重组apo(a) Kringle Ⅳ-10对纤溶酶原与内皮细胞结合的影响

通过研究重组apo(a)KringleⅣ 10 (KⅣ 10 )的赖氨酸结合能力对纤溶酶原与内皮细胞结合的影响 ,探讨apo(a)在抑制纤溶过程中的作用 ,为脂蛋白 (a) [lipoprotein(a) ,Lp(a) ]致动脉粥样硬化机理研究提供依据 .将含apo(a)野生型KⅣ 10 ((wild typeKⅣ 10 Trp72 ,wt KⅣ 10 Trp72 )和突变型KⅣ 10 (mutate typeKⅣ 10 Trp72 ,mut KⅣ 10 Arg72 )基因片段重组质粒 ,分别转化至E .coliDH5α菌株中并表达含这 2个重组片段的融合蛋白 ,通过Glutathione Agarosebeads亲和层析柱进行分离和提纯 ,经L Lys Sepharose 4B亲和层析柱检测其赖氨酸结合能力 .再以异硫氰酸荧光素标记的纤溶酶原为配基 ,观察这 2种基因表达片段对纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞 (humanumbilicalveinendothe lialcells ,HUVEC)结合的影响 .结果显示 :在E .coliDH 5α菌株中表达的野生型谷胱甘肽S 转移酶(glutathioneS transferase ,GST) KⅣ 10 Trp72 (GST wt KⅣ 10 Trp72 )融合蛋白和突变型谷胱甘肽S 转移酶 (GST mut KⅣ 10 Arg72 )融合蛋白在赖氨酸结合能力上存在明显差异 .其中GST wt KⅣ 10 Trp72能有效地抑制纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞的结合 ;而GST mut KⅣ 10 Arg72 在任一浓度范围内均无这种抑制作用 .结果     

p53蛋白参与NGF诱导的PC12细胞周期阻滞

通过观察不同营养状况下NGF诱导PC12细胞发生周期阻滞过程中p53蛋白水平的变化,探讨p53在PC12细胞周期阻滞中可能的作用机制．用流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测p53和p21^WAF1/CIP蛋白水平．结果显示1％FBS(Fatal Bovine Serum)和50ug／L NGF(Nerve Growth Factor)均可诱导PC12细胞发生细胞周期阻滞．在10％FBS 50ug／L NGF处理的细胞中,p53和p21^WAF1/CIP1均增高,而使用MEK抑制剂U0126(10umol／L)可以抑制这一增高．在1％FBS处理的细胞中,p53水平增高,p21^WAF1/CIP1却未见明显增高;进而加入50ug／L NGF作用1h后,p53显著降低,6h后再次升高,并持续至24h．可见p53在50ug／L NGF和1％FBS诱导的细胞周期阻滞中均发挥作用,但作用机制可能不同．     

构树种子油的超声强化提取及其抗氧化性研究

本文采用单因素设计,进行均匀设计实验,用超声波提取法考察了溶剂种类、超声波强度、超声波提取时间、料液比(g/mL)对构树种子油提取率的影响,同时研究了构树种子油清除羟基自由基和超氧阴离子自由基的能力。结果表明,在以丙酮作提取剂,各因素对构树种子油提取效率的影响次序为:超声波强度料液比超声时间;工艺参数为:超声波强度为65%,料液比(g/mL)1∶12,超声提取时间7 min,构树种子油提取率可达30.2%。同时,以构树种子油清除羟基自由基能力和超氧阴离子自由基能力为指标,研究构树种子油的抗氧化能力。通过DPPH法和邻苯三酚自氧化法测定其抗氧化活性,结果发现其对羟基自由基的抑制率高达93.56%,而对超氧阴离子没有明显抑制作用。     

他克林和双他克林抗星形孢菌素致凋亡作用的比较

用星形孢菌素（STS）诱导NG108-15细胞和HeLa细胞凋亡,观察他克林和双他克林是否具有抗凋亡作用.相差显微镜和Hoechst 33342染色观察细胞及胞核形态;噻唑蓝(MTT)测定分析细胞损伤状况;DNA提取及琼脂糖凝胶电泳观察凋亡特征性梯带;蛋白质印迹分析Bcl-2和Bax的表达水平.结果表明,经0.1 mmol/L他克林预处理后,由STS诱导的NG108-15细胞凋亡受到明显抑制.双他克林预处理无保护作用.蛋白质印迹分析表明他克林可显著抑制Bax的表达,同时还可促进Bcl-2的表达.他克林和双他克林预处理对STS诱导的HeLa细胞损伤无明显的保护作用.结论为：a.他克林对STS诱导的神经细胞损伤有显著的保护作用,但这种保护作用与其AChE抑制作用似乎没有明显关联.b.他克林对STS损伤的保护作用有细胞选择性.     

PHLCX Nflag3/小窝蛋白-1重组质粒的构建及融合基因在293T细胞中的表达

构建重组真核表达质粒PHLCX Nflag3／小窝蛋白-1,并在293T细胞中表达．用PCR的方法扩增cDNA文库中的人小窝蛋白-1基因,连接在真核表达栽体PHLCX Nflag3的短肽标签flag的下游,用限制性酶切和泖l序的方法鉴定;将重组质粒以脂质体法转染293T细胞,Western blotting法检测蛋白质的表达．结果显示,双酶切出现两个片段,分别与空栽体和人小窝蛋白-1的cDNA分子质量大小相符,测序结果符合人小窝蛋白-1的cDNA序列;Western blotting显示构建的新栽体能够在293T细胞中表达小窝蛋白-1／flag融合蛋白,表明已成功构建了能在293T细胞中高效表达小窝蛋白-1／flag融合蛋白的真核表达栽体PLHCX Nflag3／小窝蛋白-1．