杂合抗菌肽CecA-mil的改造及在毕赤酵母中的分泌表达

参照毕赤氏巴斯德酵母(Pichia pastorts)偏好密码子,改造并化学合成杂合抗菌肽CecA-mil基因,改造后的CecA-mil基因克隆到pPICZα-A载体中,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-CM,转化Pichia pastoris受体菌X-33。在醇氧化酶(AOX)启动子调控下,分子量约1．9kD的CecA-mil杂合抗菌肽获得表达,经表达条件优化,重组酵母菌的摇瓶发酵产率可达到245μg／mL。抗菌特性研究表明,该表达产物具有广谱抗菌活性,对多数G^-菌及G^ 菌均有较好的抑菌活性,特别是对氨苄青霉素抗性菌和卡那霉素抗性菌抑杀效果更好;具有热稳定性和酸稳定性。这些特点使得重组抗菌肽CecA-mil在食品防腐、疾病防治和动物饲料添加剂等方面显露出很好的应用前景。     

遗传距离的错误观点和病毒进化踪迹的探索

通过对病毒基因序列的遗传距离(K)的演算,发现公式中的p和q应理解为转换率和颠换率;计算所得的K值是一个百分率,更适合于显示生物进化的时间概念。因此建议将遗传距离改名为进化率。并从进化率计算中的规律性变化,探索了病毒进化的信息。     

遗传距离的错误观点和病毒进化踪迹的探索

通过对病毒基因序列的遗传距离(K)的演算,发现公式中的p和q应理解为转换率和颠换率;计算所得的K值是一个百分率,更适合于显示生物进化的时间概念.因此建议将遗传距离改名为进化率.并从进化率计算中的规律性变化,探索了病毒进化的信息.     

从近两年高考生物学试题命题看试题标准化方向

一九八六年、一九八七年生物学高考试题在重基础知识的同时,面广、份量适中、难度有所提高,题型有所翻新。与前几年相比,生物学高考命题向标准化方向发展迈出了新的一步。一、试题基本情况     

“形相似义不同”概念的辨析

在初中生物学教学中,经常遇到一些容易分辨不清的概念,应及时诱导,予以辨析。１　胚盘与胎盘胚盘　指动物卵上形成胚胎的盘形区域。凡是含卵黄特别丰富的卵,如鸟卵、爬行类等的卵,其原生质都集中在动物极一端,呈小盘状,卵裂仅在此区内进行,这便是形成胚胎的基础。胎盘　是胎儿与母体交换物质的构造。人类胎盘是由胎儿叶状绒毛膜与母体子宫内壁基蜕膜组成,叶状绒毛膜间充满着母体血液,通过渗透作用与母体进行物质交换。２　心率与心律心率　是指心脏每分钟跳动的次数。成年人在安静状态下心率为７５次／分。一般变动范围在６０—１…     

PCR快速检测伪狂犬病病毒野毒感染

根据已发表的伪狂犬病病毒(PrV)gE、gI基因的序列,设计并合成了一对引物,以PrV容A株细胞培养毒为模板,筛选最佳反应条件和试剂工作浓度,建立了区分PrV野毒株和疫苗弱毒的鉴别PCR方法。该方法能从PrV容A株(RA)、上海株(SH)、鲁A株(LA)中扩增出一条848bp的片段,但Bartha-K61株没有扩增出该片段。测序结果表明PCR扩增产物和方法的特异性。对正常细胞与其它6种引起猪病毒性疫病相关病毒进行检测,结果均为阴性,没有出现交叉反应。对PrV容A株细胞毒提取物DNA进行检测,其最低检出量为5pg。PCR对感染野毒的发病猪不同组织器官检测发现,淋巴结检出率最高,依次为脾、脑(海马角)、肺、肾、肝等。对2003～2004年期间江苏、浙江、安徽、福建、上海等省市的37个大中型猪场送检的172份病料进行PCR检测病料阳性率为20．34％(35／172),猪场阳性率为40.54％(15／37)。实验结果表明所建立的PCR技术可用于伪狂犬病野毒感染的快速鉴定和流行病学调查。     

Magainin和cecA-mil抗菌肽基因的密码子优化及在毕赤酵母中的高效表达

选用毕赤酵母偏爱密码子 ,设计合成了新型抗菌肽基因。所合成的magainin基因和cecA mil杂合肽基因全长分别为 1 0 1bp和 60bp ,并在其N端引入kex2裂解位点 ,以保证表达抗菌肽具有天然N端。其中 ,cecA mil杂合肽基因根据cecropinAN端第 1～ 7个氨基酸残基、melittinN端第 5～ 1 2个氨基酸残基所设计合成。基因分别克隆入pPICZα A质粒 ,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα A mag和pPICZα A CM。在AOX1 (醇氧化酶 )启动子调控下 ,类似天然抗菌肽大小的magainin及cecA mil蛋白获得分泌表达 ,其表达量分别为 1 0 5mg L和 1 1 8mg L。初步抑菌活性测定 ,显示两者对金黄色葡萄球菌及E .coliDH5α有较好的抑杀活性。     

重组magainin抗菌肽表达条件的优化及其对抑菌活性的影响

对magainin抗菌肽重组酵母菌的摇瓶发酵条件进行了优化。结果表明 :当重组酵母菌在BMGY培养基中增殖至OD₆₀₀ 为 5～ 6时转接BMMY培养基 ;BMMY培养基pH值为 6.0 ,表达后期pH值控制在 3.0 ;2 6℃培养 48h ;补加 0.5 %甲醇的同时补加 3%营养液 ;可提高magainin抗菌肽的表达量。优化后摇瓶发酵的表达量可提高到 195 μg/ml。     

培养学生学习生物课的兴趣和能力

经国家教委审定的《全日制中学生物学和生理卫生教学大纲》明确指出:通过生物学和生理卫生课的学习,使学生掌握生物学和生理卫生的基础知识和基本技能、发展学生的智力,培养学生的能力。还明确指出:生物教师在教学中要注意培养学生自学和观察能力、分析和解释一些现象的能力。下面谈一下自己教学中的点滴体会。一、用丰富多彩的语言绘声绘色讲解,用趣味性丰富知识性,恰到好处,就能调动学生     

中国桃蚜形态学研究(英文)

对来自中国不同地区的烟草、油菜和桃树的桃蚜形态特征研究结果表明：在所研究的14个形态特征中,喙末节端部的次生毛的数目这一形态特征在所有的样本中均无显著差异。聚类分析表明采自桃树上的桃蚜的形态特征与采自其它寄生植物上的桃蚜的形态特征差异最大;其次是采自长春烟草上的桃蚜。油菜上的桃蚜在形态上比桃树上的桃蚜更接近烟草上的桃蚜。我国中南部烟草上的桃蚜又可区分为黄绿和红褐两类。在本研究中所用的14个形态特征不能明确地将我国烟草上的桃蚜与其它寄生植物上的桃蚜区分开。