临床检验前和检验后阶段的管理

临床实验室长期致力于检验质量,已使其产生错误发生率的西格玛水平为4~5,其超过大多数其他医疗领域。然而,对检验前及检验后阶段错误率的更深的理解及他们对患者潜在的伤害已导致加强对实验室的要求,要求实验室对其直接控制之外的活动承担更大的责任。认可机构有对检验外阶段有效管理的相关要求。有各种免费在线资源可用来帮助管理检验外阶段,国际临床化学及检验医学联合会实验室差错和患者安全工作组最近发表的质量指标和提出性能水平提供了特别有用的基准数据。通过建立在现有的质量管理经验、定量的科学背景及对信息技术的精通,临床实验室适合在实验室范围外在减少差错和提高患者安全方面发挥更大的作用。     

逆转录病毒载体pOZ-KLF5的构建及鉴定

为研究KLF5的相互作用蛋白从而深入探索其生物功能,构建了C端带有FLAG、HA、6x His三标签的p OZ-KLF5真核表达逆转录病毒载体。p OZ-KLF5载体可通过一次转录得到双顺反子转录单位,即一个转录物能表达两种独立存在的蛋白质:三标签融合蛋白KLF5-3x Tag和筛选标记——白细胞介素-2受体α(IL-2Rα)。通过偶联IL-2Rα抗体的磁珠成功筛选出KLF5-3x Tag表达阳性的293T细胞,经Western-blot检测细胞内KLF5-3x Tag表达情况及其对293T细胞增殖及周期的影响,发现KLF5-3x Tag能够促进细胞克隆的形成并使S期细胞增多,且可被已知E3泛素连接酶WWP1降解,与已有报道一致。进一步通过免疫沉淀实验证明了与KLF5融合的标签的免疫反应性。该质粒的成功构建为研究KLF5相互作用蛋白及深入探索其生物功能奠定了基础。     

茉莉酸诱导桑枝对桑天牛卵啮小蜂的引诱作用及桑枝挥发物组分分析

【目的】探讨茉莉酸诱导的桑树Morus alba枝挥发物对桑天牛卵啮小蜂Aprostocetus prolixus趋性行为的影响,研究桑枝挥发物的动态变化规律,为揭示茉莉酸诱导桑枝产生的间接抗虫作用机理提供理论依据。【方法】本试验利用嗅觉测定仪,研究了不同浓度茉莉酸处理24,48和72 h后的桑枝对桑天牛卵啮小蜂的引诱作用,并采用气相色谱-质谱联用仪(GC/MS)对茉莉酸(1 000μmol/L)处理不同时间后的桑枝挥发物组分进行了分析。【结果】在10μmol/L茉莉酸处理后的不同时间内,桑枝对桑天牛卵啮小蜂均未表现出明显的引诱作用;当茉莉酸浓度为100μmol/L时,桑枝仅在处理48 h后对桑天牛卵啮小蜂具有显著的引诱活性;然而,经1 000μmol/L茉莉酸处理24 h和48h后,桑枝对桑天牛卵啮小蜂的引诱活性明显高于对照(24 h,P0.05;48 h,P0.01),72 h后桑枝的引诱作用消失。Spearman等级相关性分析表明,茉莉酸浓度与桑枝对桑天牛卵啮小蜂的引诱百分率显著正相关(ρ=0.791,P=0.006)。茉莉酸(1 000μmol/L)处理桑枝挥发物组分包括醇类、酯类、萜类物质、芳香族化合物和含氮化合物,其中萜类物质种类最多(13种)。随着处理时间的变化,桑枝挥发物组分及总释放速率也随之发生改变。处理24 h后,桑枝释放出18种组分,比对照多11种组分,其总释放速率也明显提高,为对照的8.2倍;48 h后桑枝释放出22种组分,比对照多15种组分,其总释放速率进一步提高,为对照的44.6倍;72 h后桑枝释放出13种组分,比对照多6种组分,其总释放速率大幅降低,为对照的3.9倍,但与对照无显著差异。【结论】随着茉莉酸浓度的提高,桑枝对桑天牛卵啮小蜂的引诱活性逐渐增强。茉莉酸能诱导桑枝挥发物的大量释放及新组分的产生。     

产前超声在中孕期胎儿严重先天性心脏病筛查中的应用

目的:探究产前超声检查在中孕期胎儿严重先天性心脏病(CHD)筛查中的应用。方法:选择2012年1月至2014年1月在我院妇产科进行产前常规超声检查的孕妇12076例,年龄22-41岁,平均(28.6±8.3)岁,孕周20-36周,平均(25.2±6.7)周。将符合纳入排除标准的孕妇8953例作为研究对象,其中初产妇6023例,经产妇2930例。对纳入研究的孕妇行彩色多普勒超声检查,并对妊娠结局进行追踪,将确诊情况与筛查结果进行比较分析。结果:产前彩色多普勒超声诊断出胎儿CHD38例,经尸检或新生儿彩色多普勒超声检查均确诊为CHD,对胎儿期未筛查出CHD的孕妇进行新生儿彩色多普勒超声检查,确诊4例,产前超声检查胎儿CHD检出率为90.48%(38/42),检出准确率100%(38/38)。结论:彩色多普勒超声筛查孕中期胎儿CHD,灵敏度和特异性高,安全无创伤,操作简便快速,值得推广为产前筛查的首选方法。     

一种新型生物聚合物Ss的流变学性质及成胶特性

本文对一种新型生物聚合物Ss的流变学性质及成胶特性进行了研究。该聚合物的流变学性质与黄原胶类似, 具有高粘性、假塑性及耐盐性。0.6％以上的Ss溶液加热(≥75℃)并冷却至室温可形成凝胶, 加入金属离子可以改变其成胶所需的最低聚合物浓度及所成凝胶的性质。利用质构分析(TPA)方法, 研究了不同聚合物浓度和钙离子浓度下凝胶的质构性质。钙离子的加入能促进凝胶的形成, 凝胶的硬度、弹性、内聚性随聚合物浓度及钙离子浓度的增加而增大, 但大于最适钙离子浓度时, 硬度、弹性及内聚性均有所下降。     

临床实验室关键过程的质量指标和规范

以国外实验室质量管理的最新经验为基础,提出一种识别实验室关键过程质量指标,并制定不同医疗环境下其所对应的质量规范的方法。要求参与实验室每2个月提供1次其实验室当期的质量指标数据,并以中位数为初步规范。共识别了12项关键过程质量指标,其中分析前3项,分析中4项,分析后5项,并制定了相应的规范。我国临床实验室质量管理应给予分析前和分析后质量指标更多的关注。     

不同浓度A2E对离体猪视网膜色素上皮细胞的影响

目的评价体外合成的A2E对猪视网膜色素上皮（RPE）细胞的细胞活力和生物学特性影响,为进一步研究A2E在RPE细胞相关疾病中的作用提供细胞模型。方法利用全反式视黄醛和乙醇胺体外合成脂褐质荧光基团A2E。不同浓度的A2E（0,50,75,100μmol／L）作用第3代体外培养的猪RPE细胞30,45,60,90min,换10％FBS DMEM-F12培养液孵育24h后,倒置荧光显微镜观察荧光强度,IPP6．0软件灰度扫描定量荧光强度。采用MTT法检测A2E作用细胞各个时间段的吸光度值,应用SPSS11．0软件包对数据进行统计学分析,评价A2E的细胞毒性及RPE细胞活性。结果A2E被RPE细胞摄取后主要分布于细胞核周围,具有自发荧光。MTT实验及荧光灰度扫描结果显示,不同浓度的A2E被细胞摄取后细胞活力和荧光灰度扫描结果不同,以50μmol／L浓度A2E作用RPE细胞60min时,细胞内荧光强度高同时细胞活力强。结论体外培养的猪RPE细胞摄取体外合成的50μmol／L A2E 60min后细胞对A2E的摄取较多,A2E对细胞的毒性相对较低,该条件下进行A2E对离体猪RPE细胞的研究较好。     

HBV X基因的表达及在真核细胞中对内质网压力的作用

运用PCR技术获得HBx基因,分别克隆到原核表达载体pET-his和真核表达载体pcDNA3.1(-)上.重组质粒pET-his-HBx转化大肠杆菌BL21(DE3)后, IPTG诱导表达,利用Ni柱纯化后的蛋白免疫家兔,获得特异性的抗-HBx兔抗血清.重组质粒pcDNA3.1(-)-HBx分别转染HepG2和Hep3B细胞系后,经RT-PCR和Western blot检测,证明HBx可以在这两种细胞系中表达.通过报告基因的表达研究了HBx对XBP1和GRP78启动子的激活活性,结果表明瞬时转染HBx的细胞系中,XBP1和GRP78启动子介导的荧光素酶活性比相应的对照细胞增加了3～7倍.通过RT-PCR分析证明,转染了HBx的细胞中XBP1 mRNA发生了剪切.因此,可以初步推断HBx在HepG2和Hep3B细胞中的表达可以引起内质网压力反应,为进一步阐明HBx表达对内质网的影响和肝脏病原发生机制奠定了基础.     

护理干预对妊娠糖尿病患者血糖控制的影响

目的:研究并分析护理干预对妊娠糖尿病患者血糖控制的影响,以最大限度的确保妊娠糖尿病患者与胎儿的生命健康。方法:以我院收治的妊娠糖尿病患者320例,将患者进行随机分组,对照组的160例患者进行常规护理,干预组的160例患者在常规护理的基础上进行科学与系统的护理干预,对比两组患者的临床治疗效果。结果:干预组患者空腹及餐后2小时的血糖控制均明显优于对照组患者,差异具有显著性(P0.05);干预组患者并发症发生率明显低于对照组,差异具有显著性(P0.05)。结论:给予妊娠糖尿病患者积极的护理干预,不仅可有效控制患者的血糖水平,且可在一定程度上降低患者的妊娠期并发症,保障新生儿的身心健康,是一种积极、可行的护理措施,值得推广。     

一种原代肺上皮细胞体外培养方法

目的:建立一种操作简便、重复性好的体外培养BALB/c小鼠原代肺上皮细胞(AEC)的方法,探究不同发育阶段小鼠AEC中柯萨奇病毒和腺病毒受体(CAR)表达量的变化,及其对小鼠原代AEC贴壁的作用。方法:手术获取小鼠肺组织,机械法剪碎肺组织,PBS缓冲液清洗肺组织块数次去血,联合使用链霉蛋白酶和胶原酶Ⅰ消化、分离肺组织块获得单细胞悬液,差速离心逐步清除其他种类的细胞,达到纯化AEC的作用。细胞在Ⅰ型鼠尾胶原蛋白包被过的细胞板中培养,光学显微镜下观察不同发育阶段AEC贴壁、生长状态;免疫荧光法鉴定AEC,检测AEC中CAR的表达量。结果:体外获得不同发育阶段BALB/c小鼠的原代AEC;胎鼠、幼鼠AEC贴壁并开始增殖所需时间较成体鼠短;胎鼠及幼鼠AEC中CAR的表达量明显较成体鼠高。结论:建立了稳定可重复的分离、纯化、体外培养小鼠原代AEC的方法,证明了AEC中的CAR可以促进原代AEC贴壁,为完善原代细胞培养方法提供了科学依据。