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人乙肝病毒增强子ⅡB1结合因子(hB1F)系Ftz—F1(NR5A)亚家族的新成员。经基因重组法将人hb1 fcDNA置于小鼠白蛋白增慢子/启动子序列下游构建成肝特异重组载体,通过原核显微注射将该载体导入小鼠受精卵原核,经注射且状态良好的卯回输至假孕母鼠输卯管。产下仔鼠经PCR和Southern blotting鉴定,同时RT—PCR和Western blotting分析转基因的表达。阳性Founder鼠与正常C57鼠交配以建立转基因纯系小鼠,F1代以PCR法鉴定。结果共获得4只PCR鉴定转基因阳性Founder鼠,其中一只同时经Southern blotting鉴定为阳性。RT—PCR和Western blotting结果显示,外源基因在转基因小鼠的肝组织成功表达。遗传学分析表明,转基因已整合入小鼠基因组并可稳定溃传。 相似文献
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目的:前期酵母双杂交实验中,我们以转录因子ZNF24的SCAN结构域为诱饵,筛选到的一个阳性克隆为原癌基因c-Myc,在此进一步验证ZNF24与c-Myc间的相互作用。方法:将ZNF24与c-Myc分别构建到p GEX-4T-2和pc DNA3.1表达载体上,利用GST-pulldown技术体外验证两者表达蛋白的相互作用。结果:电泳鉴定与测序分析表明目的基因克隆正确,载体构建成功;用GST-pulldown技术检测到ZNF24与c-Myc相互作用的蛋白条带。结论:GST-pulldown实验进一步表明ZNF24与c-Myc的相互作用,为验证ZNF24与c-Myc之间存在相互作用奠定了基础。 相似文献
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锌指蛋白基因ZNF191 总被引:10,自引:0,他引:10
锌指是Miller等人 (1 985年 )最初在爪蟾转录因子TF IIIA中发现的一种特殊结构 ,即在蛋白质一级结构上 ,存在着C X2 4 C X12 H X3 H的序列单元 (C :半胱氨酸 ;H :组氨酸 ;X :任意氨基酸 ) ,其中的 2个半胱氨酸和 2个组氨酸通过配位键与一个锌离子结合 ,成手指状结构 ,这类序列单元被称为锌指模体 ,含有锌指模体的蛋白质称为锌指蛋白。研究表明 ,锌指蛋白作为一类转录因子而广泛地参与基因表达的调控。这种调控作用主要是通过它与特定的DNA序列 (如启动子 )和蛋白质的结合而实现的。锌指蛋白与胚胎发育和细胞分化… 相似文献
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小鼠类Krueppel锌指蛋白基因ZF-12为人的类Krueppel锌指蛋白基因ZNF191的同源基因,它们都编码368个氨基酸残基,N端存在SCAN结构域,C端有4个连续的锌指模体,最近的研究表明ZNF191是肝癌发生的相关基因,我们以人锌指蛋白基因ZNF191的vDNA为探针,筛选小鼠λ噬菌体基因组文库,意外地获得了1个与小鼠锌指蛋白基因ZF-12相类似的基因,多种组织的RT-PCR和启动子序列分析,暗示该基因不表达,且该基因无内含子,与ZF-12高度相似,存在突变,暗示其为与ZF-12相关的假基因序列,经查新证实它为新的序列后,以ZF12p(ZF-12pseudogene)命名在GenBank登录(AY040222)。查录GenBank的人类基因组库以及Southern结果显示人类基因组中无ZNF191假基因序列,ZF12p与ZF-12高度相似,暗示ZF12p在进化过程中产生的时间较晚,这对研究锌指蛋白基因ZF-12的突变与进化具有重要的意义。 相似文献
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小鼠锌指蛋白基因ZF-12的克隆与基因结构以及5′端启动子活性的分析 总被引:3,自引:0,他引:3
人类锌指蛋白ZNF191为类krueppel转录因子,其可能与神经精神病、心血管疾病和肝癌等疾病的发生或发展有关,为了采用基因敲除模型来探讨它的生理功能,克隆和定位其在模式生物(小鼠)中的同源基因,并阐明其结构特征是必需的。通过筛选小鼠λ噬菌体基因组文库,获得了它在小鼠中的同源基因ZF-12基因组全长片段。序列分析表明:该基因含有4个外显子和3个内含子,内含子都遵循GT/AG的剪接模式;第91密码子处存在单核苷酸多态性;可能存在2种大小不同的3′端的非翻译区(3′-UTR);与锌指蛋白基因Zfp-35相连锁,可将其定位于18号染色体的B3-C带上或附近;5′端上游存在1个约250bp高度富含GC的启动子序列。ZF-12基因的5′端系列缺失荧光素酶基因报告载体的瞬时转染实验表明:其上游序列(-762~ 70bp)具有启动子转录活性,在更上游的序列(-824~-762bp)上可能存在负调控元件。这项研究结果为进一步的基因敲除研究奠定了基础。 相似文献
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一个与小鼠锌指蛋白基因ZF-12相关的假基因的克隆和鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
小鼠类Krüppel锌指蛋白基因ZF-12为人的类Krüppel锌指蛋白基因ZNF191的同源基因,它们都编码368个氨基酸残基,N端存在SCAN结构域,C端有4个连续的锌指模体,最近的研究表明ZNF191是肝癌发生的相关基因。我们以人锌指蛋白基因ZNF191的cDNA为探针,筛选小鼠λ噬菌体基因组文库,意外地获得了1个与小鼠锌指蛋白基因ZF-12相类似的基因,多种组织的RT-PCR和启动子序列分析,暗示该基因不表达,且该基因无内含子,与ZF-12高度相似,存在突变,暗示其为与ZF-12相关的假基因序列,经查新证实它为新的序列后,以ZF12p(ZF-12 pseudogene)命名在GenBank登录(AY040222)。查寻GenBank的人类基因组库以及Southern结果显示人类基因组中无ZNF191假基因序列。ZF12p与ZF-12高度相似,暗示ZF12p在进化过程中产生的时间较晚,这对研究锌指蛋白基因ZF-12的突变与进化具有重要的意义。 相似文献
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