Argonaute亚族蛋白对人类肿瘤细胞周期的影响

Argonaute(Ago)家族蛋白与小的非编码RNAs(siRNAs, miRNAs, piRNAs)生物发生和细胞功能密切相关．它可以结合小RNAs,调控蛋白质的合成或影响mRNA的稳定性,即RNA干扰(RNAi),并且参与Piwi相关RNAs(piRNAs)的生成．人类Argonaute蛋白家族包括8个成员,对其中的4个(Ago1～Ago4)mRNAs进行了实时定量PCR(qRT-PCR)检测,其在许多细胞中共表达,与细胞生长紧密相关．针对人乳腺癌MCF7和子宫颈癌HeLa细胞系,通过下调Ago亚族蛋白表达量,研究其在细胞周期中的调控作用．MTT实验证明,Ago蛋白表达缺失导致细胞增殖活性显著下降(P < 0.01),生长受阻．进一步研究揭示,细胞周期在G0/G1期发生停滞,其中Ago1(P < 0.01)和Ago4(P < 0.05)的作用尤为明显,但并不引发凋亡．虽然具体调控机制尚不清晰,但在人类肿瘤细胞中Argonaute蛋白可直接或间接地参与细胞周期进程的调控．     

凡纳滨对虾ANT2 基因的克隆及低温表达谱分析

为研究凡纳滨对虾适应低温的分子机理, 实验对从低温处理凡纳滨对虾抑制性消减文库中筛选出的一个360 bp EST 序列进行了研究。首先, 同源比对显示该EST 片段与其他物种的ANT2 基因高度同源, 命名为凡纳滨对虾ANT2 基因(LVANT2); 其次, 通过构建凡纳滨对虾肝胰腺全长cDNA 文库, PCR 扩增获得LVANT2 基因的全长cDNA1540 bp, 其中包括1011 bp 的完整开放阅读框, 编码336 个氨基酸残基。然后, 对基因进行了不同组织和低温处理的表达谱分析: (1)组织表达谱的结果显示, 该基因在凡纳滨对虾肌肉组织中表达量最高; (2)在不同低温处理下的表达结果显示, 该基因在15℃处理下基因表达量发生显著变化, 13℃开始呈下调表达, 11℃时表达量又升高; 13℃低温处理不同时间发现该基因在12h 内表达量发生显著变化,48h 后表达量最高。LVANT2 基因的低温诱导表达模式说明其可能在凡纳滨对虾低温适应中发挥作用       

中国南瓜曲叶病毒ＤＮＡ Ａ的克隆及其全序列

对引起我国南瓜曲叶病的病毒分离物ＤＮＡ的克隆和序列分析表明,中国南瓜曲叶病毒ＤＮＡ Ａ由２７４１个核苷酸组成,共编码６个开放阅读框（ＯＲＦ）,其中病毒链有２个ＯＲＦ：ＡＶ１（２５６aa)和ＡＶ２（１４０aa),ＡＶ１为外壳蛋白基因;病毒链的互补链有４个ＯＲＦ,ＡＣ１（２４３aa)编码复制酶基因,ＡＣ２（134aa)编码反式激活蛋白,ＡＣ３（１３６aa)和ＡＣ４（１７２aa),该病毒属于旧世界Ｂegomoviruses,是一个粉虱传播的联体病毒。     

综述: 细胞穿透肽及其结构改造在siRNA传递中的应用

小RNA药物应用于临床的主要技术瓶颈在于如何高效、低毒地将小RNA分子传递到它发挥功能的场所．基于细胞穿透肽在小RNA透皮给药的临床应用中所取得的进展,本文系统评述了近年来细胞穿透肽在小RNA的体内、体外传递方面的研究动态,分析了细胞穿透肽的结构改造对肽/小RNA复合物转染进入细胞发挥功能的影响,展望了细胞穿透肽作为小RNA的体内药物传递载体的发展方向．     

康氏木霉B—7和黑曲霉X—15原生质体的形成和再生

研究了康氏木霉B－7和黑曲霉X－152株纤维素酶高产菌株的原生质体制备与再生。结果表明,采用纤维素酶、蜗牛酶、溶菌酶的混合酶液,可成功地制备2株真菌的原生质体。其中,B－7以这3种酶的配比6：5：2为最佳,X－15以8：4：2为最佳。原生质体形成的缓冲液系统均以0．2mol/L,pH6．0磷酸盐缓冲液为宜,渗透压稳定剂则分别以0．6mol/LNaCl和0．6mol/L蔗糖为宜。以菌龄18h（B-7）和16h（X－15）2株真菌的菌丝体,在37℃下酶解90min可获得最适量的原生质体,产量分别达9×106个／ml和1．9×107个／ml,且其再生率也较高,均达95％左右。     

改进的薄层组织电泳技术对鸡胚及小鼠脏器组织同工酶的分析

本文介绍用改进的组织电泳及快速酶活性显色法对鸡胚脊髓及小鼠脏器组织切片中可溶性和膜结合性同工酶的分析研究。结果表明:本方法能成功地将鸡胚脊髓中的LDH同工酶分成15条亚带,胆碱酯酶分成10余条亚带,琥珀酸脱氢酶分成8条亚带,并将小鼠脏器组织中的LDH同工酶分成34条亚带,非特异性酯酶分成50余条亚带。为对不同物种同工酶的亚基组成、组合类型与酶谱变化的分析、动物组织种属的鉴定与临床标本的鉴别诊断提供了依据和实验手段。     

改进的薄层组织电泳技术对发育过程中鸡胚腰段脊髓蛋白质变化的分析

本文介绍一种改进的结合组织化学和生物化学的电泳方法,用此方法对神经组织中微量蛋白质进行定性、定量和定位的分析。结果表明在不同发育阶段中,鸡胚腰段脊髓中绝大多数蛋白区带表现为色度上的深浅变化,少数区带随发育而丢失或新生,脊髓背腹区域的蛋白区带非常相似,而酸性糖蛋白却表现为腹部多于背部。此外,还分析了鸡胚和鸡(刍鸟)的7种组织中蛋白质区带的差异。     

siRNA诱导的DNA甲基化与肿瘤的发生

siRNA诱导的基因沉默最早只被认为是发生在细胞质内的转录后水平的调控过程,随着siRNA指导DNA甲基化现象的发现,已证实siRNA可以通过指导基因组表观修饰引起转录水平基因沉默.DNA甲基化曾被预言是致癌作用的一种表观遗传学机制,肿瘤发生过程中抑瘤基因异常沉默涉及到基因启动子区域DNA的甲基化.分析了这两个过程中内在的关系,探索siRNA对肿瘤细胞中基因异常表达的影响和作用.这将有助于肿瘤生物学和表观遗传学的研究,也会为研发防治肿瘤的新方法和新途径提供新的思路.     

MiR-132抑制肿瘤转移

肿瘤转移是造成癌症难以根治的重要原因之一.近年来越来越多的研究发现,miRNA在肿瘤转移过程中发挥了直接或间接的作用.本研究的目标是找到一种特异性的肿瘤转移相关miRNA,能够作为抑制肿瘤转移的潜在靶标.miR-132是一类与炎症、血管生长、中枢神经系统相关的miRNA,至今还没有研究证明其与肿瘤转移相关.为了验证miR-132与肿瘤迁移的相关性,本研究将miR-132转染入高迁移乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞中,检测细胞迁移率的变化.实验发现miR-132能够抑制MDA-MB-231细胞的迁移.为了进一步揭示miR-132抑制细胞迁移的可能机制,本研究通过生物信息学手段寻找并鉴定了3种可能与肿瘤转移相关的miR-132的靶基因,它们分别是CHIP(STUB1)、G3BP1、G3BP2.分别比对MCF7与MDA-MB-231细胞,及转染miR-132和对照组MDA-MB-231细胞中以上3种基因的表达差异,我们发现G3BP1、G3BP2可能参与miR-132对肿瘤转移的调控.本研究首次报道miR-132与肿瘤转移的关系,并揭示了miR-132调节肿瘤转移的可能机制,说明了miR-132具有作为特异性抑制肿瘤转移靶标的潜力,为抑制肿瘤转移提供一个新的靶点.     

RNAi在基因缺陷模型方面的应用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)分子导入细胞内后,促进与之同源的mRNA发生特异性的降解,从而高效并特异地阻断或抑制相应基因表达活性的现象。RNAi技术现已成为调控基因的表达,阐明细胞的信号通路和研究功能基因组学的有力工具,并迅速在临床医学上展现出基因药物的诱人前景。目前,人们已开始对RNAi技术在人类疾病预防和治疗中的应用进行研究．这些研究涉及到病毒感染、癌症、代谢性疾患以及遗传病等各个方面。通过综述siRNA分子的作用机制、载体构建以及其在基因缺陷模型的建立等方面的应用,从而展示出RNAi在相关疾病的分子机制研究和基因治疗方面的诱人前景。