季节性流感裂解疫苗在小鼠中针对同型与异型流感病毒的免疫保护效力

为了研究季节性流感裂解疫苗在小鼠中针对甲型流感病毒同型同株、同型异株、异型异株攻击的免疫保护效力及其与诱发的血凝抑制(HI)抗体滴度的关系,本研究使用我国2008~2009年度季节性流感裂解疫苗中不同剂量的甲1型流感病毒H1N1(疫苗株病毒A/Brisbane/59/2007(H1N1)-like)和甲3型流感病毒的H3N2(疫苗株病毒A/Brisbane/10/2007(H3N2)-like)疫苗组分免疫BALB/c小鼠,首先确定了能在小鼠中诱发血HI抗体滴度达到40的疫苗免疫剂量;然后以此剂量免疫小鼠,分别使用同型同株流感病毒(鼠肺适应株A/Brisbane/59/2007(H1N1)-like virus(MA))(简称A1)和同型异株流感病毒(鼠肺适应株A/Purto Rico/8/34(H1N1))(简称PR8)攻击H1N1疫苗免疫小鼠,使用异型异株流感病毒A1攻击H3N2疫苗免疫小鼠,通过体重变化和存活率情况,探讨季节性流感疫苗在小鼠中针对甲型流感病毒同型同株、同型异株、异型异株攻击的保护效力。结果显示,季节性流感裂解疫苗H1N1和H3N2组分按照HA不同剂量0.15μg、0.5μg、1.5μg、5μg和15μg免疫小鼠后,所诱发的HI抗体滴度随免疫剂量的增加而增强,1.5μgHA即可以诱发免疫小鼠HI抗体滴度达到40;以此剂量免疫小鼠,分别使用3LD50、10LD50、30LD50、100LD50、300LD50、1 000LD50和3 000LD50的同型同株流感病毒A1进行攻击,1.5μgH1N1疫苗可以100%保护小鼠抵御高至1000LD50同型同株流感病毒A1的攻击,15μg甚至可以100%保护3 000LD50同型同株流感病毒A1的攻击,但是这两个剂量免疫的小鼠在低至3LD50同型异株流感病毒PR8的攻击后都全部死亡;使用可以诱发HI抗体滴度达到140的15μg H3N2疫苗免疫小鼠,在低至3LD50异型异株流感病毒A1的攻击后亦全部死亡。以上结果表明,季节性流感疫苗可使小鼠HI抗体滴度达到40的疫苗免疫剂量为1.5μg,该免疫剂量可以有效保护小鼠抵御同型同株流感病毒的攻击,但是难以保护小鼠抵御同型异株与异型异株流感病毒的攻击,这一结果为建立以季节性流感疫苗为参考的免疫保护评价体系提供了实验依据。     

流感病毒裂解疫苗临床安全性和免疫原性研究

目的了解流感病毒裂解疫苗的安全性和免疫原性。方法按整群随机抽样原则,对上海市200名18~60岁健康成人进行疫苗接种后临床安全性指标(局部反应、全身反应)的监测。用微量血凝抑制试验检测血清HI抗体,比较血清抗体阳转率、抗体几何平均滴度(GMT)和增长倍数。结果接种疫苗72 h内局部反应率为7.00%;全身反应率为12.00%,其中发热反应率为7.50%,其他全身反应率为4.50%;均以轻度反应为主。H1N1、H3N2和B型免疫后抗体阳转率分别为63.49%、74.07%和56.08%,抗体GMT分别为1∶170.10、1∶128.85和1∶446.79,免疫后比免疫前分别增长到6.93倍、8.72倍和4.90倍。结论此流感病毒裂解疫苗的临床安全性和免疫原性均较好。     

流行性感冒裂解疫苗免疫原性试验及电镜观察

实验报告了以三硝基甲苯X-100(Triton X-100)为裂解剂对流行性感冒病毒裂解效果的电镜观察结果及裂解疫苗的免疫原性。通过对病毒纯化、裂解、再纯化制备的3批流行性感冒裂解疫苗样品的电镜观察,表明使用此裂解剂能使疫苗中的病毒裂解完全,无完整病毒颗粒,裂解效果好。安全试验和免疫试验结果表明疫苗的安全性好,免疫效果好。     

流感病毒裂解疫苗上市后再评价研究

目的评价流感病毒裂解疫苗上市后在较大范围人群中接种的安全性和免疫原性。方法回顾分析2013年和2015年分别在四川省和湖北省开展的安全性再评价中收集的疑似预防接种异常反应(adverse events following immunization, AEFI)数据,分析AEFI报告发生率。分析2007年和2015年分别在江苏省盐城市和湖北省汉川市开展的免疫原性再评价,招募≥6月龄健康受试者,接种流感病毒裂解疫苗,检测受试者免疫前及全程免疫后28 d血清H1N1、H3N2和B型流感病毒血凝抑制(haemagglutination inhibition, HI)抗体,进行免疫原性分析。结果 2013年四川省安全性再评价中,AEFI报告发生率为11.78/10万;其中,一般反应、异常反应、偶合症的发生率分别为8.50/10万、2.62/10万、0.65/10万;2015年湖北省安全性再评价中,AEFI报告发生率为7.46/10万;其中,一般反应、异常反应的发生率分别为5.70/10万、1.76/10万;无偶合症未发现可疑的罕见严重不良反应;2次免疫原性再评价中,2007年盐城市319名受试者免疫后H1N1、H3N2和B型流感病毒HI抗体阳转率分别为95.0%、87.1%、88.1%,抗体几何平均滴度(geometric mean titer, GMT)分别比免疫前增加33.3、7.8、26.0倍,抗体保护率分别为100.0%、99.7%、98.4%;2015年汉川市591名受试者免疫后H1N1、H3N2和B型流感病毒HI抗体阳转率分别为73.3%、86.3%、65.8%,抗体GMT分别比免疫前增加10.9、20.2、8.0倍,抗体保护率分别为97.5%、100.0%、96.6%。结论流感病毒裂解疫苗具有良好的安全性和免疫原性,可用于相关人群的流感免疫预防。     

阳离子脂质体DOTAP佐剂对H5N1流感病毒裂解疫苗免疫效果的影响

目的研究阳离子脂质体DOTAP佐剂对H5N1型流感病毒裂解疫苗免疫效果的影响。方法制备DOTAP阳离子脂质体流感病毒裂解疫苗(简称DOTAP流感裂解疫苗),检测其包封率。将BALB/c小鼠分为13组,分别用含0.1、1.0、10.0μg HA/只剂量以DOTAP、Al(OH)3、CPG-ODN为佐剂以及不含佐剂的流感裂解疫苗于0、21天皮下免疫,PBS作为对照组,用血凝抑制试验检测小鼠初次免疫后21、42天血清HI抗体滴度;用ELISA检测初次免疫后21、42天血清特异性IgG抗体、IgG1、IgG2a亚类抗体滴度,以及初次免疫后42天小鼠脾脏单个核细胞体外经抗原刺激后细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的分泌水平。将BALB/c小鼠分为3组,分别用含不同DOTAP剂量(100、300、600μg/只)的DOTAP流感裂解疫苗于0、21天皮下免疫,检测初次免疫后21、42天小鼠血清HI抗体滴度和IgG抗体滴度。结果 DOTAP流感裂解疫苗粒径在300~400 nm,带正电荷,包封率在50%以上;DOTAP流感裂解疫苗诱导的HI抗体水平和特异性IgG抗体水平均高于流感裂解疫苗,而与铝佐剂和Cp G-ODN佐剂间差异无统计学意义;DOTAP流感裂解疫苗产生的抗体仍以IgG1亚类抗体为主,免疫后42天诱导的IgG2a亚类抗体水平高于流感裂解疫苗和铝佐剂,低于Cp G-ODN佐剂;DOTAP流感裂解疫苗免疫后既分泌高水平Th1型细胞因子IFN-γ,同时也分泌高水平Th2型细胞因子IL-4;不同DOTAP剂量的DOTAP流感裂解疫苗免疫后,其HI抗体滴度和IgG抗体滴度在低、中、高剂量组之间存在明显的量效关系。结论 DOTAP作为H5N1型流感病毒裂解疫苗的佐剂可显著提高流感裂解疫苗的免疫原性,其对体液免疫应答的增强作用不低于铝佐剂和Cp G-ODN佐剂,并具有诱导细胞免疫应答的能力。     

成人四价皮内注射流感疫苗的安全性和免疫原性

正在美国,一种三价皮内注射裂解流感病毒疫苗(IIV3-ID)(Fluzone~皮内,赛诺菲巴斯德,斯威夫特卫特,宾夕法尼亚州)自2011—2012年流感流行季一直被用于18~64岁成人。该研究旨在检测添加第2种B系毒株是否影响其免疫原性及安全性。这项随机、双盲、多中心试验评估了美国2012—2013年流感流行季18~64岁成人皮内注射四价裂解流感病毒疫苗(IIV4-ID)的免疫原性和安全性。参与者随机以2∶1∶1比例接受IIV4-ID、已注册的IIV3-     

无针皮内免疫接种Sabin IPV疫苗的安全性及免疫原性研究

全球消灭脊髓灰质炎野病毒后,必须全面使用脊髓灰质炎灭活疫苗(Inactivated poliovirus vaccine,IPV)才能维持无脊灰状态,然而IPV成本较高,难以满足全球需要。皮内免疫途径能够降低Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)(Inactivated poliovirus vaccine derived from Sabin strains,sIPV)的抗原量,本研究将评估无针皮内免疫sIPV的安全性及免疫原性。本研究采用中国医学科学院医学生物学研究所生产的sIPV进行1/5(0.1 ml)剂量无针皮内免疫接种Wistar大鼠,并设计全剂量肌肉免疫对照组以及无针皮内免疫阴性对照组,按0月、1月、2月基础免疫程序,于免疫前及每剂免疫后第30 d釆血,检测血清中和抗体水平,评价免疫原性,并通过观察大鼠的皮肤刺激反应及豚鼠的全身过敏反应,评价安全性。Wistar大鼠3剂免疫后,1/5剂量皮内免疫组与全剂量肌肉免疫组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体阳转率均达到100%,各型别中和抗体几何平均滴度(Geometric mean titer,GMT)均远高于1∶8保护水平。大白鼠接种疫苗后体重增加,皮肤刺激试验及全身过敏反应试验结果表明无针皮内免疫sIPV具有良好的安全性。本研究结果表明sIPV疫苗无针皮内注射免疫安全、有效,并可降低sIPV的抗原量,可为全球消灭脊髓灰质炎提供可负担得起的疫苗。     

四价流感病毒裂解疫苗B型血凝素含量的检测方法

目的建立能准确测定四价流感病毒裂解疫苗中B型血凝素含量(单向免疫扩散法,SRD)的检测方法。方法采用双价抗原参考品SRD法对四价流感病毒裂解疫苗中两种B型血凝素含量进行测定。将B1与B2抗原参考品按质量浓度1∶1混合制备为双价抗原参考品,双价抗原和待检样品与10%裂解剂按9∶1比例裂解30 min,分别加入到含有抗血清参考品的1.5%琼脂糖凝胶板上,每孔10μL,置20~25℃放置18~24 h,经干燥、染色、脱色,测量结果。验证双价抗原SRD法的重复性和准确性。结果双价抗原SRD法测定的血凝素含量平均值比单价抗原SRD法更接近理论配制值,故双价抗原SRD法比单价抗原SRD法能更能准确检测QIV中两种B型血凝素含量,经验证双价抗原SRD法的重复性及准确性良好。结论双价抗原SRD法提高了四价流感病毒裂解疫苗B型血凝素含量检测的准确性,为精确测定四价流感病毒裂解疫苗中B型血凝素含量提供了有效的方法和数据支持。     

四价流感病毒裂解疫苗的稳定性

目的评价四价流感病毒裂解疫苗的稳定性,为疫苗的有效期提供依据。方法分别将A1(H1N1)、A3(H3N2)、B/Victoria和B/Yamagata等4株毒株制备单价原液,生产6批疫苗(不含硫柳汞),评价疫苗分别在(37±2)℃、(25±2)℃和(6±2)℃条件下的稳定性。结果四价流感病毒裂解疫苗在(37±2)℃保存10 d、在(25±2)℃保存3个月、在(6±2)℃保存15个月,疫苗各项指标均符合企业注册标准和《中华人民共和国药典》2015版(三部)的要求。结论四价流感病毒裂解疫苗具有良好的稳定性,在(6±2)℃可稳定保存15个月。     

人参多糖对新甲型H1N1流感病毒灭活疫苗的免疫增强作用

在流感灭活疫苗中添加佐剂可以提高疫苗的免疫原性,节约抗原用量。一些天然中草药多糖具有潜在的佐剂效应。本文探讨了人参多糖（ginseng polysaccharide,GPS）在新甲型H1N1流感病毒裂解型灭活疫苗中的佐剂效应。将不同剂量GPS与新甲型H1N1流感病毒灭活疫苗混合,共同免疫小鼠一次,通过检测免疫后在小鼠体内诱导产生的疫苗特异性IgM、IgG、IgG1和IgG2a抗体情况来评价GPS作为流感病毒灭活疫苗佐剂的免疫增强效果,并与不添加佐剂的疫苗和加有铝佐剂的疫苗的免疫效果作比较。结果显示,GPS与铝佐剂一样能显著提高和维持疫苗特异性IgG抗体滴度,同时提高IgM抗体水平,其中800μgGPS的佐剂效果最好。因此我们认为GPS可以作为流感病毒灭活疫苗的一种候选佐剂。     

鼠疫溶菌疫苗免疫小鼠的体液免疫应答

为选择以F1抗原为主要有效成分的鼠疫溶菌疫苗(Whole cell lysate of Yersinia pestis vaccine,WCLY)的免疫程序,设计了这组试验。在37℃培养鼠疫EV菌,通过超声波裂解法制备鼠疫溶菌疫苗。设计(0,2周)、(0,4周)、(0,2,4周)三种免疫程序,以每剂总蛋白量7.9μg、31.5μg和126.0μg三个剂量皮下接种NIH小鼠。分别在第一针免疫后2、4、8、12周采集血清,通过间接ELISA检测抗鼠疫菌F1抗原和总抗原抗体。结果显示:免疫后血清抗体上升很快,2周内即可测出;无论哪种免疫程序,至12周时抗体滴度仍保持高水平;加强免疫后,抗体水平在4周或8周达到较高,可与活疫苗免疫者相比;溶菌疫苗的接种剂量为7.9μg时,动物只出现轻度不良反应。提示鼠疫溶菌疫苗需要两剂免疫,最短可间隔2周,接种剂量应不超过7.9μg,疫苗中应富含F1抗原。     

A、B型流感病毒HA1嵌合基因疫苗的构建及免疫保护研究

为制备能提供交叉保护的疫苗,本研究在证实A型、B型流感病毒HA1 DNA能够提供抗流感病毒保护的基础上,将编码A型和B型流感病毒HA1的基因构建在同一质粒中,制备成嵌合DNA疫苗.将该重组质粒免疫小鼠,并以致死量同种流感病毒A/PR/8/34或B/Ibaraki/2/85攻击,通过测定小鼠的血清抗HA抗体和保护效果(包括存活率、肺部病毒量和体重丢失率)来评价DNA疫苗的免疫效果.结果表明:A、B型流感病毒HAl嵌合DNA疫苗能保护小鼠抵抗两种致死量流感病毒的攻击,具有提供交叉保护的能力.     

流感病毒H7N9病毒样颗粒疫苗的研发

<正>最近,中国出现了由禽源性流感病毒A(H7N9)引起的严重性传染病,为此全球付出努力,来实现候选疫苗的快速研发。目前,非流感病毒A(H7N9)H7亚型流感候选疫苗在面对新近出现的流感病毒A(H7N9)时,其免疫原性低,保护效果差。一种流感病毒A(H7N9)重组候选疫苗,是将A/Anhui/1/2013株的血凝素(HA)、神经氨酸苷酶(NA)和A/Indonesia/05/2005(H5N1)株的基质蛋白1(M1)克     

A型流感病毒M2蛋白疫苗的研究进展

目前用于免疫人群的流感疫苗多为三价灭活疫苗,包含A型流感病毒H1N1亚型、H3N2亚型和B型流感病毒。多年来的实践表明,三价灭活疫苗是有一定保护效果的。但是,由于流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)经常发生抗原转变和抗原漂移,使其抗原性表现出很大的变异,所以根据流感疫情监测预测的疫苗株也很难产生最理想的保护效果。但流感病毒基质蛋白M2的膜外区氨基酸序列高度保守,有可能发展成为具有交叉保护能力的流感疫苗的候选抗原。该文就A型流感病毒基质蛋白M2疫苗的研究作一综述。1 A型流感病毒基质蛋白M2结构及功能流感病毒基因组RN…     

流感病毒感染诱导MDCK细胞凋亡的研究

用荧光染色、DNA凝胶电泳等方法检测了A型流感病毒株A1／京防86－1和B型流感病毒株B/沪防93－1诱导狗肾体代细胞(MDCKcells)的凋亡情况,并采用MTT法和流式细胞仪比较了这2株病毒对MMCK细胞的毒力和凋亡诱导能力水平。结果显示：病毒感染6h后,细胞DNA发生断裂,病毒感染12h后,可见明显的染色质凝聚;在一定范围内,细胞凋亡强度表现出明显的时间和剂量依赖关系;并且,A型流感病毒株的毒力和调亡诱导能力均强于B型流感病毒株。实验结果表明：流感病毒感染引起的细胞死亡主要是通过调亡实现的,毒力不同的流感病毒株诱导细胞调亡的能力不同。     

茯苓多糖对流感灭活疫苗的免疫增强作用

探讨茯芩多糖作为流感病毒灭活疫苗佐剂的免疫增强作用.将不同剂量(200 μg或1000 μg)的茯苓多糖分别与低剂量(0.015 μg)或高剂量(1.5 μg)流感病毒(A/PR/8)灭活疫苗共同免疫小鼠,以相应剂量灭活疫苗的单独免疫组、灭活疫苗与氢氧化铝(100 μg)共同免疫组、PBS免疫组作为对照组.一次免疫后3周收集血清,ELISA检测血清中IgG、IgG1和IgG2a的抗体水平;并用致死量(40×LD<,50>)流感病毒(A/PR/8)攻击小鼠,通过观察小鼠的体重丢失率、肺部病毒量、存活率来反映佐剂的免疫增强效果和疫苗的保护作用.结果显示,茯苓多糖能显著增加血清抗体水平,并提高小鼠抗致死量流感病毒攻击的能力,其免疫增强效果与氢氧化铝相当.茯苓多糖可作为一种新型的流感病毒灭活疫苗的免疫佐剂.     

不同防腐剂对绿脓杆菌菌体疫苗凝集价、免疫原性和保护力试验的影响

将甲醛、苯酚、叠氮钠、氯仿、硫柳汞、苯甲醇作防腐剂分别加入绿脓杆菌菌体疫苗中,并用本菌抗血清定期检测疫苗的滴度。在此基础上,进一步进行CMCC(B)-10118和CMCC(B)-10123疫苗的免疫原性和免疫保护性试验,结果显示,加入甲醛防腐剂的疫苗凝集滴度是稳定的,而加入硫柳汞、叠氮钠等防腐剂则有显著影响,特别是对CMCC(B)-10115和CMCC(B)-10123疫苗的影响最大,凝集滴度从l：2560～l：5120降到l：20。不同防腐剂的CMCC(B)-10118和CMCC(B)-10123疫苗的家兔和小鼠试验表明,防腐剂对疫苗的免疫原性影响不大,对5LD50剂量活菌攻击的免疫保护作用未见差别。苯酚和苯甲醇等对人体毒性小,可用作疫苗防腐剂,而对人体毒性大的甲醛适用于检定用抗原的制备。     

H9N2禽流感病毒M2 DNA疫苗初免-蛋白加强免疫的保护效果研究

流感病毒M2(基质蛋白2)是A型流感病毒的一个高度保守的蛋白。由于其免疫原性较弱,本研究采用M2 DNA疫苗初免-蛋白加强的策略来考察M2的免疫保护效果。制备A/Chicken/Jiangsu/07/2002(H9N2)流感病毒的M2 DNA疫苗以及经大肠杆菌表达的去除M2跨膜区的M2蛋白即sM2。以SPF级BALB/c小鼠为模型,电击法免疫M2 DNA疫苗,滴鼻法免疫sM2蛋白,免疫间隔三周,并于末次免疫后三周以致死量5LD50流感病毒H9N2攻击小鼠,通过检测小鼠存活率、体重丢失率、肺部病毒滴度及IgG抗体水平等指标来评价免疫的保护效果。实验结果表明,基于M2的疫苗采用DNA疫苗初免蛋白加强免疫二次的免疫程序能诱导较高的特异性抗体,明显减轻小鼠流感病症,提供完全的保护。     

B型流感病毒B/Guangxi-Jiangzhou/1352/2018毒株的遗传进化及其对小鼠的致病性分析北大核心CSCD

B型流感病毒(influenza B virus,IBV)比A型流感病毒(influenza A virus,IAV)更易引发并发症,在一定季节内造成的疾病负担甚至超过IAV,但目前人们对IBV的关注较少。为了分析IBV临床毒株B/Guangxi-Jiangzhou/1352/2018的遗传进化特点,本研究构建了系统进化树,并以世界卫生组织推荐的疫苗株为参考,对其血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)进行了氨基酸序列同源性及突变位点分析。分析结果发现B/Guangxi-Jiangzhou/1352/2018毒株无谱系间重配现象,与同年疫苗株B/Colorado/06/2017匹配性较差。另外,测定了B/Guangxi-Jiangzhou/1352/2018毒株感染小鼠的半数致死量(median lethal dose,LD_(50))及其对小鼠的致病性。结果表明,B/Guangxi-Jiangzhou/1352/2018毒株感染小鼠的LD_(50)为10^(5.9) TCID_(50)(median tissue culture infective dose),小鼠肺脏中病毒滴度在感染后1 d达到高峰,炎性细胞因子的mRNA水平在感染后12 h达到高峰,且感染后肺脏中的肺泡损伤严重,有大量炎性细胞浸润。本研究证明了IBV临床毒株B/Guangxi-Jiangzhou/1352/2018可以感染小鼠并诱发典型的肺脏炎症,为研究IBV致病及传播机制奠定了基础,为评价新型流感疫苗、抗病毒和抗炎症药物提供了理想的动物模型。     

H1N1裂解疫苗辅以C48/80佐剂滴鼻免疫小鼠能够提供抗甲流的保护作用

2009年"甲型H1N1流感"全球流行导致了数以万计人的死亡。疫苗的及时研制为预防、控制甲流的传播,减少发病率和死亡率做出了重大贡献。甲流疫苗辅以佐剂滴鼻免疫能更好地抵御甲流攻击。将A/California/7/2009(H1N1)裂解疫苗辅以化合物48/80(C48/80)佐剂滴鼻免疫雌性BALB/c小鼠,免疫一次,免疫后28 d,小鼠用致死剂量的同源病毒进行攻击。结果发现,滴鼻免疫组的抗体滴度均达到很高的水平,而且随着H1N1裂解疫苗剂量的增加,其对小鼠的保护作用越强,同时添加佐剂可以更有效提高H1N1裂解疫苗的保护效果。实验结果说明H1N1裂解疫苗辅以C48/80佐剂滴鼻免疫能够保护小鼠免受流感病毒的感染。