HMBA对人肝癌SMMC—7721细胞周期相关基因表达的影响

本文研究HMBA对人肝癌SMMC－7721细胞周期G0／G1期阻滞相关基因表达的影响。免疫细胞化学和核酸原位杂交检测结果显示,HMBA可明显上调p21^WAF1/CIP1、p16蛋白表达并增强p21^WAF1/CIP1基因转录,同时对CDK4、Cyclin D1蛋白表达以及c-myc基因转录均具有明显的下调作用。结果表明,HMBA可通过增强p21^WAF1/CIP1、p16基因表达而抑制Cyclin D1-CDK4活性,最终导致细胞进入S期所需的c-myc等基因转录活性下降,从而将细胞周期阻滞于G0／G1期,诱导人肝癌细胞分化。     

EB病毒感染人胎鼻咽上皮细胞逃避老化期过程中抑制p16^INK4a表达

细胞周期调控紊乱是细胞永生化进程中一个重要的分子事件,本文利用Western blotting和S-P法分别检测p16^INK4a、p53、p21^WAF1／CIP1和E2F1的蛋白表达,试图从细胞周期调控的角度,探讨EB病毒诱导人胎鼻咽上皮细胞逃避老化期的分子机制。结果表明,EB病毒通过抑制p16^INK4a表达而阻断p16^INK4a／Rb途径,上调转录因子E2F1,而对p53、p21^WAF1／CIP表达无明显的影响。结果初步揭示,EB病毒介导的p16^INK4a／Rb／E2F1细胞周期调控紊乱参与了人胎鼻咽上皮细胞逃避老化期过程,为进一步探讨鼻咽癌发病机制提供了科学依据。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对胃癌细胞增殖及细胞周期的影响

探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）对体外培养的两株胃癌细胞（SGC-7901和BGC-823）增殖及细胞周期的影响。采用细胞培养、噻唑蓝（MTF）比色法、流式细胞定量检测（FCM）、蛋白质免疫印迹（Western印迹）以及免疫细胞化学染色（ICH）等方法,研究不同浓度DON处理72h对体外培养胃癌细胞的增殖、细胞周期及细胞周期相关蛋白—细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白（CKIs）P21WAF/CIP1和细胞周期蛋白E（cyclin E）表达的影响。MTT法检测结果显示DON可明显抑制两株胃癌细胞的增殖,SGC．7901和BGC．823细胞100、500、1000ug／L DON处理组的增殖抑制率分别为4．28％、36．20％、45．35％和14．89％、32．30％、51．61％。FCM检测结果显示,给予1000ug／LDON处理72h可使两株细胞周期阻滞在GffM期。在100～1000u扎浓度范围内,两株细胞P21WAF／CIP1表达量均高于对照组,P21WAF／CIP1的表达与DON浓度呈显著正相关关系（SGC-7901细胞：r=0．886,P〈0．01;BGC-823细胞：r=0．943,P〈0．01）;两株细胞的细胞周期蛋白E表达量均低于对照组,与DON浓度有明显剂量依赖关系（SGC．7901细胞：r=-0．923,P〈0．01;BGC-823细胞：r=-0．854,P〈0．01）。Western印迹及免疫细胞化学检测进一步证实了DON处理对蛋白质表达的影响。综合结果表明,DON可抑制体外培养胃癌细胞的增殖活性,G2／M期阻滞、P21WAF/CIP1表达增高及细胞周期蛋白E表达下降可能是DON抑制胃癌细胞增殖的可能机制,DON对分化程度不同的胃癌细胞的影响没有明显差别。     

过表达UHRF2通过上调p53及p21表达引起HEK293细胞G1期阻滞

UHRF2（ubiquitin like with PHD and ring finger domains 2）是新近发现的具有多个结构域的核蛋白,在细胞周期调控和表观遗传学中发挥重要作用．近期研究提示,UHRF2是肿瘤抑制蛋白p53的1个E3连接酶,在体内外能与p53相互结合并促进其泛素化,过表达UHRF2能使细胞周期停滞于G1期．然而,UHRF2介导的G1期阻滞及其与p53联系尚不清楚．通过共转染UHRF2质粒及p53特异性小干扰RNA(siRNAs)到HEK293细胞构建细胞模型,探索UHRF2引起细胞周期停滞与p53之间的关系．结果显示,UHRF2能促进HEK293细胞中p53的稳定,从而引起p21 (CIP1/WAF1)基因表达,并使细胞周期停滞于G1期;但在siRNA抑制p53的表达后p21(CIP1/WAF1)表达降低,UHRF2引起的细胞周期阻滞消除．研究结果提示,UHRF2可通过稳定p53,上调p21的表达,从而介导细胞周期阻滞于G1期;同时UHRF2可能参与细胞周期调控及DNA损伤反应（DNA damage response, DDR）．UHRF2稳定p53的具体分子机制及其在DDR中的作用有待进一步研究证明．     

视黄酸对胃癌细胞周期的调控

视黄酸(RA)能够抑制许多类型癌细胞生长、诱导细胞凋亡和调节细胞周期。本文研究了全反式视黄酸(ATRA)对人胃癌细胞的作用机理。结果表明,ATRA通过诱导细胞滞留在G_0/G_1期而显著抑制胃癌细胞生长,但ATRA不能诱导胃癌细胞凋亡;ATRA调控细胞周期与c-myc、磷酸化Rb水平的下调和p21~(WAF1/CIP1)、p53水平的上调有关,而cyclinD_1和CDK_4水平没有明显变化。在RA抗性细胞中,ATRA不能调节这些基因表达。结果证实,ATRA对胃癌细胞生长抑制与其诱导细胞滞留在G_0/G_1期有关,而与细胞凋亡的诱导无关,许多重要的、与周期相关的分子,包括cmyc、p21~(WAF1/CIP1、p53和Rb等参与细胞周期的调控。     

槲皮素对结肠癌细胞生长的影响

通过MTT试验观察槲皮素对结肠癌细胞系RKO生长的影响;通过流式细胞仪技术观察槲皮素对细胞周期和细胞凋亡的影响;采用RT-PCR和western印迹技术,确定槲皮素对p21、p27和p53表达的影响.MTT法显示槲皮素加药组生长抑制作用明显,且具有剂量依赖性;流式细胞仪分析结果显示,经5μmol/L槲皮素作用后细胞周期明显阻滞在G0/G1期;5、10、20μmol/L3个剂量组的细胞凋亡率分别为23.4%、24.2%、47.9%,而对照组为13.2%;p21和p27的mRNA及蛋白质表达水平上调,促凋亡蛋白p53表达水平上调.因此,槲皮素对RKO生长有明显的抑制作用,槲皮素可能通过上调p21和p27表达使RKO细胞周期阻滞于G0/G1期,可能通过上调促凋亡蛋白p53表达诱导RKO细胞发生凋亡.     

白藜芦醇体外对肝癌HepG2细胞分化及P21^WAF1/CIP1表达的影响

目的：探讨白藜芦醇（Resvratrol,Res）在体外对肝癌细胞分化及相关周期蛋白依赖激酶抑制因子P21^WAF1/CIP1的影响。方法：体外培养肝癌HepG2细胞,用MTT法检白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用,用倒置显微镜观察肝癌细胞的形态改变,用放射免疫法检测其AFP分泌,以RT-PCR方法检测HepG2细胞中P21^WAF1/CIP1mRNA的表达,用免疫细胞化学检测其P21^WAF1/CIP1蛋白的表达。结果：白藜芦醇呈时间剂量性抑制HepG2细胞株的增殖,使其亚细胞结构趋于正常,AFP分泌量下降,并显著上调HepG2细胞中P21^WAF1/CIP1mRNA和蛋白的表达。结论：白藜芦醇能诱导HepG2细胞在体外向正常肝细胞分化,并上调其P21^WAF1/CIP1的表达。     

莪术醇诱导人肝癌HepG2细胞衰老及其机制研究

为进一步探讨莪术醇的诱导细胞衰老的机制,该研究采用荧光定量PCR技术对莪术醇处理后细胞中81个细胞衰老相关基因差异表达谱进行分析,结果发现TP53及其下游基因p16Ink4a、p21Waf1/Cip1和p27Kip1等的表达水平显著升高,伴随ABL1、ALDH1A3、CHEK2、HRAS、PTEN等多个衰老信号通路启动与效应关联基因的转录显著增强,而CyclinA2、IGFBP3、SIRT1以及TERT等细胞周期进程与衰老信号通路的负性调控基因的表达水平则显著降低。Western印迹检测结果显示,p53及其下游周期素依赖性蛋白激酶抑制物(CKI)分子p21WAF1和p16INK4水平升高,CyclinA2水平降低,与PCR结果一致,并伴野生型p53-诱导的蛋白磷酸酶1(Wip1)水平显著增高,提示莪术醇可能通过激活p53信号通路诱导HepG2细胞衰老。该研究进一步发现莪术醇能够诱导HepG2细胞发生衰老表型改变,伴G0/G1期周期阻滞。     

外源性p53诱导肝癌细胞Wnt通路抑制因子Dickkopf-1的表达

研究p53对Wnt通路抑制抑制因子Dickkopf-1(DKK-1)表达的调节作用,将携带p53基因的复制缺陷型腺病毒载体(Adp53)导入到p53缺失的人肝癌细胞株Hep3B中,以RT-PCR技术检测p53对DKK-1表达的调节作用．检测结果表明DKK-1 mRNA水平在转染p53 20h后即有明显升高,其中以32h达最高水平,随后逐渐降低,量效关系研究表明在转染剂量为0、5、5、50pfu／cell的Adp53时DKK-1mRNA表达均有显著增高,尤以50pfu／cell时表达水平最高。提示p53能明显诱导Wnt通路抑制因子DKK-1的mRNA表达。     

丙戊酸钠抑制A549细胞生长

目的研究丙戊酸钠对肺癌A549细胞增殖和细胞周期的影响。方法MTT检测生长抑制,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,Western blot检测p21WAF1/CIP1蛋白表达。结果丙戊酸钠以剂量依赖性方式抑制A549细胞生长;丙戊酸钠上调G0/G1期比例,下调S期和G2/M期,不影响细胞凋亡;丙戊酸钠上调p21WAF1/CIP1蛋白表达。结论丙戊酸钠上调p21WAF1/CIP1表达,使细胞阻滞于G0/G1期,抑制A549细胞生长。     

白念珠菌菌丝转录活化因子协同作用的研究进展

从酵母转变为菌丝来适应不同的环境的能力是白念珠菌的特性之一,而菌丝体是其侵入宿主细胞引起机体全身性感染所必需的重要致病因素之一。白念珠菌这种重要的形态转换受到多种菌丝相关基因的调控。本文主要综述促有丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径的转录活化因子Cph1p和cAMP蛋白激酶A(cAMP/PKA)调节途径中的转录活化因子Efg1p对菌丝形态转换的影响,以及两者与调节白念珠菌毒力的转录活化因子TEA/ATTS家族中的Tec1p对于分泌型天冬氨酸蛋白酶家族(Secreted aspartyl proteinases,SAPs)中SAP5的协同调节作用,以对可能存在于不同的菌丝转录活化因子之间对菌丝形态转换调控的协同作用进行初步探讨。     

Concentration of GPI-Anchored Proteins upon ER Exit in Yeast

Previous biochemical work has revealed two parallel routes of exit from the endoplasmic reticulum (ER) in the yeast Saccharomyces cerevisiae , one seemingly specific for glycosyl-phosphatidylinositol (GPI)-anchored proteins. Using the coat protein II (COPII) mutant sec31-1 , we visualized ER exit sites (ERES) and identified three distinct ERES populations in vivo. One contains glycosylated pro-α-factor, the second contains the GPI-anchored proteins Cwp2p, Ccw14p and Tos6p and the third is enriched with the hexose transporter, Hxt1p. Concentration of GPI-anchored proteins prior to budding requires anchor remodeling, and Hxt1p incorporation into ERES requires the COPII components Sec12p and Sec16p. Additionally, we have found that GPI-anchored protein ER exit is controlled by the p24 family member Emp24p, whereas ER export of most transmembrane proteins requires the Cornichon homologue Erv14p.     

Role of 14-3-3 proteins in the regulation of neutral trehalase in the yeast Saccharomyces cerevisiae

In higher eukaryotes, 14-3-3 proteins participate in numerous cellular processes, and carry out their function through a variety of different molecular mechanisms, including regulation of protein localization and enzyme activation. Here, it is shown that the two yeast 14-3-3 homologues, Bmh1p and Bmh2p, form a complex with neutral trehalase (Nth1p), an enzyme that is responsible for trehalose degradation and is required in a variety of stress conditions. In a purified in vitro system, either one of the two 14-3-3 yeast isoforms are necessary for complete activation of neutral trehalase (Nth1p) after phosphorylation by PKA. It is further demonstrated that Bmh1p and Bmh2p bind to the amino-terminal region of phosphorylated trehalase, thereby modulating its enzymatic activity. This work represents the first demonstration of enzyme activation mediated by 14-3-3 binding in yeast.     

Dss1 associating with the proteasome functions in selective nuclear mRNA export in yeast

Dss1p is an evolutionarily conserved small protein that interacts with BRCA2, a tumor suppressor protein, in humans. The Schizosaccharomyces pombe strain lacking the dss1⁺ gene (Δdss1) shows a temperature-sensitive growth defect and accumulation of bulk poly(A)⁺ RNA in the nucleus at a nonpermissive temperature. In situ hybridization using probes for several specific mRNAs, however, revealed that the analyzed mRNAs were exported normally to the cytoplasm in Δdss1, suggesting that Dss1p is required for export of some subsets of mRNAs. We identified the pad1⁺ gene, which encodes a component of the 26S proteasome, as a suppressor for the ts⁻ phenotype of Δdss1. Unexpectedly, overexpression of Pad1p could suppress neither the defect in nuclear mRNA export nor a defect in proteasome function. In addition, loss of proteasome functions does not cause defective nuclear mRNA export. Dss1p seems to be a multifunctional protein involved in nuclear export of specific sets of mRNAs and the ubiquitin-proteasome pathway in fission yeast.     

p27~(Kip1)和CyclinD1在非小细胞肺癌中表达及意义

为了探讨p27Kip1蛋白和CyclinD1蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及意义,收集临床手术切除的非小细胞肺癌组织蜡块64例及正常肺组织10例,应用免疫组化(S-P法)检测组织中p27Kip1蛋白和CyclinD1蛋白的表达,结合临床病理资料和随访资料进行回顾性研究。实验发现NSCLC组织中p27Kip1蛋白表达和CyclinD1蛋白表达均明显不同于正常肺组织(P<0.01)。p27Kip1蛋白表达降低与NSCLC肿瘤大小、病理分级、分期增加、淋巴结转移之间有相关性(P<0.05),但与肿瘤组织学分型无相关性(P>0.05)。CyclinD1蛋白过表达与组织学分型、肿瘤大小、病理分级、临床分期、淋巴结转移无相关性(P>0.05)。p27Kip1蛋白表达与CyclinD1蛋白表达之间呈显著负相关(P<0.01)。cox单因素及多因素分析,p27Kip1蛋白低表达及CyclinD1过表达是影响NSCLC患者预后的主要因素。实验结果显示,NSCLC组织中,p27Kip1蛋白表达降低,而CyclinD1过表达,二者与NSCLC的发生发展机制有关,可作为预后指标,有利于NSCLC患者预后判断及个体化治疗。     

Processing of the dynamin Msp1p in S. pombe reveals an evolutionary switch between its orthologs Mgm1p in S. cerevisiae and OPA1 in mammals

Mitochondrial fusion depends on the evolutionary conserved dynamin, OPA1/Mgm1p/Msp1p, whose activity is controlled by proteolytic processing. Since processing diverges between Mgm1p (Saccharomyces cerevisiae) and OPA1 (mammals), we explored this process in another model, Msp1p in Schizosaccharomyces pombe. Generation of the short isoform of Msp1p neither results from the maturation of the long isoform nor correlates with mitochondrial ATP levels. Msp1p is processed by rhomboid and a protease of the matrix ATPase associated with various cellular activities (m-AAA) family. The former is involved in the generation of short Msp1p and the latter in the stability of long Msp1p. These results reveal that Msp1p processing may represent an evolutionary switch between Mgm1p and OPA1.     

p53负调控前列腺癌细胞中PC-1基因的表达

在前列腺癌进展中发生的PC-1基因表达失调和p53基因突变,提示这两个事件之间可能存在的联系.用依托泊苷处理前列腺癌LNCaP细胞后,PC-1蛋白的表达受抑制;瞬时转染分析表明野生型p53负调控PC-1启动子的转录活性;缺失突变分析将PC-1基因启动子上受p53负调控的区域定位在翻译起始位点上游757 bp～323 bp之间.缺失PC-1启动子上的雄激素受体反应元件并没有消除p53对其转录活性的抑制作用;无论p53是否存在,组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理LNCaP细胞后可以导致PC-1启动子转录活性升高.因此,p53和去乙酰化酶可以独立抑制PC-1启动子活性.这些研究结果表明,野生型p53负调控PC-1基因启动子的转录活性,而前列腺癌进展过程中p53突变可能和PC-1基因的表达失调有关.