激光诱导荧光光谱中内源性原卟啉IX对胃癌生长状态的标示作用

用不同的生物治疗方式治疗人胃癌的裸鼠模型,通过测量治疗后的瘤体体积和检查病理组织学的变化,确定了各组胃癌组织中癌细胞的不同坏死程度.应用激光诱导自体荧光光谱系统测量不同坏死程度的胃癌组织的自体荧光光谱.结果发现,随肿瘤坏死程度的加重,自体荧光光谱中内源性原卟啉Ⅸ(Pp Ⅸ)的特征峰值降低,而烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的特征峰未能提示该变化.表明Pp Ⅸ可以作为标识,灵敏地表征胃癌组织的生长状态.     

光动力诊疗中的5-氨基酮戊酸及酯类衍生物的研究进展

5-氨基酮戊酸(ALA)是体表光动力疗法的一个重要前体药物,通过代谢产物原卟啉Ⅸ(PpⅨ)介导发挥光敏作用。ALA制剂的研发和优化促生了一系列产品和技术,不仅推动了体表光动力疗法的应用,而且ALA介导的PpⅨ荧光还可用于肿瘤的荧光可视化和辅助手术。本文将对光动力诊疗中ALA及其酯类衍生物和PpⅨ的研究进展作一个系统介绍。     

草河车治疗不同阶段胃癌病变的实验动物研究

为检测用草河车治疗胃癌前病变(precancerous lesions of gastric cancer,PLGC)不同阶段模型大鼠过程中MUC1和CK18基因(细胞角蛋白基因)的表达变化,在48只大鼠采用关木通乙醇提取物灌胃制造PLGC模型的过程中,从第13周开始,每2周随机抽取6只大鼠,3只直接解剖作为模型组,3只用草河车灌胃治疗2周后解剖作为治疗组,另取10只正常大鼠用生理盐水灌胃作为空白对照组,观察各组病变程度,提取血液和胃黏膜组织后用Real-time PCR技术分别检测胃癌标志基因MUC1和CK18在治疗前后的表达变化。结果显示,治疗前,随着大鼠胃癌病变逐步加重,血浆中CK18表达水平逐渐升高,MUC1则在胃黏膜组织逐渐降低表达,用草河车提取液灌胃后,治疗组中各级病变的MUC1表达相对于模型组均有不同程度的上调,且前期比后期上调更明显;而CK18的表达均有不同程度的下调,且后期比前期下调更明显。这些结果说明,MUC1和CK18在胃癌发生和发展过程中起重要作用,而草河车的某些成分可能通过调控它们的表达来缓解病变。     

声化学激活原卟啉Ⅸ杀伤艾氏腹水瘤细胞的分子机理

采用频率为2.2 MHz、声强为3 W/cm2 的低强度聚焦超声结合原卟啉Ⅸ对艾氏腹水瘤细胞的损伤进行研究, 并初步探讨其作用的生物学机制.分别用荧光分光光度法、激光共聚焦扫描显微镜分析原卟啉Ⅸ在肿瘤细胞内的积聚、定位情况;利用台盼蓝拒染法测定聚焦超声激活原卟啉Ⅸ对细胞存活率的影响;透射电镜观察细胞的超微结构变化;罗丹明123检测线粒体膜电位变化;2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(2',7'- dichlorodihydrofluorescin diacetate, DCFH-DA)检测细胞内活性氧(Reactive oxygen species, ROS)水平;硫代巴比妥酸法检测细胞膜脂质过氧化水平的变化.通过研究发现,艾氏腹水瘤细胞对原卟啉Ⅸ有一定的选择性吸收和潴留作用,原卟啉Ⅸ主要定位于细胞的线粒体中;在超声结合原卟啉Ⅸ作用下,艾氏腹水瘤细胞的存活率明显下降;细胞的超微结构发生明显损伤;线粒体膜电位下降;ROS生成量显著增加;脂质过氧化水平显著增加.研究结果表明:超声激活原卟啉Ⅸ对艾氏腹水瘤细胞有着明显的协同杀伤效应,其间产生的活性氧自由基作用,降低线粒体膜电位,增加膜的脂质过氧化水平,可能是其损伤艾氏腹水瘤细胞的主要因素之一.     

人体鼻咽组织的时间分辨自体荧光光谱研究

实验研究了在397 nm半导体脉冲激光激发下,人体离体鼻咽正常和癌变组织在600 nm荧光发射波长处的时间分辨自体荧光光谱特性。利用双指数衰减方程对时间分辨自体荧光光谱进行拟合后,获得相应的荧光强度随时间的指数衰减方程以及荧光平均寿命。人体鼻咽癌变和正常组织在600 nm处的自体荧光平均寿命分别为(2.94±0.51)ns和(4.29±0.71)ns,两者之间存在显著的差异。应用时间分辨光谱技术的诊断灵敏度和特异性分别为75%和100%。初步表明了时间分辨自体荧光光谱在早期鼻咽癌诊断的应用价值,该方法可望与传统的稳态荧光光谱结合起来,进一步提高早期鼻咽癌荧光诊断的准确率。     

5-氨基酮戊酸光动力疗法体外抑制断发毛癣菌肉芽肿株增殖研究

目的探讨5-氨基酮戊酸光动力疗法(5-Aminolevulinic acid photodynamic therapy,ALA-PDT)对体外培养的断发毛癣菌肉芽肿株的杀伤效应。方法将临床Majocchi肉芽肿患者皮损分离培养出的断发毛癣菌肉芽肿株,在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上活化后制备菌悬液,与5mmol/L ALA共孵育后荧光显微镜观察原卟啉PpⅨ(ProtoporphyrinⅨ,PpⅨ)产生情况。实验分对照组、单药组、单光组和ALA-PDT组。对照组无处理。ALA-PDT组断发毛癣菌与5 mmol/L ALA共孵育6h后,采用功率密度为40mW/cm2的633nm红光以不同能量密度(50、100、150、175、200J/cm2)照射。单药组断发毛癣菌与5mmol/L ALA共孵育6h,不照光。单光组无ALA共孵育,只给予200J/cm2红光照射。通过数码相机拍摄照片及菌浓度评估ALA-PDT对断发毛癣菌肉芽肿株生长的抑制效应。结果荧光显微镜下可见明显砖红色荧光物质PpⅨ产生,当照光能量密度为175、200J/cm2时,照片显示菌落生长明显受限,数量减少,菌浓度计数分别为(0.53±0.058)×105 CFU/mL、(0.13±0.057)×105 CFU/mL,明显低于对照组、单药组、单光组及其他低能量密度ALA-PDT组(P0.05)。结论 ALA-PDT对断发毛癣菌肉芽肿株有明确的杀伤效应,可为临床ALA-PDT治疗皮肤癣菌感染提供理论依据。     

自体荧光技术在早期肠癌诊断中的应用

自体荧光技术以无损、实时、灵敏度高等优点已成为早期肠癌诊断应用的技术之一。本文总结了自体荧光光谱技术在早期肠癌诊断应用中的研究进展,重点阐述了荧光激发波长的选择,荧光光谱数据处理方法,以及正常和癌变肠道组织光谱差异的来源。在分析肠道组织中内源性荧光物质及其分布的基础上,回顾了自体荧光成像系统的临床应用进展。最后指出自体荧光光谱与成像技术在早期肠癌诊断中的应用和发展趋势。     

Wnt 信号通路GS 蛋白在胃癌中的表达和临床意义

目的:研究Wnt信号通路的中GS蛋白(谷氨酰胺合成酶)在胃癌组织中的表达,探索其在胃癌发生、发展中的意义。方法:用免疫组织化学法测定胃癌组织(110例)、肠化生组织(30例)、不典型增生组织(20例)及慢性浅表性胃炎组织(60例)中GS蛋白表达。用快速尿素酶法与病理组织切片染色法检测上述各组织中HP感染的情况,并予统计学分析比较其差异。结果:胃癌组织GS高蛋白表达与组织分型、分化程度、淋巴结转移密切相关(P<0.05),与肿瘤大小、部位、TNM分期、Borrmann分型、性别、年龄等无明显相关(P>0.05)。GS表达与HP感染密切相关。结论:GS蛋白高表达同胃癌生物学行为密切相关,在胃癌的发生、发展中起重要作用。     

牛β-酪蛋白基因控制的人凝血Ⅸ因子基因在小鼠乳腺组织中的表达调控

构建牛β 酪蛋白基因控制的人凝血Ⅸ因子 (hFⅨ )乳腺组织特异性表达载体pCⅨm,pCiⅨ ,pCⅨ和报告基因 (LacZ)乳腺表达载体 pCiLacZ ,pCLacZ ,利用Stearylamine(SA)阳离子脂质体包埋 5种载体 ,通过尾静脉注射的方法直接转染哺乳期母鼠的活体组织 .在DNA ,mRNA以及蛋白质水平对实验小鼠的检测结果表明 :转染处理后hFⅨ基因和LacZ基因在小鼠乳腺获得表达 ,hFⅨ蛋白在乳汁中的最高分泌表达量为 80 .2 8ng/mL ,其中 85 %以上已经羧基化并具有生物学活性 ;对 5种载体表达调控的研究证实牛β_酪蛋白基因 5′端 2 .0kb的片段能够驱动人凝血Ⅸ因子基因在小鼠乳腺组织中分泌表达 ,β_酪蛋白基因内含子 1能够提高Ⅸ因子基因在乳腺组织中的表达水平 ,并能影响该基因表达的组织特异性 ;和hFⅨcDNA相比 ,hFⅨ基因自身的内含子 1能够提高该基因在活体乳腺组织中的表达水平 3倍以上     

幽门螺杆菌感染与胃癌中p21和p27表达的关系

探讨胃癌中p21~(WAF1)和p27~(KIP1)的表达及其临床意义,并分析幽门螺杆菌(Hp)感染和p21~(WAF1)、p27~(KIP1)表达的关系。采用免疫组化法检测了89例胃癌组织中p21~(WAF1)和p27~(KIP1)表达水平,并采用快速尿素酶试验和组织病理学检测两种方法检查这些胃癌病例的Hp感染情况。实验结果显示,胃癌组织p21~(WAF1)的表达水平在不同病例组织中有所差异。结合临床病理学指数分析显示,降低的p21~(WAF1)表达与较深的肿瘤侵袭密切相关(P<0.05)。免疫组织化学结果显示,p27~(KIP1)无论在细胞浆中还是细胞核内都有表达,p27~(KIP1)核表达水平与胃癌的组织病理学分型密切相关(P<0.05)。此外,还发现Hp阳性病例的p27~(KIP1)阳性表达率明显低于Hp阴性者(P<0.05),而p21~(WAF1)表达阳性率在Hp阳性和阴性胃癌病例中无显著差异(P>0.05)。结果提示,胃癌的进展与细胞周期调节蛋白p21~(WAF1)和p27~(KIP1)的表达下调有关,Hp感染的致癌过程中可能有p27~(KIP1)参与。     

原卟啉Ⅸ-声动力学疗法诱导S180肿瘤细胞的凋亡

采用频率为2.2MHz,声强为3W/cm2的低强度聚焦超声结合原卟啉Ⅸ对S180肿瘤细胞的损伤以及诱导细胞凋亡的发生进行研究,并探讨其作用的分子机制。超声激活原卟啉Ⅸ作用于S180肿瘤细胞处理后,不同时间段取材,通过Annexin V-PI荧光双染观察凋亡细胞的形态学变化;采用TUNEL末端标记法检测细胞凋亡的发生率;利用间接免疫荧光技术和免疫细胞化学技术检测细胞内凋亡相关蛋白Caspase-8、Caspase-3以及死亡底物聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]的表达活性变化。实验结果显示:超声激活原卟啉Ⅸ可以诱导S180肿瘤细胞凋亡的发生,并且凋亡细胞的比例随着取材时间的延迟明显增加;免疫细胞化学染色表明声动力学处理显著增强了细胞内Caspase-8和Caspase-3的蛋白表达活性,并且其活化程度分别于处理后1h和3h达到最高,而死亡底物PARP也发生时间相关性剪切。研究表明,超声结合原卟啉Ⅸ可以通过诱导细胞凋亡的方式发挥其抗肿瘤活性,其作用的分子机制可能涉及到膜受体介导的Caspase-8、Caspase-3以及PARP依赖性的凋亡信号调节通路     

胃癌中CDC4和cyclin E的表达及临床意义

检测胃癌中CDC4/Fbxw7、cyclin E的表达,分析其与胃癌临床病理特征的关系和临床意义.采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测部分胃癌和胃正常组织中CDC4、cyclin E mRNA的表达;免疫组化(SP法)检测60例胃癌组织及对应正常组织中CDC4/FBXW7、cyclin E蛋白的表达,探讨两者的临床病理特征之间的关系.胃癌中CDC4蛋白表达显著低于正常组织(P<0.05),而cyclin E蛋白的表达在胃癌组织中显著增高,阳性率与癌旁正常组织比较,差异有统计学意义(P<0.01).CDC4、cyclin E蛋白和mRNA表达均与胃癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移及浸润深度有关.CDC4、cyclin E在mRNA表达水平上呈负相关.CDC4的表达缺失可能导致cyclin E的过表达.CDC4的低表达可能是胃癌诊疗及预后判断的重要生物学指标.     

采用广义加法模型整合数字高程模型和遥感数据进行植被分布预测

为了采用广义加法模型整合数字高程模型和遥感数据进行植被分布的预测, 并探索耦合环境变量和遥感数据作为预测变量是否能够有效地提高植被分布预测的精度, 选择海拔、坡度、至黄河最近距离、至海岸线最近距离, 以及从SPOT5遥感影像中提取的光谱变量作为预测变量, 采用广义加法模型整合环境变量和光谱变量, 建立植被分布预测模型。研究设置3种建模情景(以环境变量作为预测变量, 以光谱变量作为预测变量, 综合使用环境变量与光谱变量作为预测变量)对黄河三角洲的优势植被类型的分布进行了预测, 并对预测结果采用偏差分析、受试者工作特征曲线和野外采样点对比等3种方法进行了验证。结果表明: (1)基于广义加法模型的植被分布预测方法具有一定的实用性, 可以较为准确地预测植被的分布; 盖度较高的植被类型预测精度较高, 盖度较低的植被类型预测精度较低, 植物群落结构的特点是出现这些差异的主要原因; 综合使用环境变量和光谱变量作为预测变量的模型, 预测精度高于单独以环境变量或者光谱变量作为预测变量的模型。(2)环境变量、光谱变量大多被选入模型, 二者均对植被分布预测有重要的作用; 同一预测变量在不同植被类型的预测模型中的贡献不同, 这与植被的光谱、环境特征差异有关; 同一预测变量在不同的建模情景下对模型的贡献不同, 环境变量与光谱变量的耦合效应可能是导致预测变量对模型的贡献出现变化的原因。     

胃癌组织中Src激酶激活和HER2、Ki-67的表达及相关性研究

目的 研究胃癌组织中非受体酪氨酸激酶c-Src激活形式p-Src(Y419)和HER2、Ki-67的表达及相互关系.方法 应用免疫组化法检测123例胃癌组织及56例癌旁组织p-Src(Y419)、HER2、Ki-67的表达,分析其临床病理意义和相互关系.结果 p-Src(Y419)在胃癌及癌旁组织中表达积分中位值分别为80和30,差异显著(P＜0.05),其表达强弱与肿瘤大小、分化程度、浸润深度、pTNM分期显著相关;HER2在胃癌组织中高表达率为39％,癌旁组织HER2无表达,差异显著(P＜0.05);分化良好,肠型,单纯腺癌的胃癌组织HER2表达率高.Ki-67在胃癌及癌旁组织中标记指数范围分别为0-98％和0-20％,其中位值分别为70％和3.5％,差异显著(P＜0.05).Ki-67表达高低与组织类型、Lauren分型、脉管癌栓显著相关,与分化程度有显著差异的趋势;胃癌组织中HER2表达与p-Src(Y419)、Ki-67表达呈正相关,而癌旁组织中无类似关系;胃癌及癌旁组织中p-Src(Y419)表达与Ki-67表达均呈正相关.结论 胃癌组织Src激活、HER2及Ki-67表达在胃癌中有重要的临床意义,可能作为胃癌生物学行为的标记物.胃癌中c-Src激活和HER2、Ki-67表达有一定的相关性.     

红藤养胃汤对胃癌患者血清MG7-Ag、TPS及OPN水平的影响

目的:探讨红藤养胃汤治疗胃癌的疗效及对血清胃癌相关抗原(MG7-Ag)、骨桥蛋白(OPN)、组织多肽特异性抗原(TPS)水平的影响。方法:选择2015年2月至2017年1月在我院进行胃癌治疗的86例患者,将其随机均分为观察组和对照组,每组43例。对照组患者给予奥美拉唑治疗,观察组患者在对照组基础上给予红藤养胃汤疗,比较两组患者的临床疗效,治疗前后血清MG7-Ag、TPS、OPN水平变化及不良反应的发生情况。结果:治疗后,观察组总有效率显著高于对照组,血清MG7-Ag、TPS、OPN水平均显著低于对照组,差异均具有统计学意义(P0.05),且恶心呕吐、发热及白细胞减少等不良反应的发生率显著低于对照组(P0.05)。结论:红藤养胃汤可显著提高胃癌患者的临床疗效,减少不良反应,有效降低患者血清MG7-Ag、TPS、OPN水平。     

AAV介导的hFⅨ基因在血友病B小鼠骨骼肌中特异性表达研究

采用重组腺相关病毒(rAAV)介导人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)微基因在Ⅸ因子基因剔除小鼠骨骼肌中有效表达.在构建的质粒中,rAAV两侧反转重复末端顺序中插入肌酸肌酶增强子(MCK)和β肌动蛋白启动子(βA)调控下的hFⅨ微基因(hFⅨm1).直接肌肉注射高滴度rAAV(2.5×1011/mL),血友病B小鼠血浆hFⅨ最高表达量256ng/mL,凝血活性明显改善.从hFⅨ表达时效曲线来看,hFⅨ水平在第15天达到高峰,随后因血循环中抗hFⅨ抗体的出现而渐次下降.该结果提示采用rAAV系统,体内直接途径开展血友病B基因治疗是值得进一步探索的方向.     

应用荧光原位杂交检测人凝血因子Ⅸ在转基因小鼠染色体上的整合

应用荧光原位杂交（FISH）技术检测两个转基因小鼠家系从F1到F4代的整合情况。阳性转基因小鼠98%~100%的中期分裂相,85%~94%的间期核出现杂交信号;阴性对照小鼠100%的中期分裂相、95%~96%的间期核未出现杂交信号。结果表明,该FISH实验条件能对转基因整合位点进行高效特异检测。本文分析的两家系转基因小鼠均为单位点整合, 但整合位点不同。各家系内F1到F4代的转基因小鼠均可检出整合染色体,且整合位点相同,表明外源基因稳定整合并遗传给后代。 Abstract:Fluorescence in situ hybridization （FISH） was used to detect the integration of hFⅨ on chromosomes of transgenic mice from F1 to F4 generation in two strains.For transgenic mice,98%~100% of metaphases and 85%~94% of interphases showed hybridization signal.For negative control mice,100% of metaphases and 95%~96% of interphases showed no hybridization signal.The results demonstrated that FISH developed to detect the integration sites of hFⅨ was high efficient and specific.The integration sites of the transgenic mice analyzed were both single but different between the two strains.The integration chromosomes can be found in the transgenic mice from F1 to F4 generation and the integration sites were the same as each of the strains,which indicated that the transgene was stably integrated and transmitted to offspring.     

TGR5和CDX2在胃黏膜肠化生及胃癌中的表达及意义

目的:探讨G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor,TGR5)和尾型同源盒2(Caudal type homeobox 2,CDX2)在胃黏膜肠化生(Intestinal Metaplasia,IM)及胃癌中的表达和意义。方法:采用免疫组织化学染色法检测TGR5和CDX2在57例慢性胃炎、85例IM、98例胃癌组织中的表达。比较各组间TGR5和CDX2的表达差异,并分析其与胃癌临床病理参数的关系及与胃癌患者预后的关系。利用Spearman秩相关检验分析TGR5和CDX2表达的相关性。结果:IM和胃癌组织中TGR5的高表达率分别为54.1%和58.2%,二者比较无显著差异(P0.05),但均显著高于慢性胃炎组织(P0.01)。TGR5高表达与胃癌患者TNM分期(III+IV期)(P=0.004)、淋巴结转移(P=0.046)及预后较差(P=0.006)相关。胃癌组织中CDX2的高表达率(30.6%)较IM组织(48.2%)显著降低(P0.05),但其均显著高于慢性胃炎组织(P0.01)。CDX2高表达与胃癌患者TNM分期(I+II期)(P=0.008)、无淋巴结转移(P=0.014)、预后较好(P=0.023)相关。TGR5和CDX2表达在慢性胃炎和IM中无相关性(P0.05),在胃癌中呈显著正相关(P=0.003)。结论:TGR5和CDX2在IM和胃癌组织中均显著上调,可能参与了IM和胃癌的发生发展。     

胃癌血清的表面增强拉曼光谱研究

表面增强拉曼光谱技术在癌症诊断领域已经有了广泛的研究和应用,本文利用金纳米溶胶为增强基底,采用便携式近红外拉曼光谱系统,对89例胃癌患者及正常人血清样本进行了SERS光谱探测。结果表明,血清的特征峰主要归属于氨基酸,其次是核酸、糖类及脂类。相比于正常人血清SERS光谱,胃癌血清中归属于核酸的特征峰强度都较高,大部分归属于蛋白质的特征峰强度较低,与医学研究结论相符。说明SERS技术可以有效地反映胃癌患者和正常人血清的差异,为后期SERS技术快速诊断胃癌提供了实验基础。     

不同浓度5-氨基酮戊酸对光动力方法抗白念珠菌效果的影响

目的通过测定白念珠菌内不同光敏剂浓度下生成原卟啉IX(Pp IX)的水平及5-氨基酮戊酸光动力疗法(5-ALA-PDT)对白念珠菌的抑菌率,为临床选择最佳光敏剂浓度提供理论依据。方法制备白念珠菌悬液,与ALA避光孵育,采用激光共聚焦显微镜观察Pp IX产生情况,MTT法测定5-ALA-PDT对白念珠菌生长的抑制率。结果白念珠菌与ALA避光孵育后有荧光物质Pp IX产生,ALA光敏剂浓度与Pp IX强度呈正相关,当ALA浓度到达300 mg/m L时,Pp IX强度将不再增加。对照组无荧光物质出现。结论 ALA-PDT对白念珠菌抑制效应同光敏剂浓度密切相关。这为临床ALA-PDT治疗白念珠菌疾病提供了理论依据。