RADS1和BRCA1在结直肠癌中的表达及临床意义

目的观察结直肠癌中RAD51和BRCA1基因的表达,探讨二者与结直肠癌发生发展及治疗的关系。方法收集结直肠癌癌灶及癌旁正常组织各42例,采用免疫组织化学法及逆转录一聚合酶链反应（reverse transeription-PCR,RTPCR）检测标本组织中RAD51、BRCA1蛋白和mRNA的表达水平。分析RAD51、BRCA1在结直肠癌中的表达水平与临床病理特征的关系以及二者之间的相互关系。结果在结直肠癌组织中RAD51（33例,78．6％）、BRCA1（30例,71．4％）的表达较癌旁正常组织RAD51（7例,16．7％）、BRCA1（18例,42．9％）高（P〈0．05）;结直肠癌中RAD51mRNA（0．51±0．26）和BRCA1 mRNA（O．70±0．96）的值较两者在正常组织中mRNA（0．10±0．22）高（P〈0．01）;两者蛋白及mRNA的表达水平与性别、年龄、分化程度、TNM分期等均无统计学差异（P〉0．05）;BRCA1与RAD51在结直肠癌中的表达水平成明显正相关（蛋白：r=0．731,P〈0．01mRNA：r=0．572,P〈0．01）。结论BRCA1与RAD51在结直肠癌组织中高表达,且二者的表达水平呈明显正相关;BRCAl与RAD51的表达异常可能与结直肠癌的发生发展有关。     

抑癌基因MTUS1在结直肠癌的表达与其淋巴结转移呈负相关

微管相关肿瘤抑制基因1(MTUS1)是一个新的肿瘤抑制基因,编码血管紧张素II AT受体结合蛋白（ATIPs）. MTUS1基因表达下调可促进肿瘤细胞增殖,但MTUS1基因表达在结直肠癌转移中的作用尚不知晓.本文以接受根治性手术、经病理检查证实的50例结直肠癌患者新鲜癌组织、癌旁组织和远癌组织为材料,探索MTUS1基因表达与结直肠癌淋巴结转移的关系. 荧光定量PCR及蛋白质免疫印迹揭示,有淋巴结转移的结直肠癌患者的癌及癌旁组织MTUS1 基因表达的mRNA及蛋白质水平明显低于无淋巴结转移的患者. MTUS1 蛋白质在淋巴结转移的结直肠癌患者的癌及癌旁组织表达下调,并进一步得到免疫组织化学的验证.实验结果提示,MTUS1的表达量与肿瘤的侵润深度有明显的负相关性.结合临床资料,推断抑癌基因MTUS1在肿瘤的发生、发展及淋巴转移中发挥重要作用.     

结直肠癌组织BCL9和VEGF的表达与临床意义

探讨结直肠癌中B细胞淋巴瘤因子9(B-cell lymphoma 9,BCL9)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达与临床病理的关系及其临床意义.采用免疫组织化学SABC染色法,检测83例结直肠癌组织和10例癌旁正常组织中BCL9及VEGF蛋白的表达情况,并且分析其与临床病理特征的关系.BCL9和VEGF在癌组织中表达率分别为67.47%(56/83)和69.88%(58/83),而癌旁正常组织中均不表达.BCL9在结直肠癌中的表达与肿瘤分化程度、浸润深度、Dukes分期、有无淋巴结转移相关(P0.05).VEGF在结直肠癌中的表达与肿瘤分化程度、浸润深度无关,而与肿瘤Dukes分期、有无淋巴结转移密切相关(P0.01).结直肠癌中VEGF的表达随BCL9表达的升高而升高(P0.01).BCL9、VEGF可能在结肠癌的发生发展过程中起重要作用.BCL9可能通过上调VEGF的表达,促进肿瘤浸润和转移.     

DNMT在幽门螺杆菌感染与非感染胃粘膜组织的差异表达

DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase, DNMT）是表观遗传学研究热点. 本文分析DNMT1、DNMT2、DNMT3A、DNMT3B、 DNMT3L在成人胃粘膜的表达,并初步研究DNMT抑制剂对胃粘膜细胞的影响. 免疫组织化学法对60例成人胃粘膜组织分析发现 ,5种DNMT均在组织中表达,以DNMT2、DNMT3B表达率较高,DNMT3L、DNMT3A次之,DNMT1较低.进一步分析发现,幽门螺杆菌 感染与非感染的胃粘膜组织有DNMT表达差异,以感染组中DNMT1、DNMT2、DNMT3B表达增强较显著. 免疫荧光法及Western免 疫印迹法对胃粘膜细胞株GES 1分析发现,5种DNMT亦在细胞中表达;且DNMT1为胞核胞浆共表达,DNMT2为胞核表达, DNMT3A、DNMT3B、DNMT3L为胞浆表达. 噻唑蓝比色法研究GES-1发现,DNMT抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷可抑制GES 1增 殖,并呈时间剂量依赖. 研究提示,DNMT在成人胃粘膜表达并发挥作用,幽门螺旋杆菌感染可能与DNMT表达异常相关.     

EGFR和KDR在胃癌组织中的表达及临床意义

探讨表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）和含激酶插入区受体（kinase-insert domain-containing receptor,KDR）的表达与胃癌临床病理特征的关系及其临床意义.应用免疫组织化学PV法,检测60例胃癌组织中EGFR和KDR的表达情况,并且分析其与临床病理特征的关系.胃癌组织中EGFR和KDR阳性表达率分别为48.3%（29/60）、63.3%（38/60）,二者的阳性表达与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期相关（P〈0.05）,并且存在共表达现象,表达强度呈正相关（rs=0.664,P〈0.05）.EGFR和KDR在胃癌的进展中起协同作用,为靶向EGFR和KDR生物治疗制剂在胃癌生物治疗中的应用及联合应用提供了一定的理论依据.     

人EGFR显性负性突变体抑制胃癌细胞促血管形成能力

目的探讨人表皮生长因子显性负性突变体(dominant negative epidermal growth factor receptor,DNEGFR))对胃癌细胞促血管形成能力的影响及其分子机制,并检测其对裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法选用2株人胃癌细胞,分为如下6组:SGC-7901及NCI-N87细胞未转染组(US组,UN组),SGC-7901及NCI-N87细胞pEGFP-N1质粒转染组(ES组,EN组),SGC-7901及NCI-N87细胞pEGFPN1-DNEGFR质粒转染组(DS组,DN组)。采用人脐静脉内皮细胞(humanumbilical vein endothelial cell,HUVEC)管腔结构形成实验检测体外促血管形成能力,采用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞培养液中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的水平,建立人胃癌细胞裸鼠移植瘤模型,标本微血管密度(microvessel density,MVD)检测体内促血管形成能力,标本体积检测其对裸鼠皮下移植瘤生长的影响。结果转染pEGFPN1-DNEGFR质粒的人胃癌细胞株出现HUVEC管腔结构形成抑制,培养液中VEGF水平降低,MVD计数降低,裸鼠皮下移植瘤体积变小。结论 DNEGFR可能通过下调VEGF分泌抑制胃癌细胞体外及裸鼠体内促血管形成能力,最终抑制裸鼠皮下移植瘤生长。     

胃癌中CDC4和cyclin E的表达及临床意义

检测胃癌中CDC4/Fbxw7、cyclin E的表达,分析其与胃癌临床病理特征的关系和临床意义.采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测部分胃癌和胃正常组织中CDC4、cyclin E mRNA的表达;免疫组化(SP法)检测60例胃癌组织及对应正常组织中CDC4/FBXW7、cyclin E蛋白的表达,探讨两者的临床病理特征之间的关系.胃癌中CDC4蛋白表达显著低于正常组织(P<0.05),而cyclin E蛋白的表达在胃癌组织中显著增高,阳性率与癌旁正常组织比较,差异有统计学意义(P<0.01).CDC4、cyclin E蛋白和mRNA表达均与胃癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移及浸润深度有关.CDC4、cyclin E在mRNA表达水平上呈负相关.CDC4的表达缺失可能导致cyclin E的过表达.CDC4的低表达可能是胃癌诊疗及预后判断的重要生物学指标.     

Sulfiredoxin基因敲低对HeLa细胞恶性生物学行为的影响

Sulfiredoxin（SRX)作为一种重要的抗氧化蛋白质,最近研究发现其对某些肿瘤细胞生物学行为及细胞恶性转化有重要作用,而SRX对宫颈癌细胞恶性生物学行为有何影响尚未见报道.本研究选取宫颈癌HeLa细胞株,分别设为Wild-type（WT）组,Non-target（NT）组,Knock-down（KD）组. 利用siRNA技术干扰SRX基因在HeLa细胞中的内源性表达,采用MTT法、平板克隆形成实验、Transwell实验、流式细胞术分别检测肿瘤细胞增殖力、浸润、迁移能力、细胞凋亡情况,并分别用3组HeLa细胞上清液处理人脐静脉内皮细胞,观察各组条件培养基对内皮细胞血管形成能力的影响.结果表明,与两对照组比较,SRX干扰组细胞增殖力、浸润、迁移力显著降低,且干扰组上清使内皮细胞体外血管形成能力也明显下降（P<0.05）,而凋亡率则明显增加（P<0.05）.而两对照组之间结果均无显著差异（P>0.05）.实验结果表明,SRX基因对宫颈癌HeLa细胞恶性生物学行为具有促进作用,说明SRX可能与宫颈癌恶性进展有密切关系.     

RhoA在上皮性卵巢癌细胞中的表达与侵袭性的相关性

培养上皮性卵巢癌细胞H08910PM、H08910及正常卵巢上皮细胞HOSEA 3种细胞.对3种细胞分别采用免疫细胞化学法检测RhoA的表达、Transwell小室体外侵袭试验测定体外侵袭能力、与人脐静脉内皮细胞HUVEC建立细胞共培养系统测定血管形成能力.结果表明,RhoA在H08910PM细胞中表达最强,在H08910中次之,在HOSEA中最弱;3种细胞的侵袭能力以H08910PM最强,H08910较弱,HOSEA无侵袭能力;H08910PM的血管形成能力最强,H08910其次,HOSEA无血管形成能力(P<0.01).Pearson相关分析结果显示,RhoA表达水平分别与细胞侵袭能力及血管形成能力呈正相关(P<0.05).RhoA在上皮性卵巢癌细胞中表达水平越高,细胞体外侵袭及血管形成能力随之更强.RhoA可能作为重要因子参与上皮性卵巢癌的侵袭转移过程.     

维生素D_3联合5-氟尿嘧啶对人食管癌Eca-109细胞移植瘤VDR表达的影响

探讨维生素D3、5-氟尿嘧啶单独与联合使用对人食管癌Eca-109细胞移植瘤维生素D受体(vitamin Dreceptor,VDR)的作用.随机分为对照组(C)、预处理组(PT)、维生素D3组(V)、5-氟尿嘧啶组(F)、预处理+5-氟尿嘧啶组(PT+F)、维生素D3+5-氟尿嘧啶组(V+F).体外培养人食管癌Eca-109细胞,BALB/c裸鼠皮下荷瘤,2.5μg/kg1,25-(OH)2维生素D3、25 mg/kg 5-氟尿嘧啶单独与联合腹腔注射,观察瘤体生长情况,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹技术(Western blot)检测裸鼠瘤体组织VDR mRNA与蛋白的表达.研究发现1,25-(OH)2维生素D3、5-氟尿嘧啶均能抑制裸鼠移植瘤的生长,PT、V、F、PT+F、V+F组瘤体体积与C组比较差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR与Western blot结果显示经1,25-(OH)2维生素D3单独与联合5-氟尿嘧啶使用后瘤体组织中VDR mRNA和蛋白表达升高,且联合用药更为显著(P<0.05).结果表明1,25-(OH)2维生素D3、5-氟尿嘧啶均能抑制人食管癌Eca-1...