人脑髓鞘碱性蛋白的分离纯化和鉴定

 本文介绍了从人脑中分离纯化髓鞘碱性蛋白的方法,人脑组织匀浆经甲醇—氯仿脱脂、酸提取、硫酸铵沉淀和羧甲基纤维素柱层析,得到了纯化的髓鞘碱性蛋白。该蛋白在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中为单一带,分子量为21kD。在聚焦电泳中测得其等电点在pH10以上,氨基酸组成分析结果也与文献值接近。这为进一步研究人脑髓鞘碱性蛋白的抗原性创造了条件。     

人转化生长因子β1在大肠杆菌中的表达——Ⅰ.胞内直接表达

采用PCR技术 ,扩增了人转化生长因子β1 (hTGFβ1 )成熟肽基因 ,并对其进行了全序列测定 .采用DH5α/ pBV2 2 0表达系统 ,使TGFβ1在大肠杆菌胞内的表达达到 1 6 % .通过N端氨基酸序列测定和免疫印迹分析 ,证实重组蛋白为hTGFβ1单体蛋白 .采用谷胱甘肽法或CHAPS/DMSO法 ,使重组蛋白的复性率达到 30 % .通过纯化获得了银染一条带的重组蛋白 ,MTT法对Mv1Lu细胞的测活表明 ,重组蛋白具有较强的生物活性     

人尿激酶原乳腺定位转基因小鼠的建立

应用大鼠β乳酪蛋白基因的上游调控序列和人尿激酶原ｃＤＮＡ构建成功了乳腺定位表达载体．用显微注射的手段导入到受精卵的雄前核,从注射的３００枚受精卵中,１４０枚被移植到９只假孕的受体小鼠．结果从获得的子一代小鼠中,经ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实,有３只转基因阳性的小鼠．     

bcl-2高表达细胞株的构建

利用基因转染技术,将人的bcl-2基因cDNA克隆于逆转录病毒载体pLXSN,通过PA317细胞包装成病毒后感染HeLa细胞。经PCR及蛋白质印迹证明转染成功,得到bcl-2稳定高表达株Hbc17。用顺铂诱导凋亡,Hbc17比对照细胞株H1具有明显的抗凋亡能力。为进一步研究顺铂诱导肿瘤细胞凋亡的机理奠定基础。     

鲑鱼降钙素基因在大肠杆菌中的克隆与表达

以鲑鱼基因组ＤＮＡ为模板,采用ＰＣＲ获得ｓＣＴ基因,并为ＤＮＡ序列分析所证实．以ｐＧＥＸ－３Ｘ为表达载体,利用体外定点突变技术成功地构建了融合蛋白ＧＳＴ－ｓＣＴ的重组表达质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ－ｓＣＴ,在大肠杆菌中得到高效表达,其表达量约为菌体总蛋白的３０％;利用亲合层析法对融合蛋白ＧＳＴ－ｓＣＴ进行纯化,再经Ｆａｃ－ｔｏｒΧａ酶切后获得了重组ｓＣＴ,并对其进行活性检测．初步实验证明,重组ｓＣＴ具有较强的生物活性     

人胰岛素样生长因子Ⅰ在大肠杆菌中的表达

胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)是一种含有70个氨基酸的单链碱性多肽,主要由肝脏合成,大部分存在于血液中。IGF-Ⅰ在神经营养、胚胎发育、生长迟滞和代谢调控等方面具有广阔的临床应用前景,特别是在神经系统变性疾病如肌萎缩侧索性神经炎的应用中,国外已进入Ⅱ、Ⅲ期临床。但是血浆中IGF-Ⅰ含量很低(<1mg/100L血浆),靠纯化天然IGF-Ⅰ根本无法满足基础研究和临床应用,因此通过重组     

牛脑成纤维细胞生长因子的分离纯化与鉴定

新鲜牛脑组织匀浆液经两步硫酸铵沉淀、CM-Sephadex C50 离子交换层析以及肝素-Sepharose 亲和层析,可得到纯化的酸性和碱性成纤维细胞生长因子(aFGF 和bFGF),分子量分别为13.2kD 和15.2—15.8kD.两种因子均可有效促进3T3细胞的 DNA 合成,ED₅₀分别为15.8ng/ml 和 0.32ng/ml.进一步对 aFGF 的等电点及氨基酸组成做了分析.     

固相二抗放射免疫法测定表皮生长因子

本实验制备的兔抗鼠表皮生长因子(EGF)抗血清放免效价为1:10~6,抗体的特异性强,亲和常数K为8.29×10~(-10)mol/L,最大结合容量B_(max)为2.61×10~(-10)mol/L。在固相二抗放射免疫法测定中,0.1～100ng的EGF可以竞争性抑制~(125)I-EGF的结合,Logit分析相关系数为-0.993,低限检出量为0.5ng/ml。本方法的回收率及变异系数分别为92％～102％和5.7％～7.0％。应用此方法测定小鼠颌下腺中EGF的含量约为0.66mg/g腺体。     

胰岛素样生长因子1的结构与功能研究进展

胰岛素样生长因子1(IGF1)是一种多功能细胞调控因子.它的结构特征为其促生长和物质代谢功能提供依据.集中介绍了IGF1的三维结构、IGF1与相关受体和结合蛋白的结合区以及二硫键在蛋白质折叠中的重要作用.