马齿苋提取物制备工艺、安全性及抗敏功效的研究

以透明质酸酶抑制率为考察指标,通过正交实验,确定了最佳醇提工艺:乙醇浓度为75%(体积分数),料液比1∶10,提取温度60℃,提取时间1 h,提取液过滤脱色浓缩冷冻干燥后,得到马齿苋醇提物。同浓度下的马齿苋醇提物的透明质酸酶抑制率远高于水提物,红细胞溶血实验说明马齿苋水提物和醇提物的刺激性低,安全性高。人体斑贴实验表明,马齿苋醇提物能减轻或抑制常见致敏源对皮肤的刺激作用,减弱皮肤炎症反应,增强皮肤的屏障功能。     

玛咖的愈伤组织诱导及植株再生

1植物名称玛咖(Lepidium meyenii). 2材料类别种子(秘鲁新世纪有限公司提供). 3培养条件以MS为基本培养基.愈伤组织诱导培养基:(1)MS 6-BA 0.5 mg·L-1(单位下同) NAA0.5;分化培养基:(2)MS 6-BA 4.0 NAA 0.5;生根培养基:(3)1/2MS NAA 0.5.以上培养基中均加入3%蔗糖、0.7%琼脂,pH 5.6～5.8.温度(25±2)℃,光照时间10～12 h·d-1,光照度为2000～2500 lx.     

蛋白质芯片技术研究进展

蛋白质芯片是继基因芯片后的又一种用于生命科学研究的技术平台。目前这一技术已经被广泛应用到生命科学研究的多个领域,如蛋白质组学研究,新药的开发以及疾病的临床诊断等。就蛋白质芯片的基本原理、研究进展及应用状况做一介绍。     

岩黄连细胞生长与营养物质消耗的动态学研究

在岩黄连细胞悬浮培养过程中,对培养液pH值,碳源、氮源和磷酸盐含量,以及细胞生物量和生物碱含量进行测定,分析其动态变化过程。结果显示培养液pH值在培养初期降低,后逐渐升高;碳源在培养过程中逐渐被利用,磷酸盐和氮源在培养中期几乎耗尽,其中磷酸盐的消耗速率最快;悬浮细胞的生长周期为20 d左右,第18天细胞鲜重和干重达最大,而第21天脱氢卡维丁和小檗碱的含量最高,分别为8.22mg/L和4.31mg/L。结果表明营养物质(碳、氮和磷)的吸收与细胞生长以及生物碱的合成密切相关,营养元素的相对消耗速率为磷>氮>碳,推测氮和磷是影响岩黄连细胞培养的主要因素。     

植物查尔酮异构酶研究进展

黄酮类化合物属于多酚类次生代谢物,具有广泛的药用价值。查尔酮异构酶（CHI）是黄酮类代谢途径中的一个关键酶,催化分子内环化反应,使双环的查尔酮转化为有生物学活性的三环（2S）-黄烷酮。植物体内的CHI活性与类黄酮物质的合成有着密切联系,CHI转基因研究对于提高植物类黄酮含量有重要意义。简要概述了查尔酮异构酶的结构特点、催化反应机理以及CHI转基因的研究进展。     

改良异硫氰酸胍法提取玛咖(Maca)叶片中总RNA研究

为了获得质量较高的玛咖总RNA,对其总RNA的提取进行了研究。以玛咖无菌苗叶片为材料,通过改良的异硫氰酸胍法提取其总RNA。结果:所提取的总RNA纯度高、完整性好,电泳条带清晰,OD260/OD280值达到1.90±0.03,总RNA的得率达到252.57±1.12μg/g。表明改良的异硫氰酸胍法适合于玛咖叶片中RNA的提取,所提取的总RNA纯度高、完整性好,为进一步的玛咖分子生物学研究打下良好基础。     

棉花BAC文库快速筛选法

目的:构建棉花细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosome,BAC)文库的快速筛选法,以期从BAC文库中大量、快速、高效筛选出特定BAC克隆,为从事基因组测序、分离和分析特定基因、构建物理图谱及基因图位克隆等生物学技术研究奠定基础。方法:构建了整板、行、列的三维混合池,以菌液PCR为基础,从BAC文库中筛选出含有特定DNA片段的BAC单克隆。结果:从BAC文库的3 456个克隆中,共筛选出16个阳性单克隆,涉及13条染色体、11个SSR标记。结论:该文构建的棉花BAC文库筛选体系,筛选快速、准确,适合从BAC文库中大量筛选BAC单克隆。结合当前的多种BAC文库筛选方法进行探讨,根据不同的实验目的选择更合适的筛选方法和操作步骤。     

放大培养对岩黄连细胞悬浮培养的影响

为了优化岩黄连细胞悬浮培养的条件,研究了在放大培养过程中,岩黄连细胞生长与主要营养成分的代谢动力学,以及生物碱的产生情况。结果表明,在不同培养体系下,细胞生长曲线均呈现"S"型。随着培养体积从50、100 mL放大到500 mL和1 L,培养液中碳源、氮源和磷源的消耗减慢,细胞生物量减少,生物碱产量降低。其中100 mL培养体系所获生物量最高,达到15.2 g/L,生物碱产量也最高,脱氢卡维丁为8.35 mg/mL,小檗碱为4.58 mg/mL。根据本文结果,提出了岩黄连细胞培养条件的优化和大规模细胞培养生产岩黄连生物碱应采取的策略。     

曼地亚红豆杉植株中GGPP合成酶的克隆与分析

从 5年生曼地亚红豆杉 (Taxusmedia)的当年生新鲜枝叶中提取分离出mRNA ,然后根据已知植物的牛儿基牛儿基焦磷酸合成酶基因 (GGPPS基因 )DNA序列保守区设计特异简并引物。RT PCR获得了一条大小约 60 0bp的扩增谱带 ,回收该特异谱带并进行TA克隆 ,蓝白斑筛选 ,得到若干阳性克隆。经过质粒大小比较和PCR验证后 ,进行序列测定和同源性比较。发现该序列属于GGPP合成酶的片断 ,与Taxuscanadensis (AAD 1 60 1 8 1 )和Abiesgrandis (AAL1 761 4 2 )的GGPP合成酶相应区段的氨基酸序列一致性为 98%和 86%。蛋白质序列分析发现该序列含有一个特征的异戊二烯合成酶保守的结构域。进化树分析表明 ,曼地亚红豆杉GGPPS在进化上位于植物类 ,靠近古细菌类。曼地亚红豆杉GGPPS基因的克隆为研究红豆杉生产紫杉醇的分子机理和转基因植株的构建奠定了良好的基础。