双歧杆菌地高辛标记寡核苷酸基因探针制备和应用研究

目的探讨地高辛标记寡核苷酸基因探针应用于微生态研究的可行性和实用性。方法制备双歧杆菌属和部分种的地高辛标记16S rRNA寡核苷酸探针,初步应用于微生态制剂鉴定和临床肠道微生态检测,评价寡核苷酸探针杂交在肠道微生态研究和检测中的应用价值。结果地高辛标记寡核苷酸探针具有较好的特异性与灵敏度：地高辛标记的双歧杆菌属和种的共6种寡核苷酸基因探针与标准菌株杂交后灵敏度和特异度分别为属探针95％、75％,青春双歧87．5％、90％,两歧双歧87．5％、87．5％,短双歧87．5％、92．5％,婴儿双歧75％、95％,长双歧75％、100％。结论寡核苷酸基因探针用于肠道细菌的鉴定显示出一定前景,加大探针的种类与扩大调查范围有可能使该技术替代现有细菌培养技术。     

复合益生菌制剂"海生元"对实验性肠菌群失调症调整作用的研究

目的 :观察及评价复合益生菌制剂“海生元”对实验性肠菌群失调症的纠正作用。方法 :1)制备复合益生菌制剂“海生元” ;2 )制备SPF·BALB/c小鼠肠菌群失调症模型 ;3)观察“海生元”对模型小鼠 (复方制剂 )组灌胃治疗效果 ;设自然恢复对照组和生理盐水对照组 (安慰组 ) ;动态比较疗后第 2、4、6天各组腹泻症状恢复情况和肠菌群定量分析。结果 :1)小鼠肠菌群失调症造模效果分析 :氨苄青霉素造模前 ,10 0 %小鼠为正常大便 (无腹泻 ) ;造模第 3天 ,6 0 %为重度 (Ⅲ度 )腹泻 ,4 0 %为中度 (Ⅱ度 ) ,即 10 0 %模型小鼠出现中、重度腹泻 ,表明造模成功。此外 ,模型小鼠肠菌群中双歧杆菌、乳杆菌未检出 ,肠杆、肠球、类杆菌数量大大低于正常小鼠 (P <0 0 1)证实出现了菌群失调症。 2 )各组腹泻恢复情况 :疗前各组均为中、重度腹泻。疗后第 2天 ,复方制剂组Ⅱ～Ⅲ度腹泻降至 4 7% ,而自然恢复组和生理盐水组分别为 99%和93% ;疗后第 4天 ,复方制剂组Ⅱ～Ⅲ度仅 16 % ,两个对照组则分别为 6 5 %和 5 7% ;疗后第 6天 ,复方制剂组完全正常者为 89% ,而两对照组分别为 2 1%。 3)各组肠菌群动态定量分析 :自然恢复和生理盐水两个对照组 ,造模后第 2、4、6天五种肠道正常生理菌数量逐渐递升 ,但仍明显低于正常健康小鼠     

模拟失重对大鼠肠道菌群影响的研究

目的：研究模拟失重条件下大鼠肠道菌群变化情况。方法：选择性培养基分别对肠球菌、肠杆菌、类杆菌、乳杆菌以及双歧杆菌进行定量测定,扫描电镜观察大鼠盲肠上皮细胞的组织变化。结果：过路菌群中肠杆菌和肠球菌数量增加显著;原籍菌群中双歧杆菌减少十分明显,乳杆菌的数量也有不同程度的减少,而类杆菌的数量有增加的趋势。SD大鼠盲肠出现了肿胀细胞,上皮细胞颈毛排列紊乱、稀疏。结论：模拟失重条件下大鼠肠道微生态出现平衡失调。     

肠通透性改变及探针测定方法的研究近展

近年来,人们越来越重视胃肠粘膜通透性功能改变在引起内外科高危病人的脓毒症产生,以及多脏器功能衰竭方面的作用。由动物外伤后感染的模型和许多临床病例已证实：肠道内的细菌和内毒素是通过胃肠粘膜通透性改变而进入体内的。也就是说肠道菌群紊乱,细菌和毒素的易位、...     

脆弱类杆菌基因探针初步应用的研究

使用地高辛标记的探针对３６株厌氧菌和需氧菌检测,用细菌直接点样滤膜与深针杂交结果,对脆弱类杆菌呈阳性反应,对其它厌氧菌和需氧菌呈阴性反应,其敏感性为８９％,其特异性为９１．７％,对脆弱类杆菌的检测灵敏度为１０ＰｇＤＮＡ和１０＾４ＣＦＵ细菌。     

正常菌群对常见致病菌拮抗作用的研究

生物拮抗作用是微生物种群关系研究的一个侧面,实验中我们使用从皮肤上分离的常住菌——痤疮丙酸杆菌(A14-1)和表皮葡萄球菌(F65)对常见致病菌如金黄色葡萄球菌(C189)、绿脓杆菌(C8514)和埃希氏大肠杆菌(C1356)的体外拮抗试验表明,它们具有明显的拮抗作用,拮抗作用一般从48小时开始,72小时明显。而皮肤常住菌间无拮抗作用,相反它们还有协同作用,这对于皮肤的自净以及维持皮肤的微生态平衡具有重要的作用。此外,实验中还进行了乳杆菌和双歧杆菌等正常菌群分离株与上述常见致病菌的体外拮抗试验,结果表明也     

生态制剂用于烧伤大鼠局部抗感染的初步观察

本实验使用皮肤常住菌分离株,筛选驯化后成为无毒菌株,经冷冻干燥后,制备成生态制备膏霜,涂于已被烧伤大鼠表面,2h后接种绿脓杆菌(10~9CFu/ml)或金黄色葡萄球菌(10~9CFu/ml),并以空白膏霜涂抹作为对照组,观察其抗感染作用,发现拮抗作用自48h始,痴上绿脓杆菌菌数由1.08×10~(11)CFu/g降至6.51×10~(10)CF/g,痂下由1.12×10~(11)至7.77×10~9CFu/g。至72 h拮抗作明显,痴上绿脓杆菌4.69×10~(10)至2.08×10~8,痂下为1.65×10~(10)至4.5×10~8。感染金黄色葡萄球菌从10~(10)CFu/g到10~8CFu/g,72h后便降至1.02—7.83×10~6CFu/g,并一定程度阻止了感染的细菌入血,而对肠道细菌迁移无作用。     

部分正常菌群分离菌株的超氧化歧化酶活性的测定

为了进一步研究部分正常菌群的生理和病理机制,我们测定了这些菌株的SOD活性和脂质过氧化物(LPO)变化,发现皮肤常住菌的分离株的混合培养时,SOD活性增加,说明它们具有协同作用。此外,对其它菌株SOD活性测定结果可知,类杆菌和双歧杆菌的SOD活性最低,其它菌株也有一定的SOD活性,如乳杆菌的SOD活性为47.47～98.98μg/ml,大肠杆菌的SOD活性为127.12μg/ml肠球菌的SOD活性为172.5μg/ml。     

创伤后肠道菌群移位与微生态防治研究(一)

为了深入地研究肠道菌群的生物屏障作用,我们使用Ｗｉｓｔａｒ大鼠制备烧伤动物模型,定量地分析了烧伤大鼠肠道粘膜和内容物中５类菌群,且对血液和内脏进行了细菌培养,结果显示烧伤大鼠４８ｈ菌群变化明显,烧伤大鼠４８ｈ血培养阳性率为５０％,细菌移位率达４１％,烧伤２４ｈ血浆内毒素升高,二胺氧化酶活性和结肠ＩｇＡ水平下降,发生了内源性感染症。     

创伤后肠道菌群移(易)位与微生态防治研究(二)急性坏死性胰腺炎与内源性感染症的实验研究

本研究制备了定植质粒菌ＪＭ１０９（耐氨苄青霉素）的犬急性坏死性胰腺炎的动物模型,通过ｐｕｃ１８质粒裁体示踪指纹图谱分析方法,查明肠道细菌和内毒素的移位情况,观察急性坏死性胰腺炎与内源性感染症的关系,进一步阐明胰腺感染的发生机理。