幽门螺杆菌黏附素保守区蛋白的免疫原性、安全性和黏附作用的体外评价

探讨幽门螺杆菌（Hp）保守区（AB）蛋白的体外安全性、免疫原性和黏附作用,以确定AB在Hp疫苗研制中的应用价值.ELISA法测定Hp感染者血清中抗AB抗体,四唑盐比色法（MTT）测定T细胞对AB的增殖反应,流式细胞术检测AB致T细胞表达FasL的作用,二苯胺（DPA）法测定AB致T细胞凋亡率,光镜计数法研究AB抗体对Hp与胃癌细胞黏附的影响.ELISA法共检测了55份血清,以快速尿素酶实验(RUT)作为平行对照,两法的评价判断一致性程度的指标卡帕系数为0.76. 同时,低剂量AB即可刺激Hp⁺T细胞的增殖.体外安全性实验表明,AB无明显调节T细胞表达FasL的作用以及无明显致Hp^－T细胞凋亡的作用. AB抗血清能部分阻断Hp与胃癌细胞系的黏附,在光镜下表现为经抗AB兔血清预处理后,每细胞周围黏附的细菌数较免疫前兔血清预处理组显著减少（P＜0.05）.研究表明AB是安全的、具有免疫原性的Hp菌体成分,既可以刺激体液免疫,又能够提高细胞免疫,并且其抗体还可防止Hp与胃上皮细胞的黏附.     

白介素-1β对壁细胞酸分泌等胃功能的主要作用及机制

白介素（IL）－1β是已知具有胃细胞保护性,抗溃疡,抗分泌和延迟胃排空的最强力因子,它通过刺激胃内前列腺素合成而产生作用。IL－1β通过多种通路抑制培养壁细胞的酸分泌,该抑制发生于后受体水平。IL－1β对分泌酸的壁细胞,和分泌组胺的ECL细胞二者具有阻滞作用。壁细胞表达IL－1受体。IL－1β抑制卡马可和胃泌素刺激的壁细胞酸分泌作用,对组胺刺激也有一定作用。HP感染导致浸润的胃粘膜炎症细胞释放包括IL－1β的细胞因子。IL－1β可通过其对ECL细胞分泌组胺活性的抑制,相应地介导酸分泌的抑制。     

幽门螺杆菌表面抗原免疫保护作用的体外与活体研究

目的：调查幽门螺杆菌（Hp)几种表面蛋白体外对T细胞增殖的影响和在小鼠体内的免疫保护作用。方法：评价Hp全菌抗原、尿原酶（Urease)、黏附素（hpaA)、外膜蛋白25（Hop25)和38（Hop38)对人外周血T细胞及小鼠CD4^ T细胞增殖的影响;与佐剂合用,评价上述重组蛋白对小鼠Hp感染的免疫预防作用。结果：Urease和Hop25可刺激人及鼠T细胞增殖,hapA只能刺激Hp^ PBL增殖,而Hop38则有毒性作用;Hop25和Hop38均可产生60％的完全保护,hpaA可产生100％的部分保护即降低细菌定植密度,而Urease只能产生40％的部分保护。结论：外膜蛋白可能是一组高效的Hp疫苗免疫原;其长期免疫效果及对T细胞功能的活体调节作用尚需进一步评价。国际上尚未见相关报道。     

Th1细胞因子(IFN-γ)在幽门螺杆菌致病中的作用

目的：评价Thl细胞因子IFN-γ在幽门螺杆菌(Hp)感染时对胃上皮细胞的作用。方法：胃上皮细胞经IFN-γ处理后,流式细胞术测定表面MHC-Ⅱ类分子的表达和Hp的黏附,ELISA法测定细胞因子对Hp致胃上皮细胞凋亡的影响。结果：IFN-γ可诱导胃上皮细胞表达MHCR类分子,进而增加Hp的黏附。IFN-γ本身即可诱导胃上皮细胞凋亡,并可促进Hp诱导的胃上皮凋亡。结论：Thl细胞因子IFN-γ参与并加剧了Hp感染所致的胃黏膜炎症。     

幽门螺杆菌(SS1)感染及其胃炎的小鼠模型

目的 :建立感染幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,H pylori)SS1株BALB/c小鼠感染模型 ,研究H pylori胃内定植及胃黏膜病理变化。 方法 :BALB/c小鼠胃内分别接种体外培养的H pyloriSS1株 (实验组 )或PBS(对照组 ) ,组织学方法评价H pylori定植及胃黏膜病理变化。结果 :所有对照组小鼠胃组织未见H pylori定植 ,胃组织也未见明显的炎症反应 ;而所有实验组小鼠在感染H pylori 12周后 ,胃黏膜表面的黏液层及胃小凹顶端可见大量H pylori,胃体及胃窦交界处、胃体及胃底交界处最多 ;胃组织可见到不同程度的炎性反应 ,感染H pylori 2 4周后 ,胃组织炎性反应加重。结论 :用胃内接种方法建立了小鼠H pylori感染及其相关性胃炎的模型。     

表达幽门螺杆菌黏附素保守区的减毒鼠伤寒沙门氏菌株的构建

为构建表达幽门螺杆菌（Hp）黏附素保守区（AB）的无抗性减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗,采用缺失腺苷酸环化酶基因（Δcya）、环腺苷酸受体蛋白基因（Δcrp）以及天冬氨酸β-半醛脱氢酶基因（Δasd）的鼠伤寒沙门菌（X4072）作为宿主,将编码AB的基因插入Asd⁺的组成型表达载体pYA248,通过两次转化引入宿主菌,构建了表达AB基因平衡致死的减毒鼠伤寒沙门重组菌X4072（pYA248-AB）,采用桥联法ELISA测定X4072（pYA248-AB）培养上清液和裂解上清液中AB的抗原性,参照Meacock叙述的方法及重组菌生长曲线的测定来确定重组菌株的稳定性,通过C57BL/6小鼠口服测定半致死量来确定重组菌的安全性。成功构建了表达AB的减毒鼠伤寒沙门菌重组菌株S.typhimurium X4072(pYA248-AB),桥联法ELISA测定表明重组菌X4072（pYA248-AB）培养上清中AB的含量高于菌体裂解液,重组菌pYA248-AB在没有选择压力的情况下培养100代,随机挑选的重组菌全部都能生长,且在ELISA测定AB抗原时均显阳性。重组菌的生长曲线测定表明,X4072（pYA248）和X4072（pYA248-AB）的生长状态基本一致;口服重组菌株X4072(pYA248-AB)1.0×10¹⁰cfu.30d后,C57BL/6存活率仍为100%。成功构建了表达AB的无抗性的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗X4072（pYA248-AB）,体外实验表明重组质粒是稳定的,动物实验证明重组菌株是安全的;为防治幽门螺杆菌感染提供了口服活菌疫苗候选株。     

幽门螺杆菌粘附机制的研究进展

幽门螺杆粘附于胃黏膜是其进一步发挥致病作用的前提,本文从幽门螺杆菌的粘附素、粘附素相关受体、粘附于胃上皮细胞的病毒机制以及粘附素在粘附素在该菌疫苗构建中的作用对其粘附机制的研究进展作一综述。。     

双歧杆菌对实验性大肠癌PCNA和bcl-2表达的影响

目的：观察青春型双歧杆菌对大肠癌移植瘤增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）和ｂｃｌ－２基因蛋白表达水平的影响。方法：以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型,用免疫组化法。结果：显示双歧杆菌注射组大肠癌移植瘤ＰＣＮＡ阳性细胞密度以及ｂｃｌ－２蛋白表达率、表达强度、阳性细胞密度均显著低于肿瘤对照组（Ｐ＜０．０１）。结论：青春型双歧杆菌能明显降低大肠癌的增殖活性,同时使其ｂｃｌ－２基因的表达下调。     

肿瘤核仁形成区形态定量诊断的误差及规范化分析

本文采用包括自动图象分析技术在内的ＡｇＮＯＲ形态定量学方法,以大肠肿瘤为模型,进行了ＡｇＮＯＲ定量形态学研究的误差分析,以探讨肿瘤ＡｇＮＯＲ定量诊断规范化的可能。结果表明,染色条件、视场目标选择和细胞计数量是引起ＡｇＮＯＲ定量诊断的主要误差;恒定染色环境,正确选择欲测细胞及测定足够量的细胞是使ＡｇＮＯＲ形态定量诊断规范化的途径。     

原位末端标记技术观察双歧杆菌诱导实验性大肠癌的凋亡

本文以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型,将实验分为双歧杆菌注射组以及肿瘤对照组,用原位末端标记法观察了移植瘤组织的凋亡细胞百分率。结果显示：双歧杆菌注射组大肠癌移植瘤的凋亡细胞百分率为２６４２８±１８６２,而对照组则为２０６２±８８０,两者比较具有显著的统计学意义（Ｐ＜０００１）。提示青春型双歧杆菌可诱导大肠癌组织的凋亡,这可能是其抑瘤机理的一个方面