小鼠sIL1ra基因克隆与其在骨髓抑制恢复中的功能研究

目的：构建鼠分泌型白细胞介素1受体拮抗剂（sIL1ra）基因的真核表达载体,进行体内表达,并研究其在5氟尿嘧啶（5-FU）所致骨髓抑制恢复中的作用。方法：根据鼠sIL1ra基因序列设计特异引物,以RT—PCR克隆其编码序列,并构建至phCMV真核表达载体中,通过胫前肌肌肉注射、随后电击转染等方法获得了该基因在小鼠体内的高效表达,并研究了sIL1m的药效学功能。结果：体内表达sIL1ra能增加5-FU注射后小鼠外周血白细胞数以及骨髓细胞数（P〈0．05或P〈0.01）。结论：体内转染sIL1ra可以促进小鼠骨髓抑制后造血的恢复。     

p53蛋白参与NGF诱导的PC12细胞周期阻滞

通过观察不同营养状况下NGF诱导PC12细胞发生周期阻滞过程中p53蛋白水平的变化,探讨p53在PC12细胞周期阻滞中可能的作用机制．用流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测p53和p21^WAF1/CIP蛋白水平．结果显示1％FBS(Fatal Bovine Serum)和50ug／L NGF(Nerve Growth Factor)均可诱导PC12细胞发生细胞周期阻滞．在10％FBS 50ug／L NGF处理的细胞中,p53和p21^WAF1/CIP1均增高,而使用MEK抑制剂U0126(10umol／L)可以抑制这一增高．在1％FBS处理的细胞中,p53水平增高,p21^WAF1/CIP1却未见明显增高;进而加入50ug／L NGF作用1h后,p53显著降低,6h后再次升高,并持续至24h．可见p53在50ug／L NGF和1％FBS诱导的细胞周期阻滞中均发挥作用,但作用机制可能不同．     

TCRBV12—3重组载体构建及其抗肿瘤作用的初步研究

目的：构建pEGFP．C3-TCRBVl2—3表达载体并初步研究其抗肿瘤作用。方法：TCRBVl2—3基因片段从pGEM-T—TCRBVl2-3载体上酶切并克隆至pEGFP—C3载体中,通过脂质体将pEGFP—C3．TCRBVl2-3表达载体转染外周血单个核细胞（PBMCs）,48小时后荧光显微镜观察转染效率。PBMCs细胞、pEGFP-C3载体转染的PBMCs细胞、pEGFP—C3-TCRBVl2-3表达载体转染的PBMCs细胞分别与肝癌细胞BEL-7402和宫颈癌细胞HeLa共培养24h,显微镜观察肿瘤细胞的生长情况。结果：测序证实TCRBVl2-3基因片段成功亚克隆至pEGFP—C3载体中,荧光显微镜证实重组体转染PBMCs细胞48h后可有效表达绿色荧光。显微镜观察发现pEGFP—C3-TCRBVl2-3载体转染的PBMCs对肝癌细胞有杀伤作用．但对宫颈癌杀伤作用不明显。结论：成功构建pEGFP—C3一TCRBVl2—3表达载体,初步证实TCRBVl2．3对肝癌细胞有杀伤作用。     

多聚甲醛固定对荧光蛋白分子间FRET效率的影响

目的：研究多聚甲醛固定对利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)检测细胞中蛋白质相互作用的影响,解决运动能力较强的细胞中FRET效率检测的问题。方法：选用两个已知能够相互作用的蛋白分子TRA和TRB,将荧光蛋白ECFP和EYFP的编码基因通过融合PCR分别标记在其C端;将两个融合基因共转染靶细胞,一组细胞经低浓度（0.5%）多聚甲醛短时（0.5~1h）固定,另一组不固定,利用激光共聚焦扫描显微镜检测两个融合蛋白之间的FRET效率,比较其在两组细胞之间的差异情况。结果：经过统计学分析,在活细胞和经低浓度多聚甲醛短时间固定的细胞中,ECFP与EYFP之间的FRET效率没有显著差异。结论：低浓度短时间的多聚甲醛固定对于荧光蛋白分子之间的相互作用没有显著的影响,因此对于运动能力过强的细胞可以固定后再进行FRET检测。     

基因与环境互作对云南保山烤烟主要潜香型物质的影响

为研究云南保山烤烟不同品种潜香型物质在不同环境条件下的稳定性问题,将云南保山3个烤烟常栽品种(K326、Y87、Y99)种植在3个海拔的2种土壤上,应用AMMI模型对烤烟主要潜香型物质进行基因型(G)、环境(E)和基因型与环境(G×E)互作分析.结果表明： 基因型、环境及其互作对烤烟叶黄素含量、β-胡萝卜素含量、绿原酸含量的影响均达到显著水平;芸香苷含量主要受基因型影响.烤烟主要潜香型物质含量及其稳定性受G×E互作影响显著,叶黄素含量、β-胡萝卜素含量、绿原酸含量随海拔的增加而显著增加,其稳定性也不同程度得到加强;K326适种在中低海拔区,Y87、Y99适种在中高海拔区.
     

PHLCX Nflag3/小窝蛋白-1重组质粒的构建及融合基因在293T细胞中的表达

构建重组真核表达质粒PHLCX Nflag3／小窝蛋白-1,并在293T细胞中表达．用PCR的方法扩增cDNA文库中的人小窝蛋白-1基因,连接在真核表达栽体PHLCX Nflag3的短肽标签flag的下游,用限制性酶切和泖l序的方法鉴定;将重组质粒以脂质体法转染293T细胞,Western blotting法检测蛋白质的表达．结果显示,双酶切出现两个片段,分别与空栽体和人小窝蛋白-1的cDNA分子质量大小相符,测序结果符合人小窝蛋白-1的cDNA序列;Western blotting显示构建的新栽体能够在293T细胞中表达小窝蛋白-1／flag融合蛋白,表明已成功构建了能在293T细胞中高效表达小窝蛋白-1／flag融合蛋白的真核表达栽体PLHCX Nflag3／小窝蛋白-1．     

TCR BV12-3重组载体构建及其抗肿瘤作用的初步研究

目的:构建pEGFP-C3-TCR BV12-3表达载体并初步研究其抗肿瘤作用。方法:TCR BV12-3基因片段从pGEM-T-TCR BV12-3载体上酶切并克隆至pEGFP-C3载体中,通过脂质体将pEGFP-C3-TCR BV12-3表达载体转染外周血单个核细胞(PBMCs),48小时后荧光显微镜观察转染效率。PBMCs细胞、pEGFP-C3载体转染的PBMCs细胞、pEGFP-C3-TCR BV12-3表达载体转染的PBMCs细胞分别与肝癌细胞BEL-7402和宫颈癌细胞HeLa共培养24 h,显微镜观察肿瘤细胞的生长情况。结果:测序证实TCR BV12-3基因片段成功亚克隆至pEGFP-C3载体中,荧光显微镜证实重组体转染PBMCs细胞48 h后可有效表达绿色荧光。显微镜观察发现pEGFP-C3-TCR BV12-3载体转染的PBMCs对肝癌细胞有杀伤作用,但对宫颈癌杀伤作用不明显。结论:成功构建pEGFP-C3-TCR BV12-3表达载体,初步证实TCRBV12-3对肝癌细胞有杀伤作用。