胰岛素样生长因子结合蛋白研究进展

胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBPs)是一组能够和胰岛素样生长因子(IGF)以高亲和力结合的可溶性蛋白,它们不仅携带IGF,延长IGF的半衰期,而且还调控IGF的生物活性, 影响IGF的分布.在不同的实验条件下,IGFBPs能够增强或抑制IGF的活性.另外,又发现IGFBPs有独立于IGF之外的内在的生物活性.简单介绍一下近年来IGFBPs在分子结构、基因表达、翻译后的修饰及生物功能等方面的研究.     

人脂多糖结合蛋白基因的克隆及序列测定

采用PCR技术,从人肝cDNA文库中扩增获得了1.5 kb的脂多糖结合蛋白（LBP）的全长基因.序列分析表明,克隆的LBP基因编码的氨基酸序列与文献报道相同.     

多肽生长因子受体的研究进展

多肽生长因子受体是介导多肽生长因子对细胞的调控作用的膜结合糖蛋白．它们在结构上都可分成胞外区、跨膜区和胞内区三个区段．根据这些区域的结构特点,特别是有无蛋白激酶结构域,提出了新的分类方法;并比较了各类生长因子受体信号转导的异同．     

从少量转染细胞中同时快速提取总RNA和基因组DNA

采用4mol / L LiCl将DNA和RNA分相,建立了同时从少量转染细胞中快速提取细胞总RNA和大分子基因组DNA的方法.与以前的方法相比,本法快速、简便、经济,尤其适合应用在哺乳动物细胞基因表达与调控的研究中．     

通用真核质粒表达载体的构建

利用真核基因表达调控的原理,以pSV2-dhfr为起始材料,构建了两个通用的真核质粒表达载体pMAML1-dhfr和pMAML2-dhfr,它们包含人巨细胞病毒立即早期启动子/增强子调控元件,由两个转录方向相同或相反的表达单元组成.以荧火虫荧光素酶基因为报道基因,β-半乳苷酶基因为内对照,借助COS-7短暂表达系统,研究了它们对荧光素酶表达的影响,并比较了它们与出发载体pSV2-dhfr的相对强弱.     

E．coli分泌表达载体的构建和人表皮生长因子在E．coli中的分泌性表达

采用ＰＣＲ技术从Ｅ．ｃｏｌｉ基因组片段中克隆出碱性磷酸酯酶（ＰｈｏＡ）的启动子和信号肽序列．在ＰｈｏＡ启动予５＇端设计了ＥｃｏＲⅠ酶切位点,在信号肽编码序列３＇端设计了ＨｉｎｄⅢ酶切位点．将ＰＣＲ产物酶切后ＥｃｏＲⅠ－ＨｉｎｄⅢ片段克隆至ｐＢＲ３２２的ＥｃｏＲⅠ－ＨｉｎｄⅢ位点,组构出含有ＰｈｏＡ启动子和信号肽序列的分泌表达载体ｐＢＭ－Ｐｈｏ－１．之后将人表皮生长因子的成熟肽基因克隆至该载体,使之在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得分泌表达,另采用ｐＩＮⅢ载体系统以分泌方式表达了人表皮生长因子。     

人转化生长因子β1在大肠杆菌中的分泌表达研究

根据表达产物在大肠杆菌细胞中的定位,可将外源基因的表达分成胞内直接表达和分泌表达两种形式:其中分泌表达又可进一步分成周质分泌表达和胞外培养基外泌(excretion)表达两种方式。采用分泌表达可获得具有天然一级结构、正确折叠、组装的重组蛋白,但因表达水平低一直难以用于工程研究。近年来的研究表明,新生多肽链的跨内膜转运     

用酵母双杂交系统研究胰岛素样生长因子-1突变体与其结合蛋白-3的相互作用

为研究胰岛素样生长因子 1(IGF1)及其突变体与IGF结合蛋白 3(IGFBP3)的相互作用 ,针对IGF1的第 3、4、15、16位氨基酸残基 ,采用定点突变的方法构建了 [Y15L16 ]IGF1和 [Q3A4Y15L16 ]IGF1。然后分别将IGF1/IGF1突变体和IGFBP3cDNA克隆至酵母表达载体pGBT9和pACT2中 ,利用酵母双杂交技术检测IGF1/IGF1突变体和IGFBP3之间的相互作用。结果表明用酵母双杂交系统检测IGF1与其结合蛋白的结合力是可行的 ,构建的这两个IGF1突变体与IGFBP3的结合力 ,与天然IGF1相比 ,结合力大大减小     

成纤维细胞生长因子的双受体系统

成纤维细胞生长因子(FGFs)对于细胞代谢的刺激作用是通过双受体系统（dual-receptor system）介导的.该系统包括一个酪氨酸激酶受体家族(FGFRs)及肝素硫酸蛋白多糖(HSPG).目前已知有4种FGFRs基因,其转录过程表现出剪切多样性.FGFs与FGFRs的结合表现出交叉特异性.HSPG可促进FGFs与FGFRs的结合和受体二聚体的形成,并增强FGFs对细胞调控的精度.FGFRs通过激活不同下游信号分子影响细胞有丝分裂、神经细胞轴突生长、胚胎发育等.     

猪骨羟基磷灰石的结构稳定性

在不同酸碱条件下对猪骨处理,利用转靶Ｘ射线衍射（ＸＲＤ）、红外吸收（ＩＲ）、差热分析（ＤＴＡ）分别对猪骨的物相和微结构进行了分析,并与纯的羟基磷灰石（ＨＡ）进行了比较,研究了猪骨中纳米羟基磷灰石的结构稳定性。实验表明猪骨在弱酸弱碱溶液中羟基磷灰石相是稳定的,但晶粒尺寸、结晶度和非晶含量有所变化。６００°Ｃ的高温处理,可改善其结晶度,这对开发新的骨移植材料有重要意义