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金黄色葡萄球菌肠毒素A Asp227Ala基因的克隆及表达 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:金黄色葡萄球菌肠毒素A Asp227ala基因的克隆及表达。方法:利用错配PCR方法,从含有金黄色葡萄球菌肠毒素A(Staphylococcal enterotoxn A,SEA)基因的质粒中扩增出约720bp的DNA片段,将其克隆到表达载体7ZTS中,并转化于JM109(DE3)。结果:重组质粒的测序结果表明,它含有702bp(不包括N端72bp的信号肽编码区),其核苷酸序列与文献报道完全一致,推导的氨基酸序列显示227位的天冬氨酸已突变为丙氨酸。结论:该基因所表达的蛋白为可溶性蛋白,表达量占总蛋白51.5%。表达的蛋白与天然肠毒素A产生的抗体能发生凝集作用,具有与天然SEA类同的抗原活性。 相似文献
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IL-2与金黄色葡萄球菌肠毒素A和B融合基因的克隆及表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:IL-2与金黄色葡萄球菌肠毒素A和B融合基因的克隆及表达。方法:分别在金黄色葡萄球菌肠毒素A227Ala、B基因的两端克隆上两个酶切点Hind Ⅲ,Kpn Ⅰ。将IL-2基因突变,设计一段linker使之分别与SEA227Ala和SEB相连并克隆到PET表达载体中,在大肠杆菌DH5a(DE3)-Pass中表达。结果:表达的蛋白占总蛋白15%。结论:IL-2与金黄色葡萄球菌肠毒素A和B融合蛋白能在大肠杆菌中有效表达。 相似文献
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治疗糖尿病的短肽药物GLP-1在毕赤酵母中的分泌表达 总被引:1,自引:0,他引:1
利用毕赤酵母表达治疗糖尿病的短肽药物GLP-1(胰高血糖素样肽-1)。以pUC18GLP-1 为模板进行PCR,将获得的GLP-1基因片段克隆到pMD18T-vector上,然后将SmaI和NotI双酶切获得的基因小片段插入到表达载体pPIC9上,完成表达载体pPIC9GLP-1的构建,SacI线性化重组质粒,通过醋酸锂转化法转化毕赤酵母GS115感受态细胞,成功构建了能够分泌抗二肽酶Ⅳ降解的长效促胰岛素激素的毕赤酵母工程菌株。结果表明毕赤酵母6号菌株的GLP-1分泌表达产量最高可达 100.00 mg/L.实现了GLP-1在毕赤酵母中的表达,为进一步开发治疗糖尿病新型短肽药物的研究奠定了基础。 相似文献
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金黄色葡萄球菌肠毒素B用于肿瘤治疗的研究现状 总被引:2,自引:0,他引:2
自从 195 4年发现肠毒素B(SEB)以来 ,人们对它的研究就一直没有停止。随着对治疗恶性肿瘤药物研究的进展 ,肠毒素B逐渐成为人们注意的焦点。肠毒素B作为超抗原 ,激活T淋巴细胞 ,致使其释放细胞因子 ,从而达到杀伤肿瘤细胞的目的。不同细胞周期的T细胞对作为超抗原的肠毒素B的反应不同。AtsuoOchi等将肠毒素B和一功能蛋白Id通过化学方法连接在一起 ,在小鼠体内建立淋巴瘤系 38C13模型中应用 ,达到了很好的治疗效果。SEB 抗 Id结合物能够活化体内Vβ 8+T细胞、阻止体内Id +B淋巴瘤的过度增殖。LewisE等用黑色素瘤细胞在小鼠体内建立肿瘤模型 ,并用SEB和双特异性抗体bsAb研究了抗活体肿瘤的效果。BethA .Pulaski建立了缺少免疫原性鼠 4T1乳腺癌术后动物模型 ,研究了SEB和MHCⅡ ,CD80联合细胞免疫对乳腺癌的治疗。KyojiOka da等同时将SEB和西法安生应用于抗鼠骨肉瘤研究 ,发现抑瘤效果良好 ,而且会在转移病灶处引发细胞凋亡。 相似文献
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