蛇毒类凝血酶的基因工程研究进展

自 1 936年 Klobusitzki和 Konig首次从美洲矛头蝮蛇 ( Bothrops jararaca)毒中获得部分纯化的类凝血酶以来 ,迄今已发现 30多种蛇毒中含有类凝血酶组份 ,并有 2 0多种先后得到分离和纯化。尤其近年来基于有关蛇毒类凝血酶分子结构及酶学性质的研究成果 ,部分蛇毒类凝血酶已经作为治疗药物而广泛应用于临床 ,如国外的 Ancrod和Batroxobin蛇毒抗凝剂 ,国内的五步蛇毒去纤酶、东北白眉蝮蛇抗栓酶 (清栓酶 )、江浙蝮蛇抗栓酶等已广泛用于临床治疗脑血栓形成、脉管炎、冠心病、心肌梗死 ,也有用于治疗癌痛综合症 [1]。但目前有关蛇毒类凝血酶…     

改造稀有密码子提高SEA蛋白表达量

利用重叠PCR技术突变了sea基因上一个稀有密码子簇,将此段中稀有密码子全部更换成E.coli最常用密码子,得到sea^m。将sea和sea^m分别克隆于7ZTS表达载体上,并转化JM109（DE3）菌株。结果表明,sea基因的表达十分微弱,而sea^m基因的表达量十分高,约占菌体总蛋白的15 ％。表达产物在体内具有一定的抗肿瘤活性。     

金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的克隆

利用PCR方法从金葡菌基因组DNA中扩增出约 80 0bp的DNA片段 ,将之克隆到pUC19 T载体上并转化E .coliDH5α菌株。重组质粒的测序结果表明 ,克隆到了sea基因 ,它含有 774bp的阅读框架 (包括N端 72bp的信号肽编码区 ) ,其核苷酸序列与文献报道完全一致。     

D2-4放线菌抗真菌病害活性成分研究

从长白山森林土壤中分离的放线菌D2 4产生的抗生素对蕃茄灰霉病等蔬菜及经济作物的某些真菌病害有很好的防治效果。通过离子交换和吸附层析对抗生素进行了分离纯化。此抗生素为一种弱碱性水溶性抗生素 ,在酸性和中性条件下稳定 ,在碱性条件下不稳定 ,温度耐受性较强 ,在适宜pH条件下 ,1 0 0℃处理0 .5h ,其活性基本不变。     

蛇腐皮病的病原特性及其防治方法的研究

目的：对广西驯养珍稀蛇类腐皮病病原菌的特性进行研究,并对疾病有效的防治措施进行探索。方法：对蛇类腐皮病的5种主要病原菌进行药敏感试验,小白鼠接种试验、本动物回归试验,常用消毒剂的体外杀菌试验,以及对蛇场采场的综合性防治措施。结果：药敏试验表明：除绿脓杆菌外,其它蛇类腐皮病病原菌均对头孢唑啉有高度的敏感,对丁胺卡那霉素,10株菌均有不同程度的敏感,小白鼠接种试验表明：接种后24h内,变形杆菌、绿脓杆菌和腐败假单胞杆菌对小白鼠致死率为100％（各为4／4）,雷极普鲁威登斯菌致死率为25％（1／4）,金黄色葡萄球菌致死率为0％（0／4）;本动物回归试验表明：5种主要病原菌在皮肤创口接种后20天内,均可诱发腐皮病,从皮肤化脓灶及尾血均分别分离到接种菌;常用消毒剂体外抑菌试验表明,百毒杀、来苏儿、新洁尔灭对10株细菌的杀菌率均在99．9％以上,特别是百毒杀低浓度下杀菌效果尤为明显;蛇场采取综合性防治措施后,蛇腐皮病发病率由20％减少到10％以下,死亡率由10％减少到5％以下。结论：本研究的结果证明,蛇腐皮病的主要病原是变形杆菌、绿脓杆菌、腐败假单胞菌、协极普鲁威登斯菌、金黄色葡萄球菌;5种病原菌的抗药性均比较强,仅对丁胺卡那霉素、头孢唑啉有广泛的敏感性,丁胺卡那霉素、头孢唑啉为治疗蛇腐皮病的首选药物。百毒杀、来苏儿、新洁尔可作为防治蛇腐皮病的消毒剂。此外还需要采用取综合性措施才能有效地控制蛇腐皮病的发生及危害。     

长白山北坡自然保护区森林土壤微生物生态分布及其生化特性的研究

本文研究了长白山北坡自然保护区森林土壤微生物的生态分布和生化特性。土壤微生物的垂直分布与林型之间有着下列相关性:(1)阔叶林和针阔混交林下土壤中细菌的数量比针叶林下多;(2)不同土类中,放线菌的分布随海拔上升而减少;(3)亚高山针叶混交林下土壤中真菌数量很多。不同林型下土壤酶活性、内源呼吸、氧化代谢能力和土壤有机质中中性糖、氨基糖和糖醛酸的分布有很大差异,以阔叶林和针阔混交林下土壤中为最高,针叶林下土壤中为最低。针叶混交林下土壤中生化活性随阔叶树种增加而提高。不同海拔、不同植被和不同土类下,芽孢杆菌属、放线菌和真菌的生态分布及其种的组合不同。芽孢杆菌属的优势种和放线菌、真菌优势属的组成也不同。不同林型下优势种的组成与水热条件、植物残体的组成及土壤有机质的分解过程密切相关。     

金黄色葡萄球菌肠毒素B用于肿瘤治疗的研究现状

自从 195 4年发现肠毒素B(SEB)以来 ,人们对它的研究就一直没有停止。随着对治疗恶性肿瘤药物研究的进展 ,肠毒素B逐渐成为人们注意的焦点。肠毒素B作为超抗原 ,激活T淋巴细胞 ,致使其释放细胞因子 ,从而达到杀伤肿瘤细胞的目的。不同细胞周期的T细胞对作为超抗原的肠毒素B的反应不同。AtsuoOchi等将肠毒素B和一功能蛋白Id通过化学方法连接在一起 ,在小鼠体内建立淋巴瘤系 38C13模型中应用 ,达到了很好的治疗效果。SEB 抗 Id结合物能够活化体内Vβ 8+T细胞、阻止体内Id +B淋巴瘤的过度增殖。LewisE等用黑色素瘤细胞在小鼠体内建立肿瘤模型 ,并用SEB和双特异性抗体bsAb研究了抗活体肿瘤的效果。BethA .Pulaski建立了缺少免疫原性鼠 4T1乳腺癌术后动物模型 ,研究了SEB和MHCⅡ ,CD80联合细胞免疫对乳腺癌的治疗。KyojiOka da等同时将SEB和西法安生应用于抗鼠骨肉瘤研究 ,发现抑瘤效果良好 ,而且会在转移病灶处引发细胞凋亡。     

白喉毒素越膜机理研究进展

白喉毒素与细胞膜上的受体结合后,在受体个导的内吞作用下进入胞内体。综述了20世纪90年代后期至今,有关白喉毒素在胞内体的酸性环境中的特性研究。在酸性环境下,白喉毒素发生变构,T区疏水基团暴露并插入膜中,形成粘性孔道。T区形成的粘性孔道与白喉毒素结合,象分子伴侣一样,保持C区的线性结构,并使C区进入细胞膜。由于对白喉毒素作用机理的理解深入,逐渐产生一些新的应用前景。     

长白蝮蛇类凝血酶基因大肠杆菌表达研究

从长白蝮蛇克隆的类凝血酶Ussurin Cdna被克隆进入pET-32α（＋）中与5′端与Thx-Tag和6xHis相连的T7启动子下,构建成大肠杆菌表达载体pET-32α（＋）-Ussurin;再转化感受态E.coli BL（21）DE3细胞,构成表达工程菌株;于IPTG诱导下表达,在细胞质中产生约占细胞质总蛋白10％的具有生物活性的Ussurin。     

用裂解气相色谱法鉴定十种固氮菌的探讨

裂解气相色谱法是将微生物的营养细胞在惰性环境中迅速加热,使构成细胞的大分子化学物质在瞬间被裂解成小分子碎片并气化。将这些气化了的裂解产物经过气相色谱柱进行分离,从而得到每种微生物组分所特有的“指纹图”。由于裂解产物的组成及其相对含量与被测物质的结构有一定对应关系,因此可做为鉴别微生物种类的一种依据。用裂解气相色谱法鉴定微生物,是六十年代出现的一项不断发展着的微生物鉴定技术。由于这一方法具有快速、灵敏等特性使微生物鉴定技术向自动化、电子计算