阴沟肠杆菌产AmpC酶菌和非产酶菌的耐药性研究

目的：探讨阴沟肠杆菌分布特征及产AmpC酶菌和非AmpC酶菌的耐药性。方法：对临床分离的158株阴沟肠杆菌分布科室、感染部位及对16种抗生素耐药性进行分析,并通过酶粗提物头孢西丁三维试验结合PCR法检测AmpC酶。结果：标本来源主要为患者的痰液、尿液、创口分泌物等,科室以重症监护室为多,感染部位以呼吸道为主,耐药性较高的抗生素为头孢西丁、头孢噻肟、头孢曲松等,158株阴沟肠杆菌中产AmpC酶菌株共33株,产AmpC酶阳性率占总菌株数20．9％,产AmpC酶菌株对各种抗生素的耐药率比不产AmpC酶的明显增高。结论：阴沟肠杆菌的耐药与产AmpC酶有关,治疗首选亚胺培南。     

从肺结核病人分离的耐药结核菌致病力的研究

本文测定了从复治肺结核病人痰标本中分离的3株耐药结核菌(耐R株、耐R+K株和耐R+S+H株)对豚鼠的致病力,其结果与对照株(H₃₇RV和结核菌敏感株)基本相似,毒力无明显变化。5株菌的6周总致病指数分别为75.2,72.0,71.1, 72.6和73.3,p值是0.15。毒力根指数分别是1.33、1.39、1.39、1.41和1.36, F值是0.27。3株菌经血行播散到豚鼠肺、肝、脾等脏器内,均有形成菌血症的能力。     

重症监护病房革兰阴性杆菌产ESBLs、产AmpC酶的检测与耐药性

目的了解重症监护病房（ICU）革兰阴性杆菌产ESBLs、AmpC酶的情况及其耐药性,指导临床用药。方法回顾性分析2001年1月至2004年12月ICU病房患者感染性标本中大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产ES—BLs、AmpC酶的耐药情况。结果92株大肠埃希产ESBLs、产AmpC酶的检出率分别为64．1％和27．2％;86株肺炎克雷伯菌产ESBLs、产AmpC酶的检出率分别为52．3％和29．1％。这些细菌呈多重耐药且两种产酶菌株耐药性也略有不同。结论需加强ICU病原菌耐药性监测,指导临床合理用药。     

出芽短梗霉胞外酸性漆酶

通过愈创木酚法平板检测10株出芽短梗霉,发现5株菌能够分泌胞外多酚氧化酶,反应最适pH在2.0左右,均属于酸性多酚氧化酶。菌株NG的酶活最高,达110 U/mL。添加H2O2、EDTA以及过氧化氢酶不显著影响菌株NG胞外酶活,表明NG分泌的多酚氧化酶中不含有锰过氧化物酶（MnP）和不依赖Mn2＋的过氧化物酶（MiP）,属于漆酶（Lac）。     

右旋糖酐酶产生菌的筛选及其酶学性质的比较研究

从3162株真菌中筛出具有右旋糖酐酶话力的菌株528株,其中黄柄白曲霉(Asp. Flavi-pes)、蠕形青霉(Pen. Vermiculatum)、产黄青霉(Pen. Chrysogerum)和构巢曲霉(Asp. Nid-ulans)也产该酶,这在文献中尚未见报道。通过复筛,从中选出5株,它们分属黄柄白曲霉(Asp. Flavipe、二株)、肉色曲霉(Asp.carneus)、焦曲霉(Asp. Ustus)和淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)(各一株)。对它们的产酶特性作了一系列比较研究,发现所有酶的最适温度皆为50--55℃,最适作用PH为5.0—5.5,酶解最终产物是异麦芽塘、异麦芽三糖及少量葡萄糖,故它们皆属内切型右旋糖酐酶。此外它们在温度和PH稳定性、其它酶活力存在的情况、对不同底物作用的情况、凝胶电泳模式、金属离子和一些蛋白质变性剂的影响等方面都有一些差异。通过比较发现,由淡紫拟青霉8523菌产生的右旋糖酐酶具有较好的酶学性质：它在50"0保温24小时和60℃保温1小时,剩余话力分别为95％和90％,在pH 3．5—1 0．5很宽的范围内是稳定的,此外它对SDS和脲的耐受性也较其它菌株的酶好。     

内切型菊粉酶生产菌株的筛选及诱变选育

采用透明圈法筛选得到了产菊粉酶的多株菌株,并得到了1株产内切型菊粉酶较高的隐球酵母属（Cryptococcus)菌株L1,以L1作为出发菌株经Co^60诱变后,得到1株产内切型菊粉酶最好菌株C10,其诱变后低聚果糖得率比诱变前提高了52．6％,酶活力提高了51．9％。     

粤、闽、贵烟草青枯病菌分离株及其致病力

【目的】从粤、闽、贵3地烟草青枯病株中分离青枯病菌,测定其致病力并探讨判断致病力的方法。【方法】采用氯化三苯基四氮唑(简称TTC)培养基和蛋白质电泳相结合对青枯病菌致病力进行测定,并分析菌株生化型。【结果】已分离出烟草青枯病菌59株,依据致病力进行划分,无致病力菌株5株,有致病力菌株54株。不同致病力菌株蛋白电泳特定条带存在差异。粤、闽、贵3地烟草青枯病菌有致病力菌株均占主导地位,广东有致病力菌株比例略大,福建次之,贵州最小。按生化型划分,59株青枯病菌中1株属于生化型Ⅳ外,其他58株属于生化型Ⅲ或其亚型生化型Ⅲ-1。【结论】烟草青枯病菌致病力存在差异,SDS-PAGE蛋白指纹中的特定条带可作为判定青枯病菌有无致病力的依据。     

凝固酶阴性葡萄球菌致新生儿败血症临床分析

目的了解本地区凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）致新生儿败血症的病原学及耐药性状况,用以指导临床治疗。方法回顾性分析64株CNS致新生儿败血症血培养的病原学及耐药性。结果64株CNS中以表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌为主;耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）39株,分离率为60．9％,β-内酰胺酶检出率达100％,MRCNS对青霉素、红霉素、苯唑西林耐药率最高,对利福平、呋西地酸、替考拉宁、喹奴普汀／达福普汀等耐药率均较低;甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌（MSCNS）25株,分离率为39．1％,13-内酰胺酶检出率为44％,MSCNS对大多数抗生素敏感;64株CNS中未检测到万古霉素耐药株。结论新生儿败血症中CNS以表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌为主,MRCNS检出率高且呈多重耐药,应重视对其监测与控制。     

一种新型淀粉酶的鉴定及其产酶菌株的筛选

对筛选到的菌株ZX99产生的一种新型淀粉酶（异麦芽低聚糖酶）进行了分析鉴定,ZX99菌株能产生一种胞外淀粉酶,该酶能催化淀粉的降解产生异麦芽低聚糖,对原产酶菌株ZX99多次进行紫外线照射诱变后,获得了优良,稳定的变异菌株RB3．232,其产酶水平为原株的160％,产物薄层层析证明,该酶能催化淀粉的降解,产生异麦芽糖,潘糖,异麦芽三糖和异麦芽四糖等低聚糖,但对普鲁兰基本不起作用,由此证明它是一种不同于新型普鲁兰酶（nepullulanase)和 传统淀粉酶（amylase)的一种新型淀粉酶。     

一株新的木素过氧化物酶产生菌的分离和鉴定

目的：木素过氧化物酶在工业和环保方面具有潜在应用价值。从腐木上分离得到一株新的木素过氧化物酶合成菌,该菌株具有香栓菌（Trametes suaveolens）的形态特征,需要对其进一步确认。方法：用rDNAITS序列的分子分类方法对该菌株进行鉴定。结果：PCR得到的ITS片段长621bp,其序列与一株香栓菌具有最高的相似性（97．6％）,并明显不与栓菌其他种聚类。结论：该分离种为一株新的香栓菌,命名为T．suaveolens1523。     

黄孢原毛平革菌木素过氧化物酶类在天然木素降解中作用的研究

通过诱变得到十一株木素过氧化物酶酶知降低的黄孢原毛平革菌突变株,用磷以理论分析了其木素过氧化物酶类的产生与木素降妥能力间的相关性,并从中筛选到一株木素过氧化物酶缺陷,锰过氧化物酶酶活明显降低的突变株,其木素降解能力为原始菌株的８０％左右。     

凝固酶阴性葡萄球菌耐药基因和粘附基因检测及耐药性分析

目的了解凝固酶阴性葡萄球菌（CoNS）耐药基因和粘附基因的分布及其耐药性情况。方法收集45株凝固酶阴性葡萄球菌临床分离株,采用PCR检测其耐药基因mecA和粘附基因c弘知如B,并分析其耐药性。结果（1）凝固酶阴性葡萄球菌中mecA、cva、fn6pB的阳性率依次为86．7％（39／45）、11．1％（5／45）、71．1％（32／45）。（2）凝固酶阴性葡萄球菌中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCoNS）的检出率为88．9％,对β-内酰胺类抗生素的耐药率都在80％以上,对利福平、左氧氟沙星、林可霉素的耐药率较低,未发现对万古霉素、利奈唑胺耐药菌株。结论CoNS中MRCoNS检出率很高,对常用抗生素耐药率高,且有一定的粘附能力,临床上应该根据药敏试验结果慎重及合理的使用抗生素。     

肠杆菌诱导型AmpC酶对第三代和第四代头孢菌素的影响

目的探讨诱导型AmpC酶对三代、四代头孢菌素的影响及其治疗策略。方法采用药敏纸片扩散法,用FOX药敏纸片作为诱导剂,以CAZ、CTX和FEP作为指示剂,检测肠杆菌的诱导AmpC酶的产生。结果待测的196株菌株中有101株为产诱导型AmpC酶阳性（51．5％）,其中阴沟肠杆菌58株（67．4％）,产气肠杆菌18株（52．9％）,沙雷菌属共8株（40％）,费劳地枸椽酸杆菌6株（42．8％）,聚团肠杆菌6株（33．3％）,奇异变形杆菌5株（20．8％）,其余95株产诱导型AmpC酶为阴性。产诱导型AmpC酶阳性菌株中无一株对FEP纸片的抑菌圈直径有影响,诱导型AmpC酶试验均为阴性。结论对于鉴定确认为诱导型AmpC酶阳性菌株的感染,即使实验报告三代头孢菌素为敏感,也应慎用或避免使用第三代头孢菌素的治疗,以第四代头孢菌素如头孢吡肟为首选药。     

耐过氧化氢的锰过氧化物酶对三苯甲烷类染料的脱色

[目的]从一株白腐菌Trametes sp.SQ01中获得一种新型的锰过氧化物酶,探讨该酶的底物特异性和对过氧化氢的耐性,以及其对三苯甲烷类染料的脱色能力.[方法]通过丙酮沉淀和DEAE-cellulose 52柱层析法纯化锰过氧化物酶.利用UV-2010紫外可见分光光度法研究锰过氧化物酶对过氧化氢的耐性,同时,用紫外可见分光光度计对三苯甲烷类染料脱色效果进行分析.[结果]通过两步纯化,获得了均一性的锰过氧化物酶.该酶的最适pH和温度分别是4.5和70℃,在pH 3.0-8.0时,酶活相对稳定.该酶在二价锰离子存在下能够氧化2,6-二甲氧基苯酚、愈创木酚、2,2＇-连氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉磺酸)和过氧化氢等化合物,同时也能作用二价锰离子.在与这些底物反应中,最适底物为过氧化氢(Km为3.7 tmmol/L).该酶具有抗过氧化氢漂白能力,锰过氧化物酶与高浓度的过氧化氢(2.5 mmol/L)作用60 min后仍能保持70％的活性.在所测试的染料中,锰过氧化物酶对结晶紫的脱色率最高达到65.8％.二价锰离子和过氧化氢对锰过氧化物酶脱色能力的影响进行研究,与孔雀绿相比,锰离子和过氧化氢对活性艳蓝脱色的影响很小.[结论]Trametes sp.SQ01锰过氧化物酶对过氧化氢的耐受性,以及对三苯甲烷类染料的高效脱色能力表明该酶在染料脱色降解方面有着广阔的应用前景.     

产胞外青霉素酰化酶菌株的选育

以短小杆菌（B．pumilus）B－97为出发菌株,经过连续两次紫外线诱变处理,分离得一突变株B－U－29。其酶活力为4．56U／ml,较出发菌株酶活力提高113．3％。对B－U－29菌株进行连续两次亚硝酸处理,分离得一正变稳定株B—H－29,酶活力为4．93u／ml,较出发菌株酶活力提高了20％。     

小儿呼吸道感染肺炎克雷伯杆菌耐药性和基因型研究

目的探讨临海地区小儿呼吸道感染肺炎克雷伯杆菌产超β-内酰胺酶（ESBLs和AmpC酶）的耐药性及耐药基因型分布情况。方法采用VITEK-60型全自动细菌鉴定仪鉴定细菌,按CLSI推荐的确证试验检测ESBLs和K-B纸片法测定药敏结果;采用头孢西丁纸片扩散法筛选产AmpC酶阳性菌株,采用PCR检测AmpC酶基因,并对产物进行测序分析基因型。结果113株肺炎克雷伯杆菌ESBLs和AmpC酶总检测率分别为29．20％和18．58％,其中单产ESBLs、单产AmpC酶和同产AmpC酶＋ESBLs检出率分别为23．01％、12．39％和6．19％;AmpC酶阳性菌株的耐药基因型：16株为DHA-1型,5株为ACT-1型。药敏试验：所分离的肺炎克雷伯杆菌对亚胺培南全部敏感,对喹诺酮类耐药率很低,对大多β-内酰胺类抗生素耐药率较高,并且产酶株的耐药性明显高于非产酶株,耐药现象在同产ES-BLS和AmpC酶菌株中更为严重。结论临海地区小儿呼吸道分离的肺炎克雷伯杆菌产ESBLs和AmpC酶检出率较高;AmpC酶以DHA-1基因型流行为主,产酶株呈现出高度多重耐药性。     

脂肪酶产生菌Geofrichum sp. AS 2.1135产酶条件及酶一般性质的研究

在92株能同化油的地霉属菌株中,Geotrichum sp. AS2．1135菌株产脂肪酶活力为50—60u／ml,对其产酶条件的研究表明,不饱和长链脂肪酸和油类有利于酶的形成。在4％豆饼粉作为有机氮源的培养基中,加入0．2％尿素,酶活力显著增加,酶活达150u／ml。用聚乙二醇橄榄油乳化系统测定酶的作用最适pH为8．0,最适温度为4O一42℃。在pH4一9时5℃下存放24小时,或在pH 5和8时45℃保持15分钟,酶活力不变。     

GA_3和BR对离体苎麻叶片中过氧化氢酶和过氧化物酶的影响及其与超氧物歧化酶的关系(简报)

经1．0mg·L-1GA3和0．1mg·L-1BR分别处理后的离体苎麻叶圆片中,过氧化物酶和过氧化氢酶活性都有明显增加。过氧化物酶的最大增加值出现在12h;过氧化氢酶与超氧物歧化酶同步,最大增加值出现时间都在处理后36h。0．2mmol·L-1H202处理的过氧化氢酶和超氧物歧化酶活性都增加;3．0mg·L-1NaN3处理的超氧物歧化酶活性明显增加;19．5mg·L-1KCN处理的过氧化氢酶活性则明显下降。     

同工酶研究在嗜热脂肪芽孢杆菌分类中的应用

嗜热脂肪芽孢杆菌是一个尚未被严格定义的种,它几乎包括芽孢杆菌属内所有能在65℃以上生长的细菌。用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法对151株嗜热脂肪芽孢杆菌的9种酶(G6PDH、LDH、MDH、IDH、AlaDH、LeuDH、过氧化氢酶、过氧化物酶、酯酶)的酶谱进行测定分析。根据其酶谱的差异,可将151株菌株分成两个类型。两型之间8个酶的13或14个基因产物的相异度约为91.8％,两型间的标准遗传距离是2.55。因此这两种类型的细菌也许可以被看作为两个不同的种。     

黄孢原毛平革菌木素过氧化物酶类在天然木素降解中作用的研究

通过诱变得到十一株木素过氧化物酶酶活降低的黄孢原毛平革菌（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）突变株,用灰色理论分析了其木素过氧化物酶类的产生与木素降解能力间的相关性,并从中筛选到一株木素过氧化物酶缺陷、锰过氧化物酶酶活明显降低的突变株,其木素降解能力为原始菌株的８０％左右。该菌粗酶液作用于纤维素酶酶解杉木木素和天然褐腐木素,可产生小分子的木素降解产物,此反应不需Ｈ２Ｏ２参与。红外光谱分析表明粗酶液对木素的作用主要为氧化作用,因此推测此突变株粗酶液中含有不同于木素过氧化物酶和锰过氧化物酶的与木素氧化降解有关的酶类