GST-His双标签原核表达载体的构建及应用

目的：在原有带有GST标签的pGEX-KG载体上添加His标签,构建双标签原核表达载体,以提高纯化后的融合蛋白的纯度。方法：双酶切pGEX-KG载体,将同样带有双酶切位点编码His标签的DNA序列酶切后与其连接、转化大肠杆菌DH5α、鉴定阳性克隆并测序,并将编码雌激素受体B（ERβ）的片段构建到该载体上,分别利用GST标签和His标签对ERβ蛋白进行2次纯化。结果：构建了GST-His双标签原核表达载体,将ERβ编码片段克隆入该载体中,在原核生物中得到表达;分别用GST和His抗体进行Westernblot分析,均可检测到GST-His-ERβ融合蛋白的表达;利用此双标签载体纯化得到了纯度较高的ERβ蛋白。结论：GST-His双标签原核表达载体的构建对提高目的蛋白纯度具有重要意义。     

人p65真核表达载体的构建及鉴定

目的:构建带Myc标签的人p65真核表达载体,对其在人宫颈癌He La细胞中的定位进行检测,并研究p65对核因子κB(NF-κB)转录活性的影响。方法:构建带Myc标签的p65真核表达载体pc DNA3.1-Myc-p65,质粒测序验证正确后脂质体法瞬时转染人胚肾HEK293T细胞,Western印迹鉴定p65的表达;细胞免疫荧光实验检测p65的亚细胞定位;重组质粒与NF-κB-Luc报告基因质粒共转染HEK293T细胞,加TNFα刺激后检测萤光素酶报告基因的活性。结果:测序结果证实pc DNA3.1-Myc-p65真核表达载体构建成功;脂质体法转染HEK293T细胞后检测到Myc-p65蛋白的表达;细胞免疫荧光实验显示Myc-p65蛋白定位于He La细胞的细胞质中,当加入TNFα刺激后大部分Myc-p65蛋白进入细胞核;萤光素酶活性检测结果显示,提高细胞内p65水平或加入TNFα刺激均可明显激活NF-κB信号通路的活性。结论:构建了带Myc标签的p65真核表达载体,并使其在HEK293T细胞中表达;正常情况下,Myc-p65蛋白定位于宫颈癌He La细胞的细胞质中,TNFα促进Myc-p65入核;Myc-p65能够以TNFα不依赖的方式激活NF-κB信号通路。pc DNA3.1-Myc-p65真核表达载体的构建,为进一步筛选NF-κB的相互作用蛋白及功能研究奠定了基础。     

乳腺癌干细胞和乳腺癌

肿瘤干细胞既包含干细胞的特性也包含肿瘤细胞的特性。乳腺癌起源于乳腺癌干细胞的说法能够合理地解释乳腺癌的不均一性及其治疗后的复发,这些变异的干细胞可能作为肿瘤预防策略的靶标。而且,由于乳腺癌干细胞能够抵抗辐射治疗和化学治疗,所以要想更好地治疗乳腺癌就需要寻找针对这些干细胞的靶标。我们综述了乳腺癌干细胞的发现、富集和分离、相关的信号途径,以及在乳腺癌治疗中的应用。     

脓毒症患者短期预后的影响因素及YAP联合STAT3检测的预测价值研究

摘要 目的：研究脓毒症患者短期预后的影响因素及Yes相关蛋白（YAP）联合信号转导子和转录激活子3（STAT3） 信使RNA（mRNA）检测的预测价值。方法：选择我院2019年3月～2021年1月收治的131例脓毒症患者,将其按照28d预后情况的差异分成死亡组以及生存组。比较两组各项基线资料,外周血单个核细胞YAP、STAT3 mRNA表达水平。采用多因素Logistic回归分析脓毒症患者短期预后的影响因素。此外,通过受试者工作特征（ROC）曲线分析外周血单个核细胞YAP、STAT3 mRNA表达预测脓毒症患者短期预后的效能。结果：死亡组患者的外周血单个核细胞YAP、STAT3 mRNA相对表达量均高于生存组患者（P＜0.05）。死亡组年龄大于生存组,住院时间短于生存组,APACHEⅡ评分高于生存组,合并基础疾病、机械通气的患者比例高于生存组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄、APACHEⅡ评分、合并基础疾病、机械通气以及外周血单个核细胞YAP、STAT3 mRNA表达水平是脓毒症患者短期预后的影响因素（P＜0.05）。外周血单个核细胞YAP、STAT3 mRNA联合检测预测脓毒症患者短期预后的曲线下面积为0.845,高于两指标单独检测的0.623、0.687。结论：脓毒症患者短期预后的影响因素包括年龄、APACHEⅡ评分、机械通气以及合并基础疾病等,联合检测外周血单个核细胞YAP、STAT3 mRNA表达对脓毒症患者短期预后具有一定预测价值。     

马铃薯晚疫病研究

马铃薯晚疫病是由疫霉(Phytophthora spp.)引起的严重的真菌病.马铃薯晚疫菌因导致马铃薯茎叶死亡和块茎腐烂而成为马铃薯疫灾中危害最大的病原菌,目前关于马铃薯晚疫病的研究方兴未艾.通过对马铃薯晚疫病的描述和菌的分离,分析了马铃薯的抗病机制以及基因工程方面研究进展,并提出建议,以便在育种方面参考.     

乳链菌肽作用机制及其应用

乳链菌肽作为高效、安全的天然食品防腐剂已得到广泛应用。成熟的乳链菌肽含有34个氨基酸残基,由5个硫醚桥组成独特的内环结构,是研究蛋白质结构与功能的一个很好的材料。本文论述了乳链菌肽的分子结构及其与细胞膜作用的分子机制,详细阐述了乳链菌肽的作用模型。