人HAS3启动子的结构与功能初步分析

透明质酸合酶3（hyaluronan synthase 3,HAS3）,是一个参与透明质酸合成的酶分子,在上皮形成和肿瘤转移等过程中起重要作用.为了进一步研究HAS3基因的转录调控机制,本研究克隆鉴定了HAS3基因的启动子.首先应用5′RACE（rapid amplification of cDNA ends,cDNA末端快速扩增）技术鉴定了HAS3基因的转录起始位点,发现了丰度和转录起始位点不同的两种新的HAS3基因剪接变异体.通过PCR定向克隆策略,构建了覆盖HAS3基因5′端侧翼区起始密码子ATG上游约4.3 kb区域的一系列HAS3基因启动子荧光素酶报告基因重组体.启动子活性分析表明,HAS3基因启动子定位于转录起始位点附近约450 bp的区域内.转录因子结合位点分析表明,HAS3基因启动子缺乏典型的TATA盒,但含有典型的GC盒以及C/EBP等其它潜在的转录因子结合位点. 结果提示,Sp1和C/EBP等转录因子可能参与HAS3基因的转录调控.     

氨基酸锌化合物的研究进展

氨基酸锌作为一种重要的营养添加剂,在补充人体微量元素方面有着重要的作用,本文重点综述了氨基酸锌制备的方法以及制备过程中的影响因素。     

厚囊蕨类植物VA菌根的初步研究

对１０种厚囊蕨类植物的ＶＡ菌根状况以及这些植物根际土壤中的ＶＡ菌根真菌进行了研究,结果发现１０种植物的根部全部感染有ＶＡ菌根。从这１０种植物的根际土壤中分离鉴定了分属于３个属的９种ＶＡ菌根真菌,其中,球囊霉属和无梗囊霉真菌是这些植物的根际土壤中的优势类群。ＶＡ菌根对厚囊蕨类植物的进化可能具有重要的意义。     

人β3肾上腺素受体激动剂快速筛选模型的建立

目的:β3肾上腺素受体 (beta-3 adrenergic receptor,ADRB3)是β肾上腺素受体的一个亚型,是一个公认的减肥药和抗2型糖尿病药物研发的重要分子靶点,构建其激动剂筛选模型具有重要意义.方法:以ADRB3发挥作用的细胞内信号通路为理论依据,在细胞水平上构建了以荧光素酶为报告基因的人ADRB3激动剂药物筛选模型,并对部分实验条件进行了快速简易优化.结果:已知的ADRB3激动剂异丙肾上腺素和倍他福林均能够有效激活该筛选模型中pCRE-luc报告基因质粒的表达,使其表达增加3倍以上.结论:该筛选模型构建成功.目前该模型已用于以ADRB3为靶点减肥新药筛选.     

新基因PRR11的克隆、原核表达及鉴定

克隆新基因PRR11的开放阅读框区,构建其原核表达载体,并进行表达检测及鉴定.以Hela细胞cDNA为模板,RT-PCR扩增PRR11基因,克隆入原核表达载体PET-28a中,酶切、测序鉴定确认获得PRR11基因的重组原核表达载体PET-28a-PRR11.然后把PET-28a-PRR11重组载体转化到BL21中,经IPTG诱导蛋白表达,提取细胞蛋白并采用SDS-PAGE和蛋白质免疫印迹法检测目的蛋白的表达情况.结果表明成功扩增了PRR11基因,双酶切、测序鉴定证实目的基因成功克隆到原核表达载体PET-28a中,目的蛋白成功表达.成功构建的PRR11基因的原核表达载体,及PRR11的重组蛋白表达产物,为进一步研究PRR11的基因功能奠定了基础.     

rhBMP-2基因转染小鼠间充质干细胞的成骨活性和BMP-2的释放规律分析

通过pcDNA3.1-rh BMP-2质粒转染小鼠间充质干细胞C3H10T1/2研究其成骨能力和增殖效应,探讨BMP-2的释放规律。将预先准备好的重组rhBMP-2质粒转染至C3H10T1/2细胞,利用G418抗药性筛查转染成功的细胞。将研究实验细胞分为转染组、空载组、空白组。通过ELISA检测各组细胞上清液中的BMP-2含量,CCK-8试剂盒检测各组细胞的增值活性,通过测定ALP活性和进行ALP、钙茜素红染色,检测各组细胞成骨活性。结果显示转染组BMP-2浓度随着时间推移逐渐达到高峰并维持一段时间,各检测点均明显高于空白组和空载组(p0.05),转染组细胞较其余两组更具增殖活性、成骨活性(p0.05)。此结果表明C3H10T1/2细胞是pcDNA3.1/rhBMP-2重组质粒的良好宿主,转染后能在一定时间内平稳和持续地表达外源性BMP-2,有较强诱导细胞成骨分化能力。     

云南热带蕨类植物根际土壤中的六种VA菌根真菌

从云南热带地区野生或从野外移栽于温室中的蕨类植物根际土壤中分离得到六种VA菌根真菌：双网无梗囊霉Acaulospora bireticulata Rothwell et Trappe,细凹无梗囊霉Acaulospora scrobiculata Trappe,瘤状无梗囊霉Acaulospora tuberculata Janos ＆ Trappe,多梗球囊霉 Glomus multicaule Gerdemann ＆ Bakshi,棒孢硬囊霉 Sclerocystis clayisporaTrappe．帚状硬囊霉Sclerocystis coremioides Berk．＆ Broome,其中,瘤状无梗囊霉,多梗球囊霉和帚状硬囊霉为我国的3个新记录种。本文对这六种vA菌根真菌的主要形态学特征进行了描述,并对蕨类植物的VA菌根进行了讨论。     

HIV-1包膜蛋白gp41优势抗原的构建及可溶性表达

目的:筛选1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)中国流行株中包膜蛋白gp41的优势抗原片段,构建具有区域流行代表性的HIV-1 gp41重组抗原,为改进现有HIV-1初筛试剂盒中使用的同类抗原奠定基础。方法:利用免疫斑点杂交和生物信息学方法,从收集自重庆、广州、上海的区域代表性150份HIV-1感染者血清标本中筛选gp41抗原性强的候选样本,利用RT-PCR及巢式PCR方法扩增包含重要抗原表位决定蔟的gp41基因片段,与原核表达载体pQE30连接,转化大肠杆菌M15构建gp41重组抗原表达菌株,表达后经亲和层析纯化、SDS-PAGE和Western印迹鉴定。结果:兔源HRP标记的gp41多抗能识别标本中gp41抗原性差异,得到候选样本,扩增包含gp41主要抗原表位片段;构建了包含gp41抗原表达簇的重组原核表达质粒,表达、纯化后经His标签抗体Western印迹鉴定为阳性。结论:高纯度的重组优势gp41抗原的构建和鉴定,为进一步改进现有HIV初筛诊断奠定了基础。     

人PRR11启动子的结构与功能初步分析

PRR11（proline-rich protein 11,PRR11）是我们最近发现的一个新的肿 瘤相关基因.初步研究表明, PRR11参与细胞增殖、细胞周期和细胞癌变等多种生 物学过程．为了进一步研究PRR11基因的转录调控机制并全面解析其功能,本研究 对PRR11基因的启动子进行了克隆鉴定和初步分析．首先,应用5' RACE（rapid amplification of cDNA ends,cDNA末端快速扩增）技术鉴定了PRR 11基因的转 录起始位点,发现了其具有多个转录起始位点．通过PCR定向克隆和DNA blunting 技术,构建了6个相互重叠并覆盖PRR 11基因转录起始位点附近约2.0 kb区域的 PRR 11基因启动子荧光素酶报告基因重组体．启动子活性分析表明,PRR 11基因 启动子主要定位于转录起始位点附近-563 bp～+341 bp的区域内．采用转录因子 结合位点预测分析软件分析表明,PRR 11基因启动子缺乏典型的TATA盒,但含有 典型的GC盒、CCAAT盒以及潜在的经典转录因子E2F1和MYB的结合位点,提示Sp1、 NF-Y、E2F1和MYB等经典转录因子可能参与PRR 11基因的转录调控．     

云南热带蕨类植物根际土壤中的六种VA菌根真菌

从热带地区野生或从野外移栽于温室中的蕨类植物根际土壤中分离得到六种ＶＡ菌根真菌：双网无梗囊霉Ａｃａｕｌｏｓｐｏｒａ ｂｉｒｅｔｉｃｕｌａｔａ Ｒｏｔｈｗｅｌｌ ｅｔ Ｔｒａｐｐｅ,细凹无梗囊霉Ａｃａｕｌｏｓｐｏｒａ ｓｃｒｏｂｉｃｕｌａｔａ Ｔｒａｐｐｅ,瘤状无梗囊霉Ａｃａｕｌｏｓｐｏｒａ ｔｕｂｅｒｃｕｌａｔａ Ｊａｎｏｓ ＆ Ｔｒａｐｐｅ,多梗球囊霉Ｇｌｏｍｕｓ ｍｕｌｔｉｃａｕｌｅ Ｇｅｒｄ