IL-2与金黄色葡萄球菌肠毒素A和B融合基因的克隆及表达

目的：IL-2与金黄色葡萄球菌肠毒素A和B融合基因的克隆及表达。方法：分别在金黄色葡萄球菌肠毒素A227Ala、B基因的两端克隆上两个酶切点Hind Ⅲ,Kpn Ⅰ。将IL-2基因突变,设计一段linker使之分别与SEA227Ala和SEB相连并克隆到PET表达载体中,在大肠杆菌DH5a（DE3）-Pass中表达。结果：表达的蛋白占总蛋白15%。结论：IL-2与金黄色葡萄球菌肠毒素A和B融合蛋白能在大肠杆菌中有效表达。     

金黄色葡萄球菌肠毒素A Asp227Ala基因的克隆及表达

目的：金黄色葡萄球菌肠毒素A Asp227ala基因的克隆及表达。方法：利用错配PCR方法,从含有金黄色葡萄球菌肠毒素A（Staphylococcal enterotoxn A,SEA)基因的质粒中扩增出约720bp的DNA片段,将其克隆到表达载体7ZTS中,并转化于JM109（DE3）。结果：重组质粒的测序结果表明,它含有702bp（不包括N端72bp的信号肽编码区）,其核苷酸序列与文献报道完全一致,推导的氨基酸序列显示227位的天冬氨酸已突变为丙氨酸。结论：该基因所表达的蛋白为可溶性蛋白,表达量占总蛋白51.5%。表达的蛋白与天然肠毒素A产生的抗体能发生凝集作用,具有与天然SEA类同的抗原活性。     

超抗原SEA与抗黑色素瘤ScFv融合基因的构建及表达

采用酶切连接和重叠PCR连接两种方法将抗黑色素瘤单链抗体基因和去除N端信号肽的金黄色葡萄球菌肠毒素A基因进行融合,并将融合基因克隆于pET28a表达载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3)。用NiNTA系统对表达产物进行分离、纯化。MTT法检测融合蛋白对黑色素瘤细胞的体外抑制率。结果表明6HisScFvSEA融合蛋白可在E.coli BL21(DE3)中稳定表达,表达量占菌体蛋白的30%,主要以包涵体的形式存在。融合蛋白可通过激活效应细胞对表达相关抗原的黑色素瘤细胞发挥抑制作用。     

金黄色葡萄球菌肠毒素B基因的克隆和在大肠杆菌中高效表达

利用PCR方法从金黄色葡萄球菌TSTw基因组DNA中扩增出约700bp的DNA片段,将之克隆到pGEM7Zf(+)载体上并转化大肠杆菌 DH5α菌株。重组质粒的测序结果表明克隆到了seb基因,它含有717bp（不包括N端81bp的信号肽编码区）,其核苷酸序列与文献报道完全一致。将其连接于表达载体7ZTS上,转化到大肠杆菌JM109（DE3）内。表达的SEB占总蛋白33.5%。      

纳豆激酶的研究与应用

纳豆激酶是一种枯草芽孢杆菌产生的丝氨酸蛋白酶 ,具有强烈的纤溶活性 ,有望开发成为新型口服溶栓药。综述了纳豆激酶的生化特性、生物学活性、结构与功能及开发应用前景等。     

长白蝮蛇类凝血酶基因的克隆及分析

从长白蝮蛇（Agkistrodon halys Ussuriensis)毒腺中抽提总RNA,采用RT－PCR扩增其类凝血酶基因,经全序列测定,类凝血酶基因Ussurin全长为708个核苷酸,即编码236个氨基酸;根据同源性,推测它的活性中心为His^43,Asp^88和Ser^182;二硫键为Cys^7-Cys^141,Cys^28-Cys^44,Cys^76-Cys^234,Cys^120-Cys^188,Cys^152-Cys^167和Cys^178-Cys^203。该蛇毒类凝血酶cDNA序列及推导的氨基酸序列均为首次报道。     

利用正癸烷发酵产生癸二酸的酵母19—2菌株的鉴定

对分离筛选所得的产酸较高,酸质较纯的酵母19—2菌株进行了鉴定,根据其具有较发达的假菌丝,不产生子囊孢子,利用葡萄糖,赤藓醇,不同化硝酸盐;冻化牛奶等主要特征,定为解脂假丝酵母(Candidalipolytica)。该菌对直链烷烃能很好利用,具有较强的趋化性。酵母19—2菌株是一株利用石油正癸烷产生癸二酸的优良菌株。本文报道了对酵母19—2菌株的鉴定     

利福霉素生产菌产生钝化RifSV物质的分离及性质研究

利福霉素ＳＶ（简称ＲｉｆＳＶ）生产菌──地中海拟无枝菌酸菌在生物合成ＲｉｆＳＶ过程中,产生一种能钝化自身产物（ＲｉｆＳＶ）的物质．实验证实,该物质是由谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸及缬氨酸等１４种常见氨基酸组成的蛋白质．分子量（ＭＷ）约２．５×１０４Ｄ,等电点（ＰＩ）为５．７—６．１．在１００℃下加热１０ｍｉｎ,其活性丧失．作用于ＲｉｆＳＶ的最适ｐＨ值范围为７．４—８．６,最适温度为２９℃,初步证实该物质是一种酶（暂称利福霉素钝化酶）     

用改进的重叠PCR引入血管内皮生长因子基因突变

血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）的PCR产物克隆于T载体上,经转化JM109感受态菌株后,随机挑取8个白斑菌落,混合后制成混合模板.采用3条引物,做两轮重叠PCR反应,获得了VEGF的突变基因,经PCR鉴定,酶切鉴定和测序分析表明所得基因为目的产物.实践证明这种突变方法简单快速,为下一步实验大量引入突变奠定了实验基础.     

金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的克隆

利用PCR方法从金葡菌基因组DNA中扩增出约 80 0bp的DNA片段 ,将之克隆到pUC19 T载体上并转化E .coliDH5α菌株。重组质粒的测序结果表明 ,克隆到了sea基因 ,它含有 774bp的阅读框架 (包括N端 72bp的信号肽编码区 ) ,其核苷酸序列与文献报道完全一致。