在人类胚胎发育过程中表达的新锌指蛋白基因ZNF359的研究

kriipple型锌指蛋白是一类具有重要功能的转录调节因子。初步克隆了一个新的人类kriipple型锌指蛋白基因,经国际基因命名委员会批准命名为ZNF359。此基因长3271个碱基,含6个外显子,在基因组DNA上长18kb。它编码的蛋白质全长643个氨基酸,含一个KRAB框,16个C2H2型的锌指,在两者之间还有一个典型的中间重复序列。Northern Bolt分析表明该基因在人类早期胚胎的各个组织中普遍表达,且在肾、心脏和肺的表达水平最强。其结构和表达特征预示着它编码的是一个具DNA结合功能的转录调控因子。     

pCMV-BD-ZNF424和pCMV-Tag2-ZNF424缺失突变重组质粒的构建

锌指蛋白基因家族是人类最大的基因家族之一,目前已知的很多锌指蛋白成员都是转录调控因子.KRAB/C2H2型锌指蛋白是一类重要的转录因子,ZNF424是该亚家族的一个新成员.已经初步证明ZNF424具有转录激活作用,为了进一步研究ZNF424各结构域激活程度和在信号途径中的作用,设计出引物,以pCMVB-D-ZNF424重组质粒作为模板,PCR扩增出含ZNF424基因的KRAB、LINK和ZNF的3个含不同结构域的区域,克隆到pMD18T-载体,然后内切酶切下各目的片段,再构建出pCMVB-DK-RAB、pCMVB-DL-INK、pCMVB-D-ZNF、pCMVT-ag2BK-RAB、pCMVT-ag2BL-INK和pCMVT-ag2CZ-NF共6个缺失突变重组质粒,为进一步研究ZNF424基因功能奠定基础.     

人类锌指结构新基因ZNF18的克隆和表达谱分析

在很多转录因子中发现的锌指结构,被认为在人类心脏的发育和相关疾病的发生过程中发挥重要的作用。本文报道了克隆和表达分析人类新的锌指蛋白基因ZNF18。该基因cDNA长2 767 bp,编码一个有549个氨基酸的蛋白,这一蛋白含有一个SCAN结构域,一个KRAB结构域和5个连续的C2H2型锌指结构域。ZNF18蛋白与小鼠Zfp535有77％的同源性。ZNF18基因定位于人染色体17p12~p13,包含9个外显子和8个内含子。以ZNF18全长编码区为探针进行Northern杂交,结果显示ZNF18在成体小鼠各组织中广泛表达,但在心脏中低丰度表达。整体原位杂交结果显示,ZNF18基因在小鼠胚胎的表达有很高的动态性。ZNF18主要在E7.5小鼠胚胎的胚外组织表达,E8.5出现了胚胎躯干前端表达。ZNF18从E9.0开始在胚胎的心脏和尾部表达,尤其在E10.5胚胎的心脏高丰度表达。这提示ZNF18基因与心脏发育过程可能有密切的关系。     

锌指基因ZNF268两个新的差异剪接本克隆及鉴定

ZNF268是一个典型的KRAB类锌指基因,含有24个C2H2型锌指基序和一个KRAB功能域,它在人胚胎发育早期表达,并与胚胎肝脏的发育相关。本研究通过免疫组化的方法,发现ZNF268在3～5周龄人胚的造血干细胞中有表达;进一步通过RT-PCR的方法检测发现ZNF268在健康成人全血细胞中也有表达,并且表达有4个差异剪接本,从中克隆得到两个新的ZNF268差异剪接本ZNF268c和ZNF268d。推测ZNF268和血细胞生长发育相关。     

人类锌指蛋白ZNF382对肌生成的调控作用

人类基因组中有大量哺乳类特有的KRAB锌指基因,这些基因的功能大多尚不清楚,ZNF382就是其中一个.本文研究了人类锌指蛋白ZNF382对肌生成的调控作用.人类ZNF382基因在肌肉组织中高表达,ZNF382的mRNA水平在C2C12细胞的肌生成过程中上调,ZNF382调节肌肉特异性基因的表达,在NIH3T3细胞中,ZNF382与E-box蛋白E12和成肌调节因子MyoD共转增强肌肉肌酸激酶MCK启动子的活性;ZNF382的启动子预测分析也发现ZNF382的启动子上含有MyoD和血清反应因子SRF的结合位点,这些结果提示人类ZNF382蛋白在肌生成中起着重要的作用.     

一个与小鼠锌指蛋白基因ZF-12相关的假基因的克隆和鉴定

小鼠类Krüppel锌指蛋白基因ZF-12为人的类Krüppel锌指蛋白基因ZNF191的同源基因,它们都编码368个氨基酸残基,N端存在SCAN结构域,C端有4个连续的锌指模体,最近的研究表明ZNF191是肝癌发生的相关基因。我们以人锌指蛋白基因ZNF191的cDNA为探针,筛选小鼠λ噬菌体基因组文库,意外地获得了1个与小鼠锌指蛋白基因ZF-12相类似的基因,多种组织的RT-PCR和启动子序列分析,暗示该基因不表达,且该基因无内含子,与ZF-12高度相似,存在突变,暗示其为与ZF-12相关的假基因序列,经查新证实它为新的序列后,以ZF12p(ZF-12 pseudogene)命名在GenBank登录(AY040222)。查寻GenBank的人类基因组库以及Southern结果显示人类基因组中无ZNF191假基因序列。ZF12p与ZF-12高度相似,暗示ZF12p在进化过程中产生的时间较晚,这对研究锌指蛋白基因ZF-12的突变与进化具有重要的意义。     

一个与小鼠锌指蛋白基因ZF—12相关的假基因的克隆和鉴定

小鼠类Krueppel锌指蛋白基因ZF-12为人的类Krueppel锌指蛋白基因ZNF191的同源基因,它们都编码368个氨基酸残基,N端存在SCAN结构域,C端有4个连续的锌指模体,最近的研究表明ZNF191是肝癌发生的相关基因,我们以人锌指蛋白基因ZNF191的vDNA为探针,筛选小鼠λ噬菌体基因组文库,意外地获得了1个与小鼠锌指蛋白基因ZF-12相类似的基因,多种组织的RT-PCR和启动子序列分析,暗示该基因不表达,且该基因无内含子,与ZF-12高度相似,存在突变,暗示其为与ZF-12相关的假基因序列,经查新证实它为新的序列后,以ZF12p（ZF-12pseudogene)命名在GenBank登录（AY040222）。查录GenBank的人类基因组库以及Southern结果显示人类基因组中无ZNF191假基因序列,ZF12p与ZF-12高度相似,暗示ZF12p在进化过程中产生的时间较晚,这对研究锌指蛋白基因ZF-12的突变与进化具有重要的意义。     

一条KRAB型锌指蛋白全长新基因的克隆与功能初探

从人胎脑cDNA文库中克隆到一条全长的锌指蛋白新基因的cDNA,命名为ZNF303。序列分析表明,ZNF303的C末端含有7个保守的锌指基序,N末端含有一个KRAB(Krüppel?associated box)结构域。利用肝癌组织表达谱基因芯片杂交证明,该基因在肝癌组织中的表达量有明显降低。认为这种降低可能跟肝癌的形成和转移有密切的关系。利用辐射杂交基因定位技术,得出该基因在人类染色体上的位置是19q13.2。 Abstract: We have cloned a full?length novel zinc finger cDNA of the Krüppel family from human fetal brain cDNA library. Sequence analysis indicates that ZNF303 contains 7 highly conserved zinc finger motifs at the C-terminus and a KRAB(Krüppel-associated box)domain at the N-terminus of the deduced rotein.Hybridization using gene chip of hepatic cancer tissue demonstrates the expressive amount in hepatic cancer tissue is lower than control. We hypothecate that the decreasing of expression amount is related to the formation and metastasis of hepatic cancer.Finally,we show that ZNF303 maps on human chromosome 19q13.2 by radiation hybrid.     

KRAB型锌指蛋白(KZNF)的研究进展

KRAB型锌指蛋白是哺乳动物中最大的转录调控因子家族, 它的多数成员在基因组上成簇分布。其结构特征是N端含有KRAB结构域, C端含有多个C2H2型锌指结构。KRAB结构域为一蛋白质-蛋白质相互作用区, 可以与多种协同转录抑制因子和转录因子结合, 使KRAB型锌指蛋白作为转录因子和/或转录调控因子发挥依赖于DNA结合的转录抑制功能, 在胚胎发育、细胞分化、细胞转化及细胞周期的调控中发挥重要功能。     

KRAB型锌指蛋白的进化及在物种演化中的功能

C2H2型锌指蛋白家族是目前发现的哺乳动物中最大的转录/转录调控因子家族,由一小群古老的含有真核锌指结构的转录因子经过多次基因复制和功能分化演化而来。KRAB型锌指蛋白(KRAB-containing zinc finger proteins, KRAB-ZFPs)作为C2H2型锌指蛋白家族中最大的亚家族,最早出现在四足脊椎动物,并随物种的进化数量快速增长,在人类中占据C2H2型锌指蛋白的60%左右。在物种演化中,进化压力主要改变KRAB-ZFPs的DNA结合能力,而KRAB-ZFPs介导的转录抑制能力则稳定存在。同时,多种KRAB-ZFPs能够与KRAB相关蛋白1(KRAB-associated protein 1, KAP1)协同作用沉默哺乳动物中反转录元件的活性,并与之协同进化,严格限制反转录原件的跳跃能力。本文综述了KRAB-ZFPs的数量倍增、锌指结构的灵活多变、KRAB-ZFPs/KAP1的转录抑制能力和反转录元件的跳跃性在促进哺乳动物调控网络的差异、基因组稳定性的变化和物种进化中的作用,旨在进一步揭示KRAB-ZFPs在推动物种稳定演化中的特点和功能。