酶偶联法尿素氮测定最适条件的探讨

血尿素氮(BuN)测定是临床上检查肾功能最常用的指标之一。其测定方法有比色法和酶法二类,用脲酶检测又可配以各种技术,如电化学法测定CO_2和NH_3的释放,比色法或酶偶联法,另外还可用固定化脲酶的酶电极和酶试纸。本文是采用脲酶、谷氨酸脱氢酶偶联反应测定BUN,此法具有特异性高、快速、准确、可使用单一试剂、便于自动分析等特点。     

乙基纤维素微胶囊对过氧化氢酶固定化的研究

以乙基纤维素作模材,用液中干燥法使过氧化氢酶微胶囊化,研究了微胶囊化操作条件对酶活性影响。通过测定微胶囊化酶的释放曲线,证明微胶囊膜对过氧化氢酶具有较好的固定性能力,固定化酶用于催化底物过氧化氢分解,测定米氏常数为０．５５ｍｏｌ／Ｌ。     

乙基纤维素微胶囊对过氧化氢酶固定化的研究

以乙基纤维素作膜材,用液中干燥法使过氧化氢酶微胶囊化。研究了微胶囊化操作条件对酶活性的影响。通过测定微胶囊化酶的释放曲线,证明微胶囊膜对过氧化氢酶具有较好的固定性能力。固定化酶用于催化底物过氧化氢分解,测定米氏常数为０．５５ｍｏｌ／Ｌ。     

酶和发酵工程

培养葡糖酸杆菌属(Gluconobacter)的一个种可产生一种新的限制性内切酶,其切割序列为:CC·GC·GG 用化学方法处理过氧化氢酶和咄喃糖一2一氧化酶,使它们更加稳定,能抗热和抵抗葡萄糖酮酸的钝化作用。描述了交联的偶氮醋对过氧化氢酶     

管氏肿腿蜂寄生和注射其毒液对黄粉虫过氧化氢酶基因表达的影响

为了探究管氏肿腿蜂Scleroderma guani寄生和注射其毒液对寄主黄粉虫Tenebrio molitor蛹中过氧化氢酶表达的影响,采用RT-PCR克隆黄粉虫过氧化氢酶基因,利用生物信息学软件分析基因序列结构特性,采用实时荧光定量PCR技术分析该基因的表达特征,使用试剂盒测定过氧化氢酶活性。克隆获得的黄粉虫过氧化氢酶基因编码阅读框序列长1 620 bp,编码539个氨基酸。该基因编码的氨基酸序列中含有催化氨基酸位点(His-71、Asn-183和Tyr-393)以及过氧化氢酶家族的3个保守基序：近端活性位点序列(FDRERIPERVVHAKGXG)、NADPH结合位点(XXHQXXXXFXD)和血红素配体结合位点(RXFXYXDXH)。被管氏肿腿蜂寄生和注射其毒液后,黄粉虫蛹中的过氧化氢酶基因的表达量显著上调,其血淋巴和脂肪体中的过氧化氢酶活性显著升高。研究结果表明,管氏肿腿蜂毒液能调控黄粉虫过氧化氢酶基因的表达。     

用葡萄糖酶电极法测定葡萄糖淀粉酶活性的研究

利用固定化葡萄糖氧化酶酶膜和过氧化氢电极组成酶电极测定葡萄糖淀粉酶的活性单位。用已知单位的葡萄淀粉酶作为测定标准定标后,在仪器上直接测出被测样品的葡萄糖淀粉酶活性单位,测定时间１４０ｓ,操作周期３ｍｉｎ,连续１０次测定ＣＶ值为０.６７％,５０～５００ｕ／ｍｌ的范围内线性良好,ｒ＝０.９９９９。     

嗜碱芽孢杆菌Bacillus sp.F26过氧化氢酶的分离纯化及性质研究

从一株低度嗜盐、兼性嗜碱芽孢杆菌Bacillus sp．F26中纯化得到一种碱性过氧化氢酶,并对该酶进行了性质研究。纯化过程经硫酸铵沉淀、阴离子交换层析、凝胶过滤层析及疏水层析四步最终获得电泳纯的目标酶(纯化58．5倍)。该过氧化氢酶的分子量为140kD,由两个大小相同的亚基组成。天然酶分子在408nm处显示特征吸收峰(Soret band)。吡啶血色素光谱显示了酶分子以原卟啉Ⅸ(protoheme Ⅸ)作为辅基。计算获得酶的表观米氏常数为32．5mmol／L。该过氧化氢酶不受连二亚硫酸钠的还原作用影响,但被氰化物、叠氮化物和3．氨基．1,2,4-三唑(单功能过氧化氢酶的专一抑制剂)强烈抑制。以邻联茴香胺、邻苯二胺和二氨基联苯胺作为电子供体测定酶活时,该酶不显示过氧化物酶活性。同时,酶的N-端序列比对结果说明,该过氧化氢酶与单功能过氧化氢酶亚群有一定的相似性,而与双功能过氧化氢酶亚群及猛过氧化氢酶亚群均没有同源性。因此,本文将纯化的碱性过氧化氢酶定性为单功能过氧化氢酶。此外,该酶具有热敏感的特点,且酶活在pH5～9的范围内不受pH影响,此后,活性随着pH的升高而升高,并在pH 11处有明显的酶活高峰。20℃、pH 11条件下的酶活半衰期达49h。在pH 11的高碱条件下表现出最高活力和一定的稳定性,这在已报道的过氧化氢酶中还未见描述。同时,该酶也显示了良好的盐碱稳定性,0．5mol／L NaCl、pH 10．5条件下的酶活半衰期达90h。另一方面,本文所研究的过氧化氢酶是第一个来源于嗜碱微生物的同源二聚体单功能过氧化氢酶,也是第一个来源于天然碱湖的单功能过氧化氢酶,它能部分地反映出细胞抗氧化体系对相应环境的适应情况。     

豚鼠试验，过氧化氢酶／过氧化物酶试验与耐異菸肼结核菌间的关系

本文对85株秸核病人痰内的结核菌进行了研究,测定了过氧化氢酶、过氧化物酶对异菸肼的耐药性以及对豚鼠的致病力,并分析了这几项测定秸果的关系。主要结论如下： 1．对异菸肼敏戚的菌株,其过氧化氢酶及过氧化物酶均为阳性反应。对豚鼠有致病力。 2．对每毫升培养基中含1—10微克异菸肼产生了耐药性的结核菌,其过氧化物酶及过氧化氢酶大部分变为阴性反应。 在55株耐异菸肼菌株中,过氧化物酶呈阴性反应者90．9％,过氧化氢酶呈阴性反应者则为70．9％。若两种试验并用,则呈阴性反应者达94．5％。     

嗜碱芽孢杆菌Bacillus sp.F26过氧化氢酶的分离纯化及性质研究

从一株低度嗜盐、兼性嗜碱芽孢杆菌Bacillussp .F2 6中纯化得到一种碱性过氧化氢酶 ,并对该酶进行了性质研究。纯化过程经硫酸铵沉淀、阴离子交换层析、凝胶过滤层析及疏水层析四步最终获得电泳纯的目标酶 (纯化 58.5倍 )。该过氧化氢酶的分子量为140kD ,由两个大小相同的亚基组成。天然酶分子在40.8nm处显示特征吸收峰 (Soretband)。吡啶血色素光谱显示了酶分子以原卟啉Ⅸ (protohemeⅨ )作为辅基。计算获得酶的表观米氏常数为 32.5mmol/L。该过氧化氢酶不受连二亚硫酸钠的还原作用影响 ,但被氰化物、叠氮化物和 3-氨基-1,2 ,4-三唑 (单功能过氧化氢酶的专一抑制剂 )强烈抑制。以邻联茴香胺、邻苯二胺和二氨基联苯胺作为电子供体测定酶活时 ,该酶不显示过氧化物酶活性。同时 ,酶的N_端序列比对结果说明 ,该过氧化氢酶与单功能过氧化氢酶亚群有一定的相似性 ,而与双功能过氧化氢酶亚群及猛过氧化氢酶亚群均没有同源性。因此 ,本文将纯化的碱性过氧化氢酶定性为单功能过氧化氢酶。此外 ,该酶具有热敏感的特点 ,且酶活在Ph 5～ 9的范围内不受pH影响 ,此后 ,活性随着pH的升高而升高,并在pH11处有明显的酶活高峰。20℃、pH11条件下的酶活半衰期达49h.在pH11的高碱条件下表现出最高活力和一定的稳定性,这在已报道的过氧化氢酶中还未见描述。同时,该酶也显示了良好的盐碱稳定性,0.5mol/L NaCl、pH10.5条件下的酶活半衰期达90h.另一方面,本文所研究的过氧化氢酶是第一个来源于嗜碱微生物的同源二聚体单功能过氧化氢酶,也是第一个来源于天然碱湖的单功能过氧化氢酶,它能部分地反映出细胞抗氧化体系对相应环境的适应情况。     

环糊精交联固定酶的生物传感器及临床应用

通过交联方式将辣根过氧化物酶固定在Eastman-AQ-N-甲基吩嗪修饰电极上,制备成过氧化氢生物传感器.通过循环伏安法和计时电流法证明固定在Eastman-AQ阳离子交换树脂中的N-甲基吩嗪有效地在辣根过氧化物酶和玻碳电极之间传递电子.由于该生物传感器对过氧化氢具有良好的生物电催化还原的功能,所以将它与葡萄糖氧化酶和半乳糖苷酶结合,制备成双酶和三酶体系的生物传感器,用于葡萄糖和乳糖的测定.该生物传感器具有灵敏度高、响应快、响应范围宽及选择性好等优点.对糖尿病患者的血糖测定结果与采用葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶的分光光度法的结果一致.     

用细胞化学G6P酶观察大白鼠心肌细胞的偶联结构

大白鼠心肌细胞的特殊结构——偶联是由肌浆网小管和肌膜或横管所组成。G6P酶作为肌浆网的标志酶可以显示偶联的肌浆网小管。在Z线处的偶联有多种形态:二联管、三联管、四联管等。此外,还有横管分支小管和肌浆网小管也组成偶联,平行于肌原纤维,它能连接一个肌节二侧的Z线处偶联,形成了一个立体交织的偶联网。丰富的偶联网是心脏肌肉收缩同步化的物质基础。另外,G6P酶在肌浆网上定位,表明肌浆网与糖原分解有着密切的关系。     

过氧化氢酶对固定化葡萄糖氧化酶稳定性的影响

本文通过重氮盐共价键合法把葡萄糖氧化酶接到交联琼脂糖上制备固定化酶。为了提高固定化酶的使用稳定性,把过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶同时接到载体上,并研究了这两种酶在不同比例时对固定化葡萄糖氧化酶活力和稳定性的影响,随着加入过氧化氢酶量的增加,固定化葡萄糖氧化酶稳定性显著增加。所制得的固定化葡萄精氧化酶-过氧化氢酶在25℃下连续使用36h,活力几乎不变,失活半衰期可达1155h。     

从人血液中克隆过氧化氢酶基因

目的从人血液中克隆过氧化氢酶基因。方法以新鲜的人血液为材料,提取全血RNA,运用RT—PCR方法扩增过氧化氢酶基因,构建pMDl8T／CAT克隆载体,并进行了不同来源过氧化氢酶的氨基酸序列同源分析。结果从人血液中成功扩增出过氧化氢酶基因,获得了重组载体PMD-18T／CAT,氨基酸序列分析的同源性达80％以上。结论从人血液中可以很方便地克隆出过氧化氢酶基因。     

真菌漆酶的酶活测定方法评价

目前真菌漆酶酶活的测定方法多样,没有统一的标准,致使不同研究之间的漆酶酶活无法进行比较分析,也造成漆酶产品在酶活质量意义上的混乱。因此,对测定真菌漆酶酶活的各种不同的分光光度法进行了综述和比较分析,认为采用ABTS法作为测定漆酶酶活的方法较具合理性和科学性,建议作为漆酶酶活测定的统一方法。     

谷氨酸棒杆菌过氧化氢酶的异源表达、纯化以及酶学性质

过氧化氢酶能催化过氧化氢分解为水和氧气,在工业上有着较为广泛的应用。然而,纺织和造纸工业的特殊的高碱性环境,使得开发碱性过氧化氢酶有着重要的应用价值。利用大肠杆菌表达来自于谷氨酸棒杆菌的过氧化氢酶,对其表达条件进行了优化,并通过镍柱亲和层析的方法分离纯化重组蛋白,然后表征纯酶的酶学性质。最适表达条件为:诱导剂IPTG浓度0.2 mmol/L,诱导温度25℃,诱导时间11 h。过氧化氢酶比酶活达到55 266 U/mg,具有较高的催化活性。该酶具有相当宽泛的p H值适应范围,在p H 4.0–11.5范围内均具有较高的酶活性,并在p H 11.0条件下表现出最高的酶活性。将纯酶在p H 11.0的溶液中处理3 h时剩余酶活为93%,说明该酶在高碱条件下有良好的稳定性。该酶最适温度为30℃,在25–50℃热稳定性较好。其动力学参数Km为25.89mmol/L,Vmax为185.18mmol/(min?mg)。抑制剂十二烷基硫酸钠(SDS)、尿素、Na N3、β-巯基乙醇、EDTA对酶活有不同程度的抑制作用。来源于谷氨酸棒杆菌的过氧化氢酶具有较高的催化效率、良好的碱耐受性,在工业生产中有较好的应用前景。     

幽门螺杆菌过氧化氢酶基因的克隆、序列测定及其生物信息学分析

幽门螺杆菌(Helicobacter pylorl,Hp)感染是慢性活动性胃炎和消化性溃疡的主要病因,与胃腺癌、胃粘膜相关淋巴样组织(MALT)淋巴瘤的发生亦密切相关。其有效抗原成份过氧化氢酶可刺激机体产生保护性的免疫反应。用高保真PCR扩增系统扩增出过氧化氢酶基因片段,将其定向插入载体pET-22b( ),对其全序列进行了测定。并以生物信息学软件分析其生物学特性。克隆的过氧化氢酶基因序列与报道的序列完全一致,并显示出良好的抗原性和疏水性。这一研究获得了序列正确的过氧化氢酶基因,为将来以过氧化氢酶分子作抗原的Hp疫苗研制工作打下了良好基础。     

过氧化氢酶在植物胁迫响应中的功能研究进展

作为信号分子的过氧化氢是植物复杂信号传导中的一个重要组成部分,它介导了多种植物胁迫反应并对其平衡的维持和调控起到了非常重要的作用。越来越多的研究证实了胁迫反应中过氧化氢酶与过氧化氢含量的变化有一定的关系,同时又和其它信号因子存在着交互作用。本文综述了近年来过氧化氢酶在植物遭受病害、水分、盐渍、光等胁迫反应中的调控作用,以及在这些反应中过氧化氢酶、过氧化氢、蛋白激酶、转录因子与其它信号分子所构成的可能信号网络和过氧化氢的限速步骤方面的研究进展。     

原位负染色法鉴定过氧化氢酶

原位负染色法鉴定过氧化氢酶曾庆平，郭勇（华南理工大学生物工程系，广州５１０６４１）关键词过氧化氢酶，色谱过氧化氢可使橙黄色的高铁还原为普蓝色的亚铁，而过氧化氢在过氧化氢酶作用下分解成水和氧后，便失去还原能力。因此，将过氧化氢酶原位固定于滤纸等支持介质...     

口腔过氧化物酶系统研究进展

口腔过氧化物酶系统由过氧化物酶、过氧化氢 ( H2 O2 )和可被氧化的底物组成 ,是口腔中重要的非特异性防御因子 ,该系统可通过过氧化氢 ( H2 O2 )及氧化产物维持或促进口腔有益菌的生长和繁殖 ,同时抑制或杀灭致龋菌、牙周可疑病原菌及致口腔粘膜病微生物 ,调节口腔菌群的种类和数量 ,在维持口腔微生态平衡和口腔健康中起着重要的作用 ,本文拟对口腔过氧化物酶系统的组成、生物学功能及其应用作一综述。1　口腔过氧化物酶系统的组成口腔过氧化物酶系统 ( peroxidase system,PS)包括三个组份 :过氧化物酶 ( peroxidase,PO)、过氧化氢 ( H…     

磁处理水对小鼠血液过氧化氢酶及谷胱甘肽过氧化物酶活力的影响

将小鼠随机分为饮用磁处理水的实验组及饮用自来水的对照组,每组雌、雄鼠各半,饲养一个月,取血测定其过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力。结果雌、雄实验组CAT活性均显著高于对照组;雄鼠实验组GSH-PX活力明显高于对照组,雌鼠实验组GSH-PX活力与对照组无显著差异。显示饮用一定时间磁处理水的小鼠机体外理自由基能力有所提高。