黑龙江省东部地区鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因检测

目的探讨鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,A.baumannii)耐药性及碳青霉烯酶相关耐药基因OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58的分布情况,为临床抗菌药物的合理选择提供依据。方法 2014年1至月2014年12月收集佳木斯大学附属第一医院临床标本(包括痰、分泌物、脑脊液、血液、咽拭子等标本),使用VITEK-II全自动微生物鉴定/药敏测试系统筛选出44株A.baumannii;采用多重PCR检测A.baumannii携带的碳青霉烯酶相关耐药基因OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58,并对耐药基因扩增的阳性产物进行DNA序列分析。结果 44株A.baumannii对复方新诺明、亚胺培南、左氧氟沙星的敏感率分别为65.91%、61.36%、61.36%,对其他抗菌药物的敏感率均低于50.00%。4种耐药基因的检测结果为:44株(100.00%)携带OXA-51基因,20株(45.45%)携带OXA-23基因,14株(31.82%)携带OXA-24基因,3株(6.82%)携带OXA-58基因。16株碳青霉烯类药物耐药A.baumannii中,14株(87.50%)携带OXA-23,1株(6.25%)携带OXA-58,8株(50.00%)携带OXA-24,5株(31.25%)同时携带OXA-23、OXA-24。DNA序列分析结果显示:OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58分别与NCBI的序列同源性均为99.00%。结论A.baumannii耐药性强,OXA-23型基因可能是A.baumannii对碳青霉烯酶类抗菌药物耐药的主要原因,我院发现我国少见OXA-24基因或许为区域性流行,携带多种耐药基因是导致A.baumannii对多种常用抗菌药物耐药的重要原因。     

真空冷冻干燥法保存菌种

我们测验了在室温(波动为5—36℃)贮藏4年半一8年,用脱脂牛奶作保护剂,真空冷冻干燥保存的559种20lo株细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌的存活力,以及其中部分菌株的主要生理特性。贮存在室温的真空冷冻干燥法保存的84种484株细菌,180种565株放线菌,59种459株酵母菌和236种502株丝状真菌的存活力分别是467(96·5％)、516(91．33％)、394(85．83％)和439(87·45％)。我们还观测了贮藏在5℃,1957年真空冷冻干燥法保存的细菌。在这种条件下保存16年的32种126株细菌,103株(81．74％)保持着活力,除个别菌株外,没有任何种的死亡。所测定的17株真空冷冻干燥保存的菌种的生理特性,与定期移植保存的同一菌株对比结果,除两株大肠杆菌,其中l株谷氨酸脱羧酶活力减退外,其他菌株都没有明显的变化。     

洱海鱼腥藻优势种的形态鉴定与16S rRNA 基因序列分析

分别在2004年、2005年和2006年洱海鱼腥藻水华暴发时期,分离优势种,获得藻株EH-A、EH-B和EH-C,通过形态学特征和16S rRNA基因序列分析鉴定了藻株的种类.选用藻丝的形态、气囊的存在与否、异形胞和孢子的位置、各种细胞的形状以及营养细胞、异形胞和孢子的大小等传统的分类特征描述藻株的形态.依据形态特征,初步判断这3个藻株可能为卷曲鱼腥藻(Anabaena circinalis)或 A.crassa株系成员.利用16S rRNA基因序列构建邻接树分析了藻株间的系统进化关系,分析表明:藻株EH-A、EH-B和EH-C序列的同源性达到100%,且与A.circicular 和A.crassa藻株组成一个群(cluster),其藻株间的序列相似度高达100%,进一步说明藻株EH-A、EH-B和EH-C为相同的物种,且均为卷曲鱼腥藻(A.circinalis)或A.crassa.     

矿油封藏法保存子囊菌的效果

用矿油(液体石蜡)封藏法保存子囊菌,10年后,经测定在26属55种292株中,存活20属47种227株,存活率78%。结果表明,此法对侵管新赤壳(Neocosmospora vasinfecta)、光亮卷钩丝壳     

我国分离的肠道病毒71型(SHZH03病毒株)全基因组核苷酸序列分析

对肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)中国(深圳)分离株SHZH03进行了全基因组(未包括多聚腺苷尾)7406个碱基的核苷酸序列测定.结果表明,SHZH03株与其它肠道病毒71型毒株相比,在编码区没有核苷酸的缺失和插入,其5′UTR和3′UTR区的长度和序列有一定的差异.核苷酸同源性比较结果表明,在P1区SHZH03株与SHZH98株、中国台湾流行株(TW2086、TW2272)的同源性较高(分别为92.5%,90.1%和87.9%),与新加坡流行株SIN5666、SIN5865及标准株MS、BrCr的同源性则在81%左右,而与Coxsackievirus A16(Cox.A16)的同源性最低(63.6%).氨基酸同源性比较结果表明,在P1区SHZH03株与Cox. A16的同源性最低,但在P2和P3区SHZH03株与Cox.A16的同源性最高.P1区的遗传进化分析表明,SHZH03株和中国台湾1998年流行的EV71毒株的亲缘关系较近,属于同一型(genogroup),而与标准株BrCr和MS的亲缘关系较远.上述结果有助于肠道病毒71型的基础研究和中国对于EV71所致疾病的预防.     

砂土法、矿油封藏法保存链霉菌17年效果的评定

本文总结了用砂土法保存130个种、14个变种、409株链霉菌以及矿油封藏法保存其中103个种、11个变种、307株菌17年的效果;其中部分菌株的抗菌素产生能力和蛋白酶活力的测定结果;经矿油封藏后,死亡菌株的矿油层,用红外光谱法检查的结果。用砂土法保存的409株菌,17年后存活384株,存活率为93.9%;在144种（包括变种）中,有101种（70%）保持着原来的形态特征。用矿油封藏法保存的307株菌,17年后存活256株,存活率为83.4%;其中169株（66%）保持着原来的形态特征。产生链霉素的灰色链霉菌（Streptomyces griscus）As 4.181、比基尼链霉菌（S.bikiniensis）AS 4.569,产氯霉素的委内瑞拉链霉菌（S.venezu（?）la（?））AS 4.223等菌株,用矿油封藏法比砂土法保存得到较好的效果。产生新霉素的弗氏链霉菌（S.fradiae）AS 4.576,用砂土法保存效果较好。矿油封藏法保存链霉菌对保持蛋白酶活力,有着良好的效果。经红外光谱法检查19株失活的菌株的矿油层,其中17个样品于1710厘米-1或1600厘米-1处有吸收带。根据红外光谱,此吸收带属于脂肪族或芳香族中（?）c=c（?）基的伸展振动,与 Arai 用此法保存诺卡氏菌,分枝杆菌测出的结果近似。故推测链霉菌经此法保存后,菌株死亡的原因是由于浸出了细胞中类脂所致。砂土法和矿油封藏法对于长期大量保存链霉菌,是两种简便而且可取的方法。     

不同人群肠道携带耐万古霉素肠球菌的研究

调查住院病人、门诊病人和正常人粪便中耐万古霉素肠球菌的携带率及其耐药表型、基因型和同源性,为临床预防和治疗选药提供依据.根据CLSI指南做药敏试验,用PCR法检测万古霉素耐药基因,用重复基因外回文序列-聚合酶链反应(REP-PCR)进行同源性分析.从住院病人肠道中分离出31株(20.67%)耐万古霉素肠球菌,其中22株VRE为VanA基因型,9株VIE为VanC1基因型.22株VRE同源性分析,A型有19株,其中A1型4株,A2型6株,A3型4株,A4型3株,A5型2株.B型、C型、D型各1株.9株VIE中有3对菌株分别有100%同源性.门诊病人分离出4株VIE(4%),为VanC1型,其中两株有100%同源性.正常人中分离出11株(27.5%)VIE,8株为VanC1型,3株为VanC2型;11株VIE同源性分析,以A型为主,A1型有1株,A2型有2株,A3型有1株,A4型有1株,D1、D2、D3型各有1株,B、C、E型各有1株.2株住院病人VIE与2株门诊病人VIE有100%同源性,另外2株住院病人VIE与1株门诊病人VIE有100%同源性.他们与正常人分离的VIE同源性低.22株VRE对万古霉素的MIC值>512μg/mL,16株VIE对万古霉素的MIC值为16μg/mL.8株VIE对万古霉素MIC值为8μg/mL.可见住院病人肠道中VRE携带率高,是医院感染的危险因素,46株耐万古霉素肠球菌的耐药表型与耐药基因型一致:耐万古霉素肠球菌对多种抗菌药物耐药;部分菌株有较高的同源性.     

威海地区幽门螺杆菌耐药谱表型及遗传特征分析

目的研究威海地区的幽门螺杆菌对阿莫西林(AMX)、克拉霉素(CLA)、甲硝唑(MTZ)和四环素(TET)的耐药性表型和基因型。方法对172株分离自消化不良患者的幽门螺杆菌进行药敏试验检测,采用PCR法对甲硝唑耐药菌株进行rdx A和frx A基因的扩增。结果共检出耐4株阿莫西林耐药株(2.3%)、16株克拉霉素耐药株(9.3%),以及90株甲硝唑耐药株(52.3%)和6株四环素耐药株(3.5%)。所有甲硝唑耐药菌株中的rdx A基因发生了改变并直接导致Rdx A蛋白的氨基酸序列发生变化。在52株甲硝唑耐药株中发现frx A基因的错义突变,而在14株甲硝唑耐药株中检出了由于移码突变造成的frx A基因表达的提前终止。结论本地区的幽门螺杆菌对甲硝唑有较高的耐药率,与该类细菌染色体中rdx A和frx A基因的突变有关。     

液氮保存曲霉菌种的效果

本文报告了以蒸馏水、10%甘油和5%二甲基亚砜(DMSO)为保护剂,用液氮冻结法保存5种8株曲霉的效果,并检测了这些菌分别产生的亚甲基丁二酸、柠檬酸、蛋白酶和糖化酶的生理活性。这些菌在液氮气相(接近-150℃)中保存180天全部保持着生活能力,它们的培养特征和形态特征保留原来的形状。所测定的液氮保存8株菌种的生理活性,除两株糖化酶活力稍有降低外,其它菌株没有明显的变化。     

肛周脓肿和肛瘘患者的病原菌分布及其与血清MMP-2、IL-17A水平的相关性

目的分析肛周脓肿与肛瘘患者的病原菌分布及其与血清基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、白细胞介素-17A(IL-17A)的相关性。方法收集2017年3月至2019年11月在我院收治的肛周脓肿和肛瘘患者共69例,分为肛周脓肿组(n=23)、肛瘘病程90 d组(n=20)、肛瘘病程90～180 d组(n=17)、肛瘘病程180 d组(n=9)。收集患者脓液或瘘管分泌物进行细菌培养,同时采集血清标本检测MMP-2、IL-17A水平,分析病原菌分布与MMP-2、IL-17A表达的相关性。结果 69份标本中有66份标本培养出细菌,阳性率为95.65%(66/69)。共分离出68株细菌,其中有2份标本出现2种细菌同时生长,混合感染率为3.03%,其余64份标本均为单一细菌生长。68株细菌中革兰阴性菌58株(85.29%),革兰阳性菌8株(11.76%),真菌2株(2.94%)。各组患者血清MMP-2、IL-17A阳性率比较差异有统计学意义(均P0.05)。单一病原菌感染患者血清MMP-2、IL-17阳性率差异无统计学意义(均P0.05)。血清MMP-2与IL-17A水平呈正相关(r=0.325,P=0.009)。结论肛周脓肿与肛瘘患者以单一病原菌感染为主。患者血清MMP-2与IL-17A水平呈正相关。     

内蒙古沙泥蜂属四新种(膜翅目:泥蜂科)

本文描记了采自内蒙古的沙泥蜂属(Ammophila)四新种:平顶沙泥蜂(A.planicollaris)、红异沙泥蜂(A.rubigegen)、突唇沙泥蜂(A.clypeola)及北方沙泥蜂(A.borealis)。模式标本均保存在北京农业大学昆虫标本室。     

PCR快速检测伪狂犬病病毒野毒感染

根据已发表的伪狂犬病病毒(PrV)gE、gI基因的序列,设计并合成了一对引物,以PrV容A株细胞培养毒为模板,筛选最佳反应条件和试剂工作浓度,建立了区分PrV野毒株和疫苗弱毒的鉴别PCR方法.该方法能从PrV容A株(RA)、上海株(SH)、鲁A株(LA)中扩增出一条848bp的片段,但Bartha-K61株没有扩增出该片段.测序结果表明PCR扩增产物和方法的特异性.对正常细胞与其它6种引起猪病毒性疫病相关病毒进行检测,结果均为阴性,没有出现交叉反应.对PrV容A株细胞毒提取物DNA进行检测,其最低检出量为5pg.PCR对感染野毒的发病猪不同组织器官检测发现,淋巴结检出率最高,依次为脾、脑(海马角)、肺、肾、肝等.对2003～2004年期间江苏、浙江、安徽、福建、上海等省市的37个大中型猪场送检的172份病料进行PCR检测病料阳性率为20.34%(35/172),猪场阳性率为40.54%(15/37).实验结果表明所建立的PCR技术可用于伪狂犬病野毒感染的快速鉴定和流行病学调查.     

亚历山大藻属微卫星标记的筛选

采用生物信息学方法,从塔玛亚历山大藻的ESTs数据库中筛选微卫星(Simple Sequence Repeat, SSR)位点,设计SSR引物,利用毛细管电泳对4株塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense)、2株相关亚历山大藻(Alexandrium affine)和1株链状亚历山大藻(Alexandrium catenella)进行种内、种间遗传多样性分析,获得以下主要结果:(1)从6830条非冗余的ESTs中共查找到222个SSR,平均每18.5kb就有一个SSR,三核苷酸重复在所有的重复类型中所占比例最大,达到48.2%,重复单元CTG/CAG出现频率最高.进一步筛选出12条SSR引物,用于遗传多样性分析.(2)种内遗传多样性水平整体偏低,多态性引物比率仅为41 67%,Nei's基因多样性平均为0.2130.种间遗传多样性水平较高,多态性引物比率为75%,Nei's基因多样性平均水平为0 4643;另外,种间遗传分化系数较高,平均水平为0.7051.(3)对7个样品的聚类图分析发现,A. tamarense CCMP116 与A. affine CCMP112遗传距离极为接近;A. tamarense ATHK9301、CCMP1598和ATDH01相互聚在一起;A. catenella ACDH01与A. tamarense分属两枝.以上结果表明,SSR标记在亚历山大藻种内遗传多样性分析方面是一种非常有用的工具.     

原螳螂属一新种记述(螳螂目:螳螂科)

原螳螂属Anaxarcha Stal(1877)隶属于螳螂科Mantidae姬螳螂亚科Acromantinae.模式种是A.graminea Stal。全世界已知4种:A.sinensis Beier(1932)分布于我国广东;A.limbata Giglio-Tos(1915)分布于婆罗洲;A.graminea Stal(1877)和A.acuta Beier(1963)分布于印度。作者收集2种:中华原螳螂A.sinensis Beier及—个新种,至此本属增至5种,现记述于下。模式标本保存于南京林业大学昆虫标本室。     

用“199”及“RPMI1640”在体外连续培养红内期猴脆疟原虫

脆疟原虫(Plasmodiumfragile)是寄生于印度及斯里兰卡的猴子(Macacaradiata及M.sinica)体内的一种疟原虫,在实验室可以感染恒河猴(M.rhesus)。感染恒河猴的脆疟原虫与感染人的恶性疟原虫有很多相似之处。1979年W.Chin等用Trager—Jensen培养恶性疟原虫的方法在体外用RPMI1640连续培养红内期脆疟原虫7个月以上,并应用于恒河猴模型研究疟疾疫苗(Collins,1979)。W.Chin于1979年10月来我国讲学时,将保存于美国疾病控制中心(CDC)实验室的Nilgiri株脆疟原虫赠送我国供研究用。我所获得此株疟原虫后,即接种保存于四川产的恒河猴及青猴体内,…     

VacA在幽门螺杆菌BCF中的表达及其与空泡毒作用的关系

目的 :研究幽门螺杆菌 (H elicobacter pylori,H .pylori)临床分离株的空泡毒作用及其与空泡毒素抗原 (Vacuolated cytotoxin antigen,Vac A)的关系。方法 :用细胞毒试验、SDS- PAGE结合薄层扫描研究H.pylori临床分离株空泡毒作用及其与 Vac A的关系。结果 :6 2株 H.pylori临床分离株 ,43株为空泡毒作用阳性 H .pylori(Toxin+) ,其余为空泡毒作用阴性的 H .pylori(Toxin- )。 30 .2 3% (13/ 43) H .pylori(Toxin+)临床分离株的肉汤培养滤液 (broth culture filter,BCF)含有分子量为 87k Da的 Vac A,而所有H .pylori(Toxin- )的 BCF不含有这种蛋白 ,二者之间差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ;Vac A含量与 H .pylori(Toxin+) BCF的空泡毒作用滴度明显相关 (r=0 .6 7,P<0 .0 5 )。结论 :H.pylori(Toxin+)空泡毒作用是由 Vac A引起的。     

牛源无乳链球菌长尾噬菌体的特性

【目的】分离鉴定噬菌体,对其生物学特性进行研究,并筛选候选毒株为防控牛源无乳链球菌的感染提供依据。【方法】分别采用从牛奶或环境中分离、溶原菌诱导两种方法分离鉴定无乳链球菌噬菌体,利用双层琼脂平板法纯化。将新分离鉴定毒株与前期已分离鉴定的源自乳腺炎牛奶的无乳链球菌噬菌体JX01进行分析和比较,包括噬菌体透射电镜形态观察、对55株无乳链球菌和其他细菌的宿主谱鉴定、噬菌体基因Eco R I、Sal I、Xba I或Pst I的酶切图谱、最适MOI、吸附曲线和一步生长曲线、不同保存条件下的稳定性等。【结果】分离鉴定的3株噬菌体LYGO9、HZ04和p A11(诱导自牛源菌株HAJL2011070601)与JX01比对分析,结果显示,4株噬菌体均为长尾噬菌体;Eco R I、Sal I、Xba I、Pst I的酶切图谱分获4、3、3或2种带型,显示4株噬菌体为不同毒株;均特异性裂解牛源无乳链球菌,对42株牛源无乳链球菌的裂解率如下:LYGO9为28.6%(12/42)、p A11为31%(13/42)、HZ04为47.6%(20/42)、JX01为54.8%(23/42);同时,LYGO9与p A11、HZ04和JX01分别有共同宿主11、12和11株;HZ04与JX01有共同宿主18株,提示它们具有同源性。LYGO9感染宿主的潜伏期短,仅5 min,平均裂解量为30。分离株在SM液中4°C至少可保存1个月。【结论】分离鉴定的3株牛源无乳链球菌噬菌体均为长尾噬菌体,其中LYGO9潜伏期短、裂解量较大。     

三单位保存的艾氏腹水癌细胞株及克隆细胞蛋白质表达

目的　比较三个单位保存的艾氏腹水癌 (EAC)细胞株及克隆细胞的蛋白质表达。方法　对北京市肿瘤研究所 (北京 )保存的EAC进行克隆培养 ,从中选出 5株克隆 ;对武汉大学保种中心 (武汉 )、山东省医学科学院药物研究所 (山东 )及北京保存的EAC细胞株及 5株克隆细胞的SDS PAGE电泳图谱及免疫组化蛋白质分布进行了对比。结果　武汉、山东及北京保存的EAC的电泳条带数分别为 2 2、2 5及 2 8条 ,而克隆细胞E2G8为 2 6条带。三单位EAC瘤细胞对 5种抗体做免疫组化染色 ,与 1株抗体反应的阳性细胞比例均较高 ,差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,与另 4种抗体反应的阳性细胞率差异有显著性 ;5株克隆细胞对 10种抗体作免疫组化染色 ,其中克隆细胞E2G8、E2F4与 7种抗体反应阳性 ,E2C6与 8种抗体反应阳性 ,E1G5、E2B5与 6种抗体反应阳性。克隆细胞一旦与某种抗体反应阳性 ,阳性细胞的比例即在 85 %以上。结论　不同单位保存的EAC细胞株及克隆细胞株蛋白质表达有差异     

冷箭竹根际土壤中可培养细菌的多样性

为了解冷箭竹(Bashania fangiana)根际土壤中可培养细菌的多样性,2006年5月从四川卧龙自然保护区冷箭竹根际土壤中共分离出50株具不同菌落形态的细菌.16S rDNA序列分析结果表明:50株菌分属于10个属26个种.27株属于变形菌门γ亚群(Gammaproteobaeteria)(42.3%)、9株属于厚壁菌门(Firmicutes)(26.9%)、4株属于放线菌门(Actinobacteria)(15.4%)、6株属于变形菌门β亚群(Betaproteobacteria)(7.7%)、3株属于变形菌门α亚群(Alphaproteobacteria)(3.9%),1株与土地杆菌属(Pedobacter)关系密切.假单胞菌属(Pseudomonas)和芽孢杆菌属(Bacillus)为优势菌属.2株菌为可能的新种或属.研究表明冷箭竹根际土壤中含有较为丰富的微生物多样性.