GST-His双标签原核表达载体的构建及应用

目的：在原有带有GST标签的pGEX-KG载体上添加His标签,构建双标签原核表达载体,以提高纯化后的融合蛋白的纯度。方法：双酶切pGEX-KG载体,将同样带有双酶切位点编码His标签的DNA序列酶切后与其连接、转化大肠杆菌DH5α、鉴定阳性克隆并测序,并将编码雌激素受体B（ERβ）的片段构建到该载体上,分别利用GST标签和His标签对ERβ蛋白进行2次纯化。结果：构建了GST-His双标签原核表达载体,将ERβ编码片段克隆入该载体中,在原核生物中得到表达;分别用GST和His抗体进行Westernblot分析,均可检测到GST-His-ERβ融合蛋白的表达;利用此双标签载体纯化得到了纯度较高的ERβ蛋白。结论：GST-His双标签原核表达载体的构建对提高目的蛋白纯度具有重要意义。     

红曲菌代谢产物中低极性组分的分离及表征

以石油醚∶醋酸乙酯 =4∶1(V/V)作为洗脱剂 ,采用柱层层析粗分离醇溶性红曲菌代谢产物中的低极性组分。经浓缩、结晶除去白色结晶后的浓缩液 ,用正己烷∶醋酸乙酯 =9∶1(V/V)作为展开剂进行薄层层析分离 ,在紫外灯下观察 ,从低极性组分中分离出六个组分 ,分别为 :具荧光组分、两个相隔较近的黄色组分、淡黄色具荧光组分、具浅蓝绿色荧光组分、具荧光组分。各组分的Rf 值分别为 :0 2 9、0 15、0 12、0 0 9、0 0 6、0 0 4。MS测定结果表明 ,Rf 值最大的具荧光组分可能为含有 OH及Br的共轭烯烃或脂肪酮 ,而在紫外灯下呈淡黄色组分为含有 OH的环状化合物。     

水溶性红曲红色素的制备与表征

以碱解法制备水溶性红曲红色素,碱解过程可使红斑素和红曲红素分子中的内酯键找开,生成闳酸盐,提高其亲水性。当反应体系ＮａＯＨ与红曲色素用量比例为１：１３时,碱解过程可在１５ｍｉｎ内完成。在ＰＨ５～６范围同,生成的水溶性红色素扣及光值随ＰＨ增大面临略有提高。加热和光照都将影响其稳定性,绝氧则对提高其稳定性无明显影响。在中性条件下,Ｃａ＾２＋、Ｍｇ＾２＋导致色素溶液沉淀,Ｓｎ＾２＋、Ａｌ＾２＋、Ｆ３＾３     

大豆的综合利用[Ⅰ]从大豆油渣提取蛋白质的研究

提取豆油后的大豆残渣(简称大豆油渣),用1—12％的碱溶液提取数次,油渣和碱溶液的比例(W/W)为1/10,混合物在50℃的温度下搅拌30分钟,减压过滤,合并几次滤液(滤渣保留待分析),用0.5N的HCl溶液中和,用饱和(NH_4)_2SO_4溶液沉淀,减压过滤,用无离子水洗沉淀几次,真空干燥,粉碎过筛,得到有香味的褐黄色的粉末状产物.得率23.54％;产物的蛋白质的平均含量为71.46％. 分别用IR,UV,HLC和电泳等现代技术对上述产物进行了分析鉴定. 本文还讨论了pH,温度,时间和“配比”等因素对提取效率的影响.     

红曲色素提取条件及结构表证

以乙醇为溶剂,从红曲中提取红曲色素。探讨了提取条件对提取率的影响,并用FTIR和UV对色素结构进行了表征。结果表明,最佳乙醇浓度为70％～80％,在此条件下提取5次,提取率可达到90％。在提取的头一小时内,浸出速率较高,提高温度有利于提高提取液浓度和降低乙醇用量。增大乙醇对红曲的用量比例,虽然有利于提高浸出率,但是会明显增加乙醇耗量。     

海藻工业废料的组成及其利用价值

测定了海藻工业废料中粗蛋白、粗纤维和氨基酸的组成:在海带废渣中,粗蛋白含量达20％以上,江蓠经简单碱处理,可以提取粗蛋白总量中75％的氨基酸。这些废料中,富含人体及动物必需氨基酸,尤以赖氨酸、精氨酸和蛋氨酸的含量更为显著。本文讨论了这些废料的利用价值及途径。     

一种用途广泛的食品添加剂——褐藻胶

海带是我国海藻养殖的主要品种。褐藻胶以海带为主要生产原料,通常可作为食品的增稠剂、赋形剂、凝胶剂和品质改良剂。一般情况下,其增稠能力是果胶的十倍以上,其价格则只及果胶的1/2—1/3。褐藻胶不但是一种安全的天然食品添加剂,同时对人体还具有整肠作用,并有助于排除人体内积蓄的放射性元素。食品工业应用的褐藻胶主要品种为:褐藻酸钠和褐藻酸丙二酯。这些水溶性褐藻胶产品可以按不同的分子量、含钙量、颗粒状(粒状或