| HIV-1包膜蛋白gp41优势抗原的构建及可溶性表达 |
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| 引用本文： | 杜刚,江蒙蒙,尹林,王宏萍,周晓明.HIV-1包膜蛋白gp41优势抗原的构建及可溶性表达[J].生物技术通讯,2011,22(6):764-768. |
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| 作者姓名： | 杜刚 江蒙蒙 尹林 王宏萍 周晓明 |
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| 作者单位： | 1. 上海市公共卫生临床中心,上海,201508
2. 苏州大学基础医学院,江苏苏州,215006 |
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| 基金项目： | 复旦大学新教师启动基金，上海市公共卫生临床中心资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:筛选1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)中国流行株中包膜蛋白gp41的优势抗原片段,构建具有区域流行代表性的HIV-1 gp41重组抗原,为改进现有HIV-1初筛试剂盒中使用的同类抗原奠定基础。方法:利用免疫斑点杂交和生物信息学方法,从收集自重庆、广州、上海的区域代表性150份HIV-1感染者血清标本中筛选gp41抗原性强的候选样本,利用RT-PCR及巢式PCR方法扩增包含重要抗原表位决定蔟的gp41基因片段,与原核表达载体pQE30连接,转化大肠杆菌M15构建gp41重组抗原表达菌株,表达后经亲和层析纯化、SDS-PAGE和Western印迹鉴定。结果:兔源HRP标记的gp41多抗能识别标本中gp41抗原性差异,得到候选样本,扩增包含gp41主要抗原表位片段;构建了包含gp41抗原表达簇的重组原核表达质粒,表达、纯化后经His标签抗体Western印迹鉴定为阳性。结论:高纯度的重组优势gp41抗原的构建和鉴定,为进一步改进现有HIV初筛诊断奠定了基础。
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| 关 键 词： | 1型人免疫缺陷病毒 包膜蛋白gp41 抗原表位 斑点杂交 亲和层析 |
Construction and Prokaryotic Expression of Soluble HIV-1 gp41 Dominant Epitopes |
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| DU Gang,JIANG Meng-Meng,YIN Lin,WANG Hong-Ping,ZHOU Xiao-Ming.Construction and Prokaryotic Expression of Soluble HIV-1 gp41 Dominant Epitopes[J].Letters in Biotechnology,2011,22(6):764-768. |
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| Authors: | DU Gang JIANG Meng-Meng YIN Lin WANG Hong-Ping ZHOU Xiao-Ming |
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| Institution: | DU Gang1,JIANG Meng-Meng2,YIN Lin1,WANG Hong-Ping1,ZHOU Xiao-Ming1 1.Shanghai Public Health Clinical Center Affiliated to Fudan University,Shanghai 201508,2.Basic Medicine Department,Soochow University,Suzhou 215006,China |
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| Abstract: | Objective: To prepare the major antigen fragment of gp41 of HIV-1 based on main epidemic strains in China and to construct representative gp41 recombinant antigen of HIV-1 for further improving the efficacy of current HIV screening test.Methods: Combined with viral load of each sample,dot blot and bioinfomatic analysis were to identify two candidate samples from 150 HIV-1 postive serums collected from Chongqing,Guangzhou and Shanghai.Subsequently,RT-PCR and nested PCR were performed to synthesize gp41 epito... |
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| Keywords: | HIV-1 envelope glycoprotein dominant gp41 epitope dot blot affinity chromotograhpy |
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