用终止剂改进超氧化物歧化酶邻苯三酚测活法

以二硫苏糖醇(DTT)或L-抗坏血酸(Vit C)为终止剂改进的经典邻苯三酚法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性.反应体系:50mmol/L邻苯三酚,pH8.20,总体积9ml,25℃,加一滴DTT(100mmol/L)或Vit C(5%),约50μl,终止自氧化反应.终止后,反应体系的420nm光吸收在lh内保持恒定.终止剂法的邻苯三酚自氧化率及酶活测定灵敏度与经典法相近,一个酶活单位相当于纯SOD 100μg/L.     

超氧化物歧化酶两种邻苯三酚自氧化测定活力方法的比较

在同一反应条件下,以酵母SOD为原料,对2种邻苯三酚自氧化测定SOD的方法进行了比较,实验结果表明325 nm法测定的酶活力单位与420 nm法测定的酶活力单位的比值约为2.7,考察了不同浓度邻苯三酚对SOD活力的影响。     

邻苯三酚-碳酸盐缓冲液化学发光体系的研究

用化学发光法研究了邻苯三酚碱性自氧化产生O₂^-_·的发光行为.通过对测定条件的研究, 得出最佳测定方案.改进后的方法不需使用发光剂Luminol, 所用试剂价廉易得, 且方法稳定, 重现性好.此法灵敏度远高于邻苯三酚自氧化的其他文献报道法.     

中枢神经系统靶向性Mn-SOD的克隆和在大肠杆菌中的表达研究

靶向性超氧化物歧化酶(SOD)是治疗氧自由基引起神经细胞损伤所致疾病等的有效途径.将破伤风毒素C部分（tetanus toxin fragment C,TTC）基因与编码Mn-SOD的cDNA融合克隆进pET-22b(+)载体,1 mmol/L异丙基-D-硫代半乳糖（IPTG）诱导在大肠杆菌中表达.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)图谱可见约71 ku有表达产物条带,与理论计算值相符;蛋白质印迹（Western blot）分析显示,表达产物与抗Mn-SOD及破伤风毒素的多抗有免疫反应,而且表达产物用邻苯三酚自氧化法测定具有SOD活性.融合蛋白可作为有效的试剂靶向性输送Mn-SOD到神经元细胞,这为进一步研究靶向性SOD的治疗中枢神经系统的相关疾病提供了基础.     

橙皮苷对小鼠抗氧化作用及抗氧化酶基因表达的影响

目的探讨橙皮苷(HDN)对机体抗氧化作用的影响。方法采用分光光度法、邻苯三酚自氧化法和Fe2+-邻二氮菲法检测HDN体外清除自由基、抑制线粒体肿胀和红细胞氧化溶血;实验小鼠灌服不同浓度HDN(0、80、160、320 mg/kg)连续12 d,ELISA和分光光度法检测小鼠组织中MDA含量,抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-PX)活力,RT-PCR技术分析抗氧化物酶mRNA表达水平。结果与对照组比较,HDN组自由基(·OH、O2-·、DPPH·)清除率明显提高,小鼠红细胞体外氧化溶血和线粒体肿胀显著降低;小鼠组织及血清中MDA含量降低,抗氧化酶SOD、CAT、GSH-PX活力明显高于对照组,组织中抗氧化酶mRNA(SOD、CAT、GSH-PX)表达上调。结论 HDN能够清除自由基,降低自由基引起的细胞氧化损伤,抑制过氧化物生成,上调抗氧化酶基因表达及提高酶活力,呈现良好的抗氧化作用。     

一种小白菜叶细胞溶质铜锌超氧化物歧化酶的纯化和性质研究

<正> 超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内重要的金属酶。有关植物SOD同工酶的研究文献报道较多,但对酶的纯化及性质研究报道较少。本文简要报道一种小白菜叶细胞溶质Cu·Zn-SOD的纯化及其性质。 材料为小白菜(Brassica chinensis L.),品种上海青。酶活力测定用本室改良的邻苯三酚自氧化法。蛋白质测定按文献[2]进行。酶纯化方法参照文献[3]。酶活性染色参照文     

红车轴草总黄酮体外清除自由基作用的研究

通过Fenton 反应产生·OH,邻苯三酚自氧化产生O·-2模型,研究了红车轴草总黄酮体外清除自由基的作用.结果显示红车轴草总黄酮在6.25～200 mg/mL范围内具有清除Fenton 反应产生·OH的作用,在6.25～100 mg/mL浓度范围内对邻苯三酚自氧化产生的O·-2具有清除作用,二者均呈明显的量效关系,对·OH和O·-2半数清除浓度分别为44.06 和54.57 mg/mL.     

Alcalase碱性蛋白酶对中华稻蝗蛋白水解条件的研究

本试验采用Alcalase碱性蛋白酶对中华稻蝗蛋白进行水解,研究其蛋白酶解条件和酶解物的抗氧化性(用抑制邻苯三酚自氧化率来表示).结果表明,实验室最佳酶解条件为:底物浓度1%,pH值8.0,温度55℃,水解时间4 h,加酶量(V/V,%)为10%.在此条件下其酶解物具有明显的抗氧化活性,对邻苯三酚自氧化的抑制率可达40%,水解度为51%.     

啤酒酵母多糖的提纯、化学组成及抗氧化性质鉴定*

以啤酒酵母为材料 ,通过化学抽提法得到水溶性提取物Ma1 ;经薄层层析分析表明 :Ma1主要含有甘露糖 ;经检测分析 ,Ma1含有蛋白成分 ,为蛋白多糖 ;氨基酸自动分析仪分析表明Mal含有多种氨基酸 ,包括 7种必需氨基酸和 9种非必需氨基酸 ;邻苯三酚自氧化法检测发现多糖能够抑制邻苯三酚自氧化 ,具有抗氧化能力。     

石榴叶总黄酮提取工艺及体外抗氧化性研究

目的:研究石榴叶总黄酮的提取工艺及体外抗氧化性.方法:利用L9(34)正交设计实验,探讨了提取条件对石榴叶中总黄酮提取量的影响,并采用Fenton体系和邻苯三酚自氧化法评价了该提取物的体外抗氧化能力.结果:最佳提取工艺条件为:80%的乙醇、料液比为1:15、提取温度为60℃、提取时问4h,即A3B1 C3D2,此条件下提取的总黄酮含量为0.4281%;石榴叶总黄酮清除·OH和抑制邻苯三酚自氧化能力均略高于VC.结论:实验表明石榴叶总黄酮具有较强的体外抗氧化活性.     

莲子Fe-SOD的提取及其耐高温能力的初探

通过对莲子中超氧化物歧化酶(Super Oxide Dimutase,SOD)进行分离提纯,证实其是Fe-SOD,并观察Fe-SOD的耐热性,为SOD的提取和应用开辟了新的思路【。方法】以热变性与有机溶剂沉淀联合法分离提纯莲子Fe-SOD;利用Fe-SOD活性受H2O2的抑制而不受氰化物的抑制的特性来鉴定;设置不同的温度观察提取额莲子SOD的耐热性。【结果】莲子提取酶液活性为90.522U/ml,SOD酶液对邻苯三酚自氧化的抑制率为96.3%。莲子SOD活性受H2O2的抑制而不受氰化物的抑制。在75℃时保温30min后,酶活力仍然保留60%以上,在100℃保温30min时酶活力保留35%。【结论】以热变性与有机溶剂沉淀联合法分离提纯莲子SOD并鉴定其为耐热性Fe-SOD。     

地鳖多糖提取物的体内外抗氧化作用

目的研究地鳖多糖提取物体内外抗氧化作用。方法体外试验采用分光光度法、邻苯三酚自氧化法和Fe2+-邻二氮菲法分别检测地鳖多糖对二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)、超氧阴离子自由基(O-2·)和羟自由基(·OH)的清除,检测体外红细胞氧化溶血和肝线粒体肿胀程度。体内试验小鼠连续灌胃不同剂量(0、40、80、160 mg/kg)地鳖多糖提取物20 d,硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定小鼠组织中丙二醛(MDA)含量,分光光度法检测抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活力。结果与对照组比较,地鳖多糖组对自由基清除率随多糖浓度升高而显著提高;体外红细胞氧化溶血和线粒体肿胀显著降低。多糖组小鼠肝肾中MDA含量降低,SOD、CAT、GSH-Px抗氧化酶活力提高并明显高于对照组。结论地鳖多糖提取物能够清除自由基,降低自由基引起细胞氧化损伤,抑制组织中过氧化物生成,提高抗氧化酶活力,具有显著的体内外抗氧化作用。     

真菌菌丝发酵液抗氧化活性检测

目的检测长期保存的食用真菌发酵液中超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。方法选取3株经实验室长期保存的食用真菌发酵液,采用邻苯三酚自氧化法测SOD酶活性;用二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)直接法测GSH-Px酶活性。结果3种发酵液中SOD酶活性和GSH-Px酶活性均为阳性。结论食用菌发酵液中不仅测得SOD,还含有GSH-Px,而且经长期保存仍有很强的酶活性。     

冬葵果多糖的抗氧化作用研究

研究冬葵果多糖(Fructus Malvae polysaccharides,FMP)对氧自由基的清除作用及对脂质过氧化的抑制作用。采用分光光度法测定FMP清除Fenton体系产生的羟自由基(.OH)、邻苯三酚自氧化体系产生的超氧阴离子自由基(O2-.)的能力及评价对Fe(Ⅱ)-H2O2体系(.OH)诱导的脂质过氧化终产物丙二醛(MDA)的抑制作用。结果显示,在化学模拟体系中,冬葵果多糖对.OH具有很强的清除作用,与VC比较达到显著水平(P<0.01),对O2-.的清除能力与VC相当。在体外,多糖浓度达到1.72 mg/mL可明显降低MDA的含量,与空白液比较达到显著水平(P<0.01)。以上结果表明,FMP具有明显的抗氧化活性。     

啤酒酵母多糖的提纯、化学组成及抗氧化性质鉴定

以啤酒酵母为材料,通过化学抽提法得到水溶性提取物Mal;经薄层层析分析表明：Mal主要含有甘露糖;经检测分析,Mal含有蛋白成分,为蛋白多糖;氨基酸自动分析仪分析表明Mal含有多种氨基酸,包括7种必需氨基酸和9种非必需氨基酸;邻苯三酚自氧化法检测发现多糖能够抑制邻苯三酚自氧化,具有抗氧化能力。     

水母胶原蛋白抗氧化活性研究

提取水母胶原蛋白,观察其体内外抗氧化作用。体外采用邻苯三酚自氧化法观察水母胶原蛋白对超氧阴离子(·O2-)的清除作用,采用Fenton反应体系观察对羟自由基(·OH)的清除作用;体内观察水母胶原蛋白对小鼠血清、肝脏、大脑中超氧化物歧比酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT),丙二醛(MDA)含量的影响。结果表明:水母胶原蛋白对·O2-、·OH具有良好的清除作用,呈一定的剂量依赖关系,能明显提高小鼠血清、肝脏、大脑中的SOD、CAT含量,能在一定程度上降低血清、肝脏、大脑中的MDA水平。因此,水母胶原蛋白具有显著的抗氧化生物活性。     

不同种竹笋及笋壳提取物抗氧化活性的研究

采用醇提法,分别对毛竹、麻竹、雷竹的竹笋及笋壳进行醇提,并对醇提物进行抗氧化活性测定.对DPPH·、OH·、O2-·自由基的清除作用分别通过分光光度法、邻二氮菲法、邻苯三酚自氧化法进行测定,相对还原能力、总抗氧化能力的测定则采用普兰士蓝反应法和FRAP法.结果表明:不同种的竹笋及笋壳的醇提物含量与自由基清除能力、相对还...     

超氧歧化酶(SOD)对人红细胞膜的保护作用

前文曾报道,红细胞膜经外源O₂^-_·自由基(碱性条件下,邻苯三酚自氧化产生)处理后有明显损伤作用。在此基础上,本文研究猪红细胞SOD对人红细胞膜氧化损伤的保护作用。结果表明,外源SOD对人红细胞膜有明显保护作用,表现为膜流动性和膜重封闭能力保持正常水平,膜蛋白交联作用有显著减小。     

从海洋生物鲎血中提取超氧化物歧化酶及其抗菌作用的研究

目的 综合利用鲎试剂生产的废料血浆提取超氧化物歧化酶 (Superoxide dismutase,SOD),探讨鲎血SOD对耐甲氧西林金色葡萄球菌(MRSA)、对甲氧西林敏感金色葡萄球菌(MSSA)、野生型绿脓杆菌(PAO1)、大肠杆菌(E.coli)的抑菌作用.方法 采用离心分离、丙酮沉淀、热变性去杂蛋白的方法从生产鲎试剂废料血浆中提取SOD,然后把SOD加入菌液培养,24 h后观察结果.结果 SOD对耐甲氧西林金色葡萄球菌、对甲氧西林敏感金色葡萄球菌、野生型绿脓杆菌、大肠杆菌的最低抑菌浓度分别为20.02,40.05,20.02,20.02 μg/ml.结论 本方法可成功地从生产鲎试剂废料血浆中提取得到SOD粗品,实验表明鲎血SOD具有抗菌作用.     

丰城鸡血藤黄酮提取物清除自由基活性研究

本文考察了丰城鸡血藤不同提取物对.DPPH、O2-.和.OH清除活性,分别采用紫外可见分光光度法、邻苯三酚自氧化法和Fenton反应-邻菲罗啉显色法,测定受试物对.DPPH、O2-.和.OH的清除活性。实验结果表明受试物对.DPPH清除活性较强,对O2-.的清除活性次之,对.OH的清除活性较弱。丰城鸡血藤不同提取物黄酮组成和含量存在差异,其自由基清除活性也有所不同,提示它们的自由基清除作用机制和生物活性可能存在差异。