糖化酶、木聚糖酶融合蛋白在毕赤酵母中的高效表达

通过RT-PCR方法,以埃默森篮状菌(Talaromyces emersonii)总RNA为模板,克隆出糖化酶(glucoamylase,amyA)基因的成熟肽编码序列(1 857 bp),编码618个氨基酸;以类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)H10-3基因组DNA为模板,克隆出木聚糖酶(xylanaseA,xynA)基因的成熟肽编码序列(636 bp),编码211个氨基酸.通过重叠延伸PCR( SOE-PCR)得到拼接片段amyA-l-xynA,并将其克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9中,得到重组质粒pPIC9-amyA-l-xynA,重组质粒线性化后经电击转化到毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,得到了表达成功的工程菌ALX2.在ALX2发酵上清液中同时检测到糖化酶活性(10.7 U/mL)和木聚糖酶活性( 51.8 U/mL).     

CrylAb蛋白在拟环纹豹蛛体内的富集及对其体内酶活性的影响

用Cry1Ab蛋白处理的果蝇喂养拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata,在第1d、3d、5d、7d、9d、11d用酶联免疫(ELISA)检测技术测定实验组和对照组拟环纹豹蛛体内Cry1Ab蛋白含量,运用紫外分光光度法检测拟环纹豹蛛体内超氧化物歧化酶( SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性,探讨拟环纹豹蛛体内Cry1Ab蛋白的富集作用与其体内3种酶活性的关系.结果表明,从第1d至第7 d Cry1Ab蛋白在拟环纹豹蛛体内均具富集作用(p＜0 05),到第7d的时候达到最高值,达极显著差异(p＜0.01),然后逐渐降低,但仍显著高于对照(p＜0.05).SOD酶活性总体趋势是降低的,在第7d达到最低;用Cry1Ab蛋白处理拟环纹豹蛛后其体内的AChE和GSH-Px酶活性随饲养时间的延长而增加,并均高于对照组(p＜0.05).该研究证明Cry1Ab蛋白在拟环纹豹蛛体内具有富集效应,并且其体内Cry1Ab蛋白对其体内GSH-Px、AChE具有一定诱导作用,对SOD酶具有一定程度的抑制作用.     

Cry1Ab蛋白对拟环纹豹蛛胚胎发育过程中形态和化学物质含量变化的影响

利用稻田蜘蛛优势种拟环纹豹蛛为研究对象,检测Cry1Ab蛋白在拟环纹豹蛛卵囊内的含量及Cry1Ab蛋白对拟环纹豹蛛胚胎发育过程中形态特征的变化、化学物质含量和卵粒内4种保护酶活性的影响。结果表明：在胚胎发育过程中,卵粒中Cry1Ab蛋白含量随发育时间延长而减少,通过对卵粒中的化学物质的测定,发现蛋白质含量水平对照组要显著高于实验组（P〈0.05）,糖和脂肪含量对照组和实验组之间无显著差异。卵粒内超氧化物歧化酶（SOD）、乙酰胆碱酯酶（AchE）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和过氧化氢酶（CAT）4种酶活力除了GSH-Px酶活力实验组高于对照组外,其余3种酶活力均低于对照组。通过石蜡切片和液体石蜡透明观察,实验组较对照组胚胎发育历期延长。该研究证明在胚胎发育时期Cry1Ab蛋白影响了卵粒内SOD、AchE、GSH-Px和CAT酶的活力,且Cry1Ab蛋白对拟环纹豹蛛的胚胎发育产生了一定程度的影响。     

显微手术治疗囊性听神经瘤的临床研究

目的:探讨显微外科开颅治疗囊性听神经鞘瘤的肿瘤全切情况及面、听神经的保留情况。方法:回顾性分析2006年8月至2013年9月我院收治的42例经枕下乙状窦后入路开颅囊性听神经鞘瘤手术患者的临床资料,同时对37例患者进行术后随访,并对结果进行统计学分析。结果:囊性听神经鞘瘤(42例)手术全切率simpson(Ⅰ-Ⅱ级)为64.28%(27例),次全切除率(simpsonⅢ级)为26.19%(11例),部分切除率为(simpsonⅣ级)为9.53%(4例),面神经解剖保留率为71.43%(30例),面神经功能保留率为14.29%(6例),听神经解剖保留率为7.1%,听神经功能保留3例,较实质性听神经瘤的手术效果差。结论:囊性听神经瘤的面、听神经解剖与功能保护尚有难度,需要进一步提高。     

国内脂肪酶研究状况分析

基于中国期刊全数据库(CJFD)1995～2001年中脂肪酶检索数据,从基础研究和应用研究两个方面对其进行了统计分析,客观地概述和评价了国内该领域的研究状况。着重分析了国内脂肪酶研究的现状、发展趋势。结果表明,中国脂肪酶研究多集中在基础研究领域,基础研究各方面发展不平衡,国内9个城市是脂肪酶研究的核心区域,高等学校是脂肪酶研究的主要机构。     

稻田蜘蛛优势种对飞虱对叶蝉控制力的分析

系统调查结果表明,长沙地区早稻田中,蜘蛛优势种相对稳定,在水稻各生育期内均为拟水狼蛛和食虫沟瘤蛛,并无更替现象,采用灰色关联分析法,研究了长沙地区稻田蜘蛛优势种群对飞虱,叶蝉种群数量的控制程度,结果表明拟水狼蛛和食品沟瘤蛛对飞 虱,叶蝉种 数量影响最大,其次为锥腹肖蛸和八斑鞘腹蛛,当拟水狼蛛与飞虱之比为1：20．2,食虫沟瘤蛛与飞虱之比为1：14．5以上时,蜘蛛对飞虱显示出明显的控制力。     

重组人凋亡诱导因子基因的构建、表达及其对HeLa细胞的促凋亡作用

凋亡诱导因子（apoptosis-inducing factor, AIF）定位于细胞的线粒体膜间隙.当凋亡信号刺激时,AIF分子从线粒体释放到胞浆,然后转位到细胞核内,引起染色体核周边凝集和DNA呈大片段断裂（～50 kb）.用RT-PCR法分段克隆得到人全长AIF基因,经改造截去其N端线粒体定位信号编码序列,代之以不同长度的绿脓杆菌外毒素(PE)转膜结构域序列.把这些重组基因克隆入pIRES2-EGFP真核表达载体,脂质体法转染HeLa细胞,通过荧光显微镜观察、共聚焦显微镜观察、电镜观察等方法检测了多种重组人AIF基因的表达及其对细胞生长的影响.证明了重组人AIF基因的表达可引起HeLa细胞死亡,为肿瘤的杀伤提供了新的策略.     

用RAPD技术检测不同生态类型蜘蛛代表品种的基因组DNA多态性

蜘蛛有3种生态类型,即洞穴型、结网型和游猎型。利用RAPD技术检测3种生态类型蜘蛛的代表品种,即白额巨蟹蛛(游猎型)、漏斗蛛(结网型)、虎纹捕鸟蛛和七纺器蛛(洞穴型)的基因组DNA的多态性。用11个随机引物对3种生态类型的代表蜘蛛的基因组DNA进行扩增,平均每个品种观察到约22.5个标记,单个引物获得的标记在4～13个之间。实验结果经统计学分析表明,L纺器蛛和虎纹捕鸟蛛的随机扩增多态DNA共享度(F)高,在分子水平上进一步证实了同生态类型蜘蛛的亲缘天系最近,聚类结果表明,3种类型蜘蛛的总体演化趋势为:洞穴型 结网型—游猎型,与以往的形态学研究相符。     

陕北安塞县黄土丘陵区露水凝结时间与频率

露水凝结时间和频率是开发利用气态水资源的基本参数.根据2015和2016年黄土丘陵典型地区陕西安塞县的实地近地表露水监测数据,分析露水凝结时间和发生频率及其大气影响因子.结果表明: 研究区露水凝结时间长且具有周期性.就日周期而言,露水呈现“昼伏夜出”的典型特点,主要凝结时段为21:00至次日8:00,其中,4:00—6:00是露水最易凝结时段;就季周期而言,夏秋季是露水的频发期,春冬季是露水低发期;就年周期而言,6—11月是露水最易凝结时段.相比降雨,露水具有发生频率高、稳定性强的特点.露水的形成是下垫面和多种气象因素综合作用的结果,在相对湿度>80%、气温-露点差为1～3 ℃及风速为0～1 m·s^-1时露水发生频率更高.单就安塞地区而言,风向为120°～150°和240°～300°时更有利于露水凝结.