副溶血弧菌SH112株OmpA蛋白的高效表达及免疫学特性

【目的】我们前期研究表明副溶血弧菌SH112株的OmpA蛋白在该菌的致病过程中发挥重要作用,是亚单位疫苗研制的潜在靶标抗原。本研究进一步对ompA(VPA1186)基因进行克隆表达,并研究其免疫学特性。【方法】扩增去除信号肽序列的成熟外膜蛋白OmpA的基因片段,定向克隆至表达载体,基因测序后对其编码蛋白质进行生物信息学分析。重组蛋白His-OmpA经纯化后,免疫ICR小鼠制备鼠多抗血清。Western blotting检测该蛋白的免疫原性及鼠多抗血清的特异性。动物实验验证其免疫保护率。【结果】成功表达分子量约为40.0 kDa的重组蛋白His-OmpA。制备的鼠多抗血清ELISA效价可达1∶50000以上。Westernblotting检测结果显示,该血清可与His-OmpA蛋白、总外膜蛋白和全菌蛋白发生特异性反应,说明所表达的目的蛋白保持原蛋白的免疫原性。此外,该高免血清可与其他主要血清型的副溶血弧菌发生特异性交叉反应,而与其他非副溶血弧菌菌株无交叉反应,表明该血清特异性较高,且提示OmpA蛋白可能是副溶血弧菌属的共同保护性抗原。小鼠免疫保护实验结果表明,该蛋白可提供约35%的免疫保护率。【结论】OmpA蛋白可作为诊断副溶血弧菌感染和亚单位疫苗研制的靶蛋白,为进一步开展该蛋白的功能研究提供了参考。     

福建红曲醋中产酸菌株的分离及鉴定

添加含有高浓度乙醇的红曲酒至福建传统红曲醋醋母中富集产酸菌株,采用高浓度乙醇平板,依据溶解圈指标从福建传统红曲醋液体循环工艺样品中分离出7株产酸菌株。综合菌株形态、生理生化实验以及16S r DNA序列测定等信息,确定这7株菌株分类地位为变形菌门(Proteobacteria)α-变形菌纲(Alphaproteobacteria)红螺菌目(Rhodospirillales)醋酸菌科(Acetobacteraceae)葡糖酸醋杆菌属(Gluconacetobacter),其中菌株Y5052、Y5054、Y5072、Y5092鉴定为斯氏葡糖酸醋杆菌(Gluconacetobacter swingsii);菌株Y5032、Y5033、Y5071鉴定为欧洲葡糖酸醋杆菌(Gluconacetobacter europaeus)。测定这些菌株的产酸能力,菌株Y5052产酸量最低,7 d达15 g/L;菌株Y5054产酸能力最强,7 d产酸量达57.0 g/L。     

埃博拉病毒检测与防治技术在中国的专利申请状况分析

近年来,埃博拉病毒(EBOV)因其在非洲造成的严峻疫情而引起了广泛关注。本文对涉及埃博拉病毒检测与防治技术方面的在中国申请的国内外专利申请数量、年代分布、技术发展状况等信息进行分析,对国内埃博拉病毒检测、免疫、治疗相关专利技术进行简要总结,并对目前热点关注药物(jk-05,ZMapp,VSV-EBOV)专利申请信息进行比较概括,结果表明,我国申请人在提出的相关专利申请数量以及技术多样性上与国外申请人存在差距,为国内科研人员提供了相关技术领域参考。     

在课堂教学中努力还原科学探究的过程

当前 ,高中生物学新教材的实施步骤已在全国范围内铺开 ,这些都旨在进一步推进中学素质教育 ,培养学生的创新精神和实践能力。新形势下 ,转变课堂教学模式和教学理念是教育工作者必须考虑的问题。笔者认为 :课堂中注重科学探究过程的教学对培养学生的创新精神和实践能力很有帮助。现在 ,教师在课堂上不能简单地把科学研究的结果告诉学生。教师的主导作用是要和学生一起努力去还原科学探究的过程本身 ,是要让学生充分体验 :假如他们是当时的科学家 ,在当时的科学认知水平下 ,观察身边生活现象 (实验现象 )时可能会产生哪些问题 ?如何作出合理…     

生物学课堂中的探究性教学

“诱发探究”的倡导者、教育家施瓦布指出“如果要学生学习科学的方法 ,那么有什么学习比通过积极地投入到探究的过程中去更好呢 ?”探究性教学以发展探究思维为目标 ,以学科的基本结构为内容 ,以再发现为学习方法。它强调学生是“发现者”,激发学生对学科本身的兴趣 ,在教师指导下像科学家发现真理一样 ,通过学生自己探索、学习和实践活动 ,去发现规律 ,掌握基本的科学方法、提高能力。在教学结构序列上 ,主要体现在 :教师首先要为学生创设一个自主学习的环境 ,然后在教师指导下将启发、阅读、探究、点评、总结有机结合 ,从而让学生像科学…     

高渗氯化钠联合纳洛酮对失血性休克患者的临床疗效及安全性分析

目的:探讨高渗氯化钠联合纳洛酮对失血性休克患者的临床疗效及安全性。方法:收集我院收治的72例创伤失血性休克患者,随机分为实验组和对照组,每组36例,两组入院后均给予ICU常规治疗,对照组患者给予纳洛酮注射液1.2 mg加入5%葡萄糖静注,5 min/次,3次后改用4 mg持续静滴;实验组患者在对照组的基础上给予10%氯化钠液220 m L加入生理盐水80 m L配成7.5%的高渗氯化钠溶液静脉滴注。治疗结束后,对两组患者苏醒时间、血清NO、CD18水平以及临床疗效进行检测和比较。结果:与治疗前相比,两组患者的血清NO、CD18水平均下降(P0.05);与对照组相比,实验组患者的苏醒时间较短,血清NO、CD18水平较低,并发症的发生率也较低(P0.05)。结论:高渗氯化钠联合纳洛酮能够提高失血性休克患者的临床疗效,且安全性高,可能与其降低失血性休克患者血清NO、CD18水平有关。     

毒性多结节性甲状腺肿的手术术式探讨

目的:探讨毒性多结节性甲状腺肿的手术切除范围,为临床手术治疗毒性多结节性甲状腺肿提供理论依据。方法:收集2006年12月至2011年12月哈尔滨医科大学附属第一临床医学院普外科确诊且进行手术的52例双侧毒性多结节性甲状腺肿患者的临床资料,并按照术式分为次全切除组(24例)和近全/全切除组(28例)。术后通过病理检查观察其合并甲状腺癌的情况,临床观察其是否出现声音嘶哑(喉返神经损伤)和低钙血症(甲状旁腺损伤)情况,并随访患者甲状腺结节和(或)甲状腺功能亢进的复发情况。结果:次全切除组甲状腺癌的检出率为4.2%(1/24),近全/全切除组检出率为7.1%(2/28),两者比较差异无统计学意义(x2=0.02,P0.05);两组患者术后暂时性声音嘶哑发生率分别为4.2%(1/24)、3.6%(1/28),差异无统计学意义(x2=0.37,P0.05),术后暂时性低钙血症发生率分别为4.2%(1/24)、7.1%(2/28),差异亦无统计学意义(x2=0.02,P0.05)。近全/全切除组患者术后无甲状腺结节和(或)甲状腺功能亢进复发,次全切除组患者有5例复发,复发率为20.8%(5/24),两组比较差异有统计学意义(x2=4.28,P0.05)。结论:甲状腺近全/全切除术比次全切除术更能减少毒性多结节性甲状腺肿的复发。     

中药防治假体周围骨溶解的研究进展

现如今人工关节置换术越来越多的应用于重建关节功能改善关节疾病患者的生活质量,但是术后并发症严重影响了手术的效果,人工假体周围骨溶解及假体无菌性松动又是人工关节置换术后失败的主要原因之一,所以如何预防以及发病后如何去治疗成为现今关节医生面临的重要课题。OPG/RANKL/RANK系统,炎性因子的产生,破骨细胞、成骨细胞这些都是影响人工假体术后产生无菌性松动,和引发假体周围骨溶解的重要因素,有效药物的干预治疗成为现如今关节置换术后以及围手术期的热门话题,中药因其副作用小,疗效独特,及深入的研究逐渐受到广大医生的注意,因此中药在治疗人工假体松动及骨溶解方面也得到了重大突破,本文从中医肾藏精,精生髓,髓能养骨理论着手总结中药作用于OPG/RANKL/RANK系统,抑制炎性因子、破骨细胞及促进成骨细胞增殖的研究现状。     

重组截短型TGF-βⅡ型受体蛋白对肝纤维化大鼠的治疗作用研究

目的:研究截短型TGF-βⅡ型受体蛋白对肝纤维化大鼠的治疗作用。方法:取含有重组截短型TGF-βⅡ型受体载体的大肠杆菌BL21,通过培养繁殖,诱导,纯化得到重组截短型TGF-βⅡ型受体蛋白。使用CCl4诱导的方法来制备肝纤维化大鼠模型,观察截短型TGF-βⅡ型受体蛋白对大鼠肝纤维化的影响。SDS-PAGE检测纯化的截短型TGF-βⅡ型受体蛋白。生化检测血清谷丙转氨酶(glutamic pyruvic transaminase,ALT)及谷草转氨酶(glutamic oxalacetic transaminase,AST)含量。用实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法和免疫荧光方法来检测各组大鼠肝组织中的α平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA),1型胶原(collagen1,Col1)和4型胶原(collagen4,Col4)的表达情况。用HE,MASSON,PAS这三种病理学染色的方法来观察各组大鼠肝纤维化的变化。结果:SDS-PAGE检测结果显示,纯化后获得高纯度截断型TGF-βⅡ型受体蛋白。截短型TGF-βⅡ型受体蛋白治疗组可以减少血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的含量。截短型TGF-βⅡ型受体蛋白治疗组可以降低肝组织中α-SMA、FN、Col1和Col4的mRNA和蛋白质的表达。三种病理学染色的方法显示,与肝纤维化大鼠模型组相比,治疗组的纤维化程度明显减轻。结论:重组截短型TGF-βⅡ型受体蛋白对大鼠肝纤维化的程度有抑制作用,为治疗肝纤维化及其他纤维化疾病提供了一个潜在的治疗手段。     

miR-23b通过靶定TAB2/3抑制糖尿病肾病纤维化

MicroRNAs(miRNAs)通过与靶基因的相互作用发挥其生物学功能. miR-23b作为抑癌基因,参与了许多肿瘤和自身免疫疾病的发生过程,但其在糖尿病肾病中的作用尚不清楚.为了探讨miR-23b与靶基因TAB2/3作用对糖尿病肾病纤维化的影响,本实验通过建立糖尿病小鼠模型和糖尿病HK-2细胞模型,利用实时定量荧光PCR方法,检测糖尿病小鼠模型肾mRNA表达,发现miR-23b在糖尿病组（Dia组）表达低于正常组（P<0.001）.利用Western印迹检测相关蛋白,结果显示,与正常组相比,TAB2/3,FN和α-SMA在糖尿病组高表达,并且TAB2/3在糖尿病组中持续高表达.利用基因转染技术过表达miR-23b可以同时在mRNA和蛋白水平上抑制TAB2/3,P38和ERK1/2的表达,FN表达也显著降低.以上结果显示：miR-23b可能通过作用靶基因TAB2/3及其信号通路下游,抑制糖尿病肾病纤维化.