入囊胚腔,形成松散的中胚层细胞,位于原条不同部位的细胞其迁移路线和分化命运不同,如前部原条细胞贡献于体节和心脏等,而后部原条细胞则迁移至胚外形成血岛。为了研究细胞的迁移途径及分化命运是否会随着细胞所处不同部位微环境的改变而改变,利用传统的移植技术,将宿主鸡胚原条前部的一部分细胞用GFP阳性的相同时期鸡胚原条组织替换,培养一段时间后,用荧光体视显微镜追踪GFP阳性细胞的迁移途径。结果发现,从供体原条后部移植到宿主原条前部的细胞遵循原条前部细胞迁移的路线,反之亦然;原位杂交结果显示移植后的GFP阳性细胞分化为所处部位的细胞类型。上述结果表明:鸡胚原肠胚期原条细胞迁移和分化的命运决定于细胞所处的微环境或者说局部基因表达的时空性。     

昆虫卵的孵化及破卵器

昆虫的发育,从卵受精到胚胎发育,这是一个过程。一旦胚胎发育完成以后,就必须破卵而出,进行其胚后发育过程,由幼期发育成长,进而至成虫羽化。胚胎发育是一个依靠母体留给营养,在卵内发育的阶段;胚后发育则是在自然环境中自行取食、获得营养成分,适应环境条件的独立生活阶段。这两个截然不同的发育阶段,在昆虫生活中是一个很大的转折。从胚胎发育阶段,转化为胚后发育阶段,其分界线就是孵化。所以孵化是昆虫一生中很重要的一步。刚刚完成胚胎发育的幼期,其体力自然十分纤弱,如何能破卵而出?在其生理上和行为上必须具备一定的适应条件,否则就会夭折。     

粤北山区饰纹姬蛙胚后发育的初步观察

初步观察记录了饰纹姬蛙Microhyla ornata胚后发育过程。饰纹姬蛙的卵采于广东韶关小坑国家森林公园,置于人工实验缸中自然孵化,在23.0～28.7℃水温条件下观察饰纹姬蛙蝌蚪胚后发育的过程。该蛙的胚后发育可以分为19期,历时31.1d,对其后肢芽、趾、前肢的发育,以及肛管及尾的变化等方面做了系统的描述,饰纹姬蛙蝌蚪的头长、体长、尾长和后肢长度随发育时间的增加而显著增长。     

探索不同发育时期鸡胚营养状况的变化

鸡胚是营养价值很高的食品,受精鸡卵在胚胎发育过程中能产生多种氨基酸、激素、酶免疫球蛋白、及多种RNA等生物活性物质.以鸡胚为营养添加剂,能促进生物体的生长,增强机体抗病能力.本实验探索不同发育时期的鸡胚营养成份对尼罗罗非鱼的发育生长的影响,并研究鸡胚在各时期发育过程中的营养物质变化状况.这能使我们找出鸡胚营养物质的最盛时期,便于开发利用,从而获得较好的经济效益和社会效益.