pCMV-BD-ZNF424和pCMV-Tag2-ZNF424缺失突变重组质粒的构建

锌指蛋白基因家族是人类最大的基因家族之一,目前已知的很多锌指蛋白成员都是转录调控因子.KRAB/C2H2型锌指蛋白是一类重要的转录因子,ZNF424是该亚家族的一个新成员.已经初步证明ZNF424具有转录激活作用,为了进一步研究ZNF424各结构域激活程度和在信号途径中的作用,设计出引物,以pCMVB-D-ZNF424重组质粒作为模板,PCR扩增出含ZNF424基因的KRAB、LINK和ZNF的3个含不同结构域的区域,克隆到pMD18T-载体,然后内切酶切下各目的片段,再构建出pCMVB-DK-RAB、pCMVB-DL-INK、pCMVB-D-ZNF、pCMVT-ag2BK-RAB、pCMVT-ag2BL-INK和pCMVT-ag2CZ-NF共6个缺失突变重组质粒,为进一步研究ZNF424基因功能奠定基础.     

赖氨酰氧化酶与人类疾病

赖氨酰氧化酶(lysyl oxidases,LOXs)是一种能够催化细胞外基质蛋白(如胶原和弹性蛋白)交叉连接的酶类,这一功能使其在组织的稳定、重塑和伤口愈合中发挥重要作用.随着研究的不断深入,LOXs在细胞增殖、细胞趋化以及肿瘤发生等过程中也彰显出十分关键的作用.研究发现,一些诸如结缔组织病、剥脱综合症、铜代谢障碍性疾病及盆腔器官脱垂和骨疾等疾病的发生与LOXs有很大关系.综述了LOXs的生物合成、结构特点、多功能性以及与人类疾病的关系.     

基因表达转录分析中内参基因的选择

目前基因表达的转录分析多采用单一看家基因作为内参来校正目标基因的表达量.实验中以人肝癌BEL-7402细胞为研究对象,应用实时荧光定量PCR技术,观察了新型三肽化合物酪丝缬肽作用后RPL13A、UBC、EIF4A、B2M、GAPDH和ACTB共6个看家基因mRNA水平的表达情况.经过geNorm程序统计学分析处理,结果表明,这6个看家基因的表达存在差异,确定了RPL13A、UBC2个看家基因用于校正目标基因的表达量.基因表达转录分析中内参基因选择的必要性在实验中得以证明,更重要的是为各种实验因素影响下(尤其是新物质作用下)内参基因的选择介绍和提供了一种行之有效的方法.     

心肌缺血后处理中一氧化氮的变化

目的:研究心肌缺血再灌注与心肌缺血后处理两种因素下大鼠心肌一氧化氮(NO)的含量与一氧化氮合酶(niricoxide synthase,Nos)活性的关系.方法:采用健康雄性Wistar大鼠(n=12)建立离体心肌缺血再灌注损伤模型.采用高效液相色谱仪(HPLC)直接测定心脏灌流液中NO的含量.采用高效液相色谱仪(HPLC)测定瓜氨酸生成量计算心肌中NOS活性.使用紫外分光光度法测定乳酸脱氢酶(LDH)活性.使用染色法计算心肌梗死面积.结果:平衡末,对照组NO含量与实验组NO含量差异无统计学意义(P>0.05);对照组平衡末NO含量与再灌注后NO含量差异无统计学意义(P>0.05);对照组再灌注后NO含量与实验组后处理后NO含量相比差异有统计学意义(P<0.05);实验组后处理后NO含量与平衡末NO含量相比显著升高(P<0.05).实验组后处理后心肌组织NOS活性明显高于对照组(P<0.05).实验组心肌释放的LDH活性显著低于对照组(P<0.01).与对照组比较,缺血后处理可减少心肌梗死面积(P<0.05).结论:缺血后处理时心肌细胞中NO生成量与NOS活性普遍高于缺血再灌注时.