仙台病毒核衣壳蛋白基因的克隆与原核表达

目的利用原核表达系统表达仙台病毒(Sendai Virus,SV)核衣壳蛋白。方法根据GenBank上发表的仙台病毒(Sendai Virus,SV)核衣壳蛋白基因序列,设计并合成一对引物,通过RT-PCR扩增出核衣壳蛋白全长cDNA序列,将其克隆至原核表达载体pET-30a,转化大肠杆菌BL21(DE3)PlysS,于37℃1mmol/LIPTG条件下诱导表达,大肠杆菌裂解物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约60×103处出现一新蛋白带,与预期目的蛋白分子量相符。结果Western blot检测表明,表达产物能与兔抗SV阳性血清发生特异性反应,出现单一反应带,表明其具有免疫原性。结论为建立以重组NP蛋白为诊断抗原检测SV奠定基础。     

金黄色葡萄球菌重组GapC蛋白的GAPDH活性及免疫原性分析

为研究金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)表面GapC蛋白的GAPDH活性、免疫原性及免疫保护作用, 应用PCR方法扩增出S. aureus的gapC基因, 插入到pQE-30载体相应位点, 构建重组质粒pQE/gapC。将其导入宿主菌E.coli M15(pREP4)后, IPTG诱导表达。重组蛋白纯化后进行GAPDH活性检测, 并与灭活全菌体分别免疫健康家兔。然后, 应用ELISA方法检测血清中IgG抗体水平及IFN-g、IL-4细胞因子浓度, 并用1.0×108CFU/mL S. aureus菌株Wood46对免疫家兔攻毒。SDS-PAGE结果显示, GapC蛋白在E. coli M15(pREP4)中获得表达; 经GAPDH活性检测及Western Blot检测, 重组蛋白具有较高的GAPDH活性和抗原特异性; 经ELISA检测, GapC蛋白及全菌体组兔血清中IgG抗体水平迅速升高, 并在加强免疫后第28天达到最高(1:64 000), 加强免疫后第14 d, 血清中细胞因子IFN-g和IL-4浓度与对照组相比, 显著升高(P<0.05), 而全菌体免疫组升高不明显(P>0.05); 攻毒结果为蛋白免疫组家兔获得一定的免疫保护(4/5)。以上结果表明, 表达的重组GapC蛋白具有GAPDH活性、较好的免疫原性及免疫保护力, 可作为深入研究S. aureus基因工程疫苗的良好靶向。     

应用改良庆大霉素保护试验检测肠炎沙门氏菌侵袭力表型

肠炎血清型沙门氏菌 (Salmonella enterica serovar Enteritidis,SE) 是引起肠炎和全身感染重要的沙门氏菌血清型之一,了解沙门氏菌侵袭力表型对阐明其感染致病机制至关重要。传统庆大霉素保护试验 (GPA) 存在通量低、重复性差等缺点。文中利用96孔细胞培养和多孔道移液的高通量优势,结合菌落分区微量滴板计数法改良了传统GPA试验方案。应用改良的GPA方法检测了16株SE菌株对非吞噬细胞 (HT-29) 的入侵表型和43株SE菌株对吞噬细胞 (RAW264.7) 的胞内复制表型。通过比较分析SE强、弱菌株JL228和LN248对吞噬细胞 (RAW264.7) 的侵袭力表型发现,改良的GPA得出的数据组内和组间变异系数低、数据重复性强,胞内复制表型也与显微观察结果相符。通过实践应用发现,改良的GPA方法具有通量高、重复性强、结果可靠兼具省时、省力等优点,可作为沙门氏菌菌株侵袭力表型检测的更新方案,为进一步阐明其致病机制提供了更科学有效的方法。     

水貂阿留申病毒抗体依赖性感染增强作用的可能机制探讨

水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease parvovirus,AMDV)主要侵害宿主的单核-巨噬细胞,引起持续性感染。病毒感染后可产生免疫复合物疾病、高γ球蛋白血症和高水平的抗体,抗病毒抗体在体内不能有效地清除病毒,反而通过Fc受体介导的抗体依赖性感染增强作用(Antibody-dependent enhancement,ADE)使感染增强,并造成免疫系统功能紊乱。目前,ADE的可能感染致病机制为①抗体复合物与FcR受体、补体成分C3或C1q、C1qR结合,促进了病毒与细胞的吸附;②免疫复合物通过上调模式识别受体的负调控因子抑制了干扰素介导的抗病毒机制;③通过IL-10的早期活化,抑制机体的先天性免疫抗病毒机制。本文就AMDV ADE作用的几种可能机制以及ADE在致病过程中的作用进行了探讨,以期为ADE的分子机制研究、病毒的致病机理及疫苗设计提供参考。     

乳酸菌在抗病原微生物感染中的作用

乳酸菌作为益生菌中主要的一大分类,在食品、医药和饲料行业中具有广泛应用。乳酸菌具有多种重要生理功能,如维持肠道微生态的平衡、促进肠道蠕动消化、抗高血压、降低血清胆固醇、黏附或降解有害物质等。近年来研究表明,乳酸菌能够通过不同机制抑制病原微生物感染。本文就乳酸菌增强宿主固有免疫和适应性免疫、直接抑制病毒和细菌、增强肠道上皮细胞屏障功能等作用机制的相关研究进展进行综述。     

鸭甲型肝炎病毒VP1研究进展

甲型鸭肝炎病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)是造成雏鸭死亡率高的主要原因之一,给养鸭业带来了巨大的经济损失.而其主要衣壳蛋白VP1由于具有多种优势抗原表位,能够刺激机体产生中和抗体,被广泛认为是DHAV遗传变异的重要依据.本文主要介绍了VP1常见的突变位点及其对病毒特性的影响、VP1的改造和VP1的遗传演化,为进一步了解DHAV的遗传进化,疫苗开发与选择提供参考.     

金黄色葡萄球菌重组GapC蛋白的GAPDH活性及免疫原性分析

为研究金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)表面GapC蛋白的GAPDH活性、免疫原性及免疫保护作用, 应用PCR方法扩增出S. aureus的gapC基因, 插入到pQE-30载体相应位点, 构建重组质粒pQE/gapC。将其导入宿主菌E.coli M15(pREP4)后, IPTG诱导表达。重组蛋白纯化后进行GAPDH活性检测, 并与灭活全菌体分别免疫健康家兔。然后, 应用ELISA方法检测血清中IgG抗体水平及IFN-g、IL-4细胞因子浓度, 并用1.0×108CFU/mL S. aureus菌株Wood46对免疫家兔攻毒。SDS-PAGE结果显示, GapC蛋白在E. coli M15(pREP4)中获得表达; 经GAPDH活性检测及Western Blot检测, 重组蛋白具有较高的GAPDH活性和抗原特异性; 经ELISA检测, GapC蛋白及全菌体组兔血清中IgG抗体水平迅速升高, 并在加强免疫后第28天达到最高(1:64 000), 加强免疫后第14 d, 血清中细胞因子IFN-g和IL-4浓度与对照组相比, 显著升高(P<0.05), 而全菌体免疫组升高不明显(P>0.05); 攻毒结果为蛋白免疫组家兔获得一定的免疫保护(4/5)。以上结果表明, 表达的重组GapC蛋白具有GAPDH活性、较好的免疫原性及免疫保护力, 可作为深入研究S. aureus基因工程疫苗的良好靶向。     

葡萄球菌毒力调控中的群体感应系统

葡萄球菌细胞密度依赖性的多基因表达调控(群体感应)系统,是通过自身诱导与信号转导途径使其感知环境信息,调节多种毒力因子的表达。这些毒力因子的表达受agr、sae以及arl等多种基因表达系统的紧密调控,同时也受Sar家族蛋白的调节。此外,葡萄球菌毒力及抗性密切相关的生物膜形成与发育,也受群体感应系统的影响。对群体感应系统的自身诱导作用的干扰,原则上可成为寻找新型抗菌药物较适合的途径。     

猫麻疹病毒的病原学与致病性研究进展

猫麻疹病毒（Felinemorbillivirus,FeMV或FmoPV）是副黏病毒科（Paramyxoviridae）麻疹病毒属（Morbillivirus）中新发现的病毒，通常在患有泌尿系统疾病的家猫尿液中检出，且在世界范围内分布广泛，但FeMV和肾脏疾病之间的联系存在争议。此外，该病毒的组织嗜性、致病过程以及吸附入侵宿主细胞的机制也尚未明晰，但与同属的其他麻疹病毒具有一定共同特征，如信号淋巴细胞激活分子家族成员1(Signalling lymphocyte activation molecule family member 1, SLAMF1)可提高宿主细胞对FeMV的敏感性。本文从FeMV的发现出发，总结了FeMV病原学、流行病学以及致病特点，并归纳讨论了其与肾小管间质肾炎（Tubulointerstitial nephritis, TIN）的潜在联系，以期为深入揭示FeMV致病机制提供一定的参考。