Kindlin-1和Kindlin-2的差异表达与食管癌的进程及流行病学特点的相关性

食管癌是中国最致命的恶性肿瘤之一,但其病因和危险因素的分子机制仍不清楚.整合素相互作用蛋白Kindlin-1和Kindlin-2可以激活跨膜受体整合素,调节肿瘤细胞的生长、侵袭和转移.本研究首次发现,在中国食管癌患者中,Kindlin-1和Kindlin-2呈现差异表达的特点.采用免疫组织化学的方法在220例食管癌患者中评估了Kindlin-1和Kindlin-2的表达情况,发现它们不仅与食管癌的进展有关,还与食管癌的各种流行病学因素有关,包括吸烟情况、家族史等.Oncomine数据库也提示,与正常食管组织相比,食管癌中Kindlin-1与Kindlin-2的表达水平都有明显升高.然而,Kindlin-1在分化良好的肿瘤中高度表达,而Kindlin-2则相反,在分化不良的肿瘤中高度表达.另外,Kindlin-1和Kindlin-2在食管癌的进展中分别起到了抑制和促进的作用.此外,本研究首次将Kindlin-1和Kindlin-2的表达水平与食管癌的家族遗传背景和生活习惯联系起来.有助于为食管癌的流行病学特点找到发病分子机制.     

大鼠β乳酪蛋白基因调控区的克隆和序列分析及乳腺定位表达载体的构建

将大鼠β乳酪蛋白的调控序列克隆于ｐＧＥＭ－４Ｚ,用ＳＰ６、Ｔ７正反向引物进行序列分析,证实其正确之后将该调控序列克隆于真核表达载体ｐＳＶＬ中,构建成功了乳腺定位表达载体。同时在其下游插入了荧光素酶报道基因,用于在乳腺细胞表达调控的研究。     

E．coli分泌表达载体的构建和人表皮生长因子在E．coli中的分泌性表达

采用ＰＣＲ技术从Ｅ．ｃｏｌｉ基因组片段中克隆出碱性磷酸酯酶（ＰｈｏＡ）的启动子和信号肽序列．在ＰｈｏＡ启动予５＇端设计了ＥｃｏＲⅠ酶切位点,在信号肽编码序列３＇端设计了ＨｉｎｄⅢ酶切位点．将ＰＣＲ产物酶切后ＥｃｏＲⅠ－ＨｉｎｄⅢ片段克隆至ｐＢＲ３２２的ＥｃｏＲⅠ－ＨｉｎｄⅢ位点,组构出含有ＰｈｏＡ启动子和信号肽序列的分泌表达载体ｐＢＭ－Ｐｈｏ－１．之后将人表皮生长因子的成熟肽基因克隆至该载体,使之在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得分泌表达,另采用ｐＩＮⅢ载体系统以分泌方式表达了人表皮生长因子。     

从少量转染细胞中同时快速提取总RNA和基因组DNA

采用4mol / L LiCl将DNA和RNA分相,建立了同时从少量转染细胞中快速提取细胞总RNA和大分子基因组DNA的方法.与以前的方法相比,本法快速、简便、经济,尤其适合应用在哺乳动物细胞基因表达与调控的研究中．