SARS病毒核蛋白基因的克隆及其表达研究

从一例输入性传染性非典型性肺炎病人血清中提取病毒RNA,通过RT-PCR方法扩增出SARS病毒核蛋白基因片段,克隆入质粒载体pUCm-T后,进行核苷酸序列的测定及分析,与已公布的SARS病毒基因序列进行比较,证实为SARS冠状病毒核蛋白基因.为了解该病毒核蛋白的抗原特性,将核蛋白基因插入表达载体,构建重组质粒pET28a-SN,转导大肠杆菌BL21(DE3)后,加IPTG诱导表达.产物经SDS-PAGE电泳分析,表达出相对分子量约为50kDa的蛋白,占整个菌体的45%左右.Western-blot分析表明,表达产物仅与SARS阳性病人血清起反应,而与正常血清不起反应.间接ELISA免疫检测,抗原滴度达112500.表明表达的核蛋白为SARS特异性抗原,这为SARS病毒的诊断试剂的研制提供了方便而安全的抗原来源.     

SARS病毒核蛋白基因的克隆及其表达研究

从一例输入性传染性非典型性肺炎病人血清中提取病毒RNA,通过RT—PCR方法扩增出SARS病毒核蛋白基因片段,克隆入质粒载体pUCm—T后,进行核苷酸序列的测定及分析,与已公布的SARS病毒基因序列进行比较,证实为SARS冠状病毒核蛋白基因。为了解该病毒核蛋白的抗原特性,将核蛋白基因插入表达载体,构建重组质粒pET28a—SN,转导大肠杆菌BL21(DE3)后,加IPTG诱导表达。产物经SDS—PAGE电泳分析,表达出相对分子量约为50kDa的蛋白,占整个菌体的45％左右。Westem—blot分析表明,表达产物仅与SARS阳性病人血清起反应,而与正常血清不起反应。间接ELISA免疫检测,抗原滴度达1：12500。表明表达的核蛋白为SARS特异性抗原,这为SARS病毒的诊断试剂的研制提供了方便而安全的抗原来源。     

流行性出血热灭活疫苗二针与三针接种效果的比较

本文研究人体接种流行性出血热(EHF)灭活疫苗总量为三毫升时,比较观察分三次接种和分二次接种的反应及免疫效果。试验分三组进行,第一组根据常规方法0、7、28天免疫三针,每针1毫升;第二组0、28天免疫二针,每针1.5毫升;第三组0、28天免疫二针,第一针2毫升,第二针1毫升。结果三组均未发生全身或局部的不良反应,末针15—30天,采血测定EHF中和抗体,阳转率分别为87.1％、79.4％和76.6％经统计处理三组无明显差别。     

浙江省SARS冠状病毒分离与系统进化树分析

从浙江省3例SARS患者中收集含漱液标本,经处理后接种Vero、RD、VeroE6和Hep-2细胞进行病毒分离,培养3d后在Vero和RD细胞中可观察到细胞病变。从细胞培养上清中提取病毒核酸,用SARS冠状病毒特异性引物进行RT-PCR,并经测序证实从3份临床样本中分离到2株SARS冠状病毒株。对其中1株病毒的基因组进行了全序列测定并作系统进化树分析显示浙汀省SARS冠状病毒株与新加坡2774株和台湾TW1株最为接近。     

浙江省SARS冠状病毒分离与系统进化树分析

从浙江省3例SARS患者中收集含漱液标本,经处理后接种Vero、RD、VeroE6和Hep-2细胞进行病毒分离,培养3d后在Vero和RD细胞中可观察到细胞病变.从细胞培养上清中提取病毒核酸,用SARS冠状病毒特异性引物进行RT-PCR,并经测序证实从3份临床样本中分离到2株SARS冠状病毒株.对其中1株病毒的基因组进行了全序列测定并作系统进化树分析显示浙江省SARS冠状病毒株与新加坡2774株和台湾TW1株最为接近.     

HBV感染中抗-(抗-HBs)独特型抗体的研究

1.75％聚乙二醇(MW6000)沉淀血清免疫复合物后,采用ELISA法检测上清中抗独特型抗体〔抗-(抗-HBs)〕。56例急性HBV感染患者血清IgM抗-(抗-HBs),第一周检出率最高(60.00％),1个月后大部分阴性,IgG抗-(抗-HBs)维持时间略长。IgM抗-(抗-HBs)较HBsAg/IgM和IgM抗-HBc消失早,将有利于急性HBV感染的诊断。27例CAH和29例CPH,IgM和IgG抗-(抗-HBs)阳性率约为38～52％,两型间无显著差异(p>0.5)。3例无症状HBsAg携带者和12例HBsAg血清疫苗接受者血清,抗-(抗-HBs)阴性。115例HBV感染者中,IgM抗-(抗-HBs)阳性者HBsAg阳性率(93.62)显著高于IgM抗-(抗-HBs)阴性者(52.31％),p<0.005;反之,HBsAg阳性血清IgM抗-(抗-HBs)阳性率(55.5S％)显著高于HBsAg阴性血清(9.68％),p<0.005;IgM抗-(抗-HBs)阳性和阴性血清的HBVDNA阳性率有显著差异(p<0.025),IgG反应到类似的结果。以上资料表明,抗-(抗-HBs)提示了一些HBV感染患者体内可能存在一种缺陷的反馈机制,导致抗-HBs产生不足而容许更活跃的HBV复制。本文证明了HBV感染患者血清中存在的抗-(抗-HBs)可能是共同决定簇“a”特异性的,还表明抗-HBs人抗-Id反应可能被纯化人血清HBsAg抑制,提示人抗-(抗-HBs)与抗-HBs结合的位点可能在HBsAg与抗-HBs结合位点内或在其附近,这和一些动物抗-(抗-HBs)的研究结果是一致的。