重组抗HER2 ScFv/tBid 基因的表达对SGC7901胃癌细胞的促凋亡作用

目的：构建重组抗HER2 ScFv/tBid载体并观察其对胃癌SGC7901细胞的促凋亡作用。 方法： 将重组抗HER2 ScFv/tBid基因克隆入真核表达载体pCMV中,转染SGC7901细胞,用RT-PCR方法检测目的基因在mRNA水平的表达,间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,通过细胞计数检测转染目的基因后对细胞生长的影响,通过检测细胞周期来观察其促凋亡作用。 结果：转染SGC7901细胞后,检测出目的蛋白的表达。细胞计数发现细胞的增殖被明显抑制。细胞周期分析有明显的凋亡峰出现,说明重组抗HER2 ScFv/tBid表达后有促凋亡作用。 结论： 重组抗HER2 ScFv/tBid基因可以在转染的SGC7901细胞中表达,并且可抑制转染细胞的生长,诱导细胞发生凋亡。     

角额壁蜂的出茧起点温度和有效积温

角额壁蜂Ｏｓｍｉａｃｏｒｎｉｆｒｏｎｓ(Ｒｏｄｏｓｚｋｏｗｓｋｉ)属蜜蜂总科切叶蜂科壁蜂属。该蜂是果树、大棚蔬菜等的良好传粉昆虫[1] 。日本、美国、韩国等先后利用该蜂给果树授粉获得成功[2 ] 。我国也对角额壁蜂进行了多方面的研究和利用 ,取得了较好的效果。但目前尚未见有关该蜂的出茧起点温度和有效积温的报道。为了准确掌握角额壁蜂的生物学特性 ,改进蜂茧保存与放蜂方法 ,为实际应用提供可靠依据 ,本文对角额壁蜂出茧起点温度和有效积温进行了研究 ,现将结果报道如下。1　材料与方法1 1　材料将 1 999年春天在野外采集的壁蜂…     

为苹果梨授粉的角额壁蜂与长角壁蜂的生物学特性比较

连续 2年在延边苹果梨园释放角额壁蜂OsmiacornifronsRodoszkowski和长角壁蜂O .longnicornisMor.,对其生物学特性进行观察。结果表明 :2种壁蜂都能在释放的苹果梨园中定居、营巢及繁殖后代 ;角额壁蜂日访花数为 4 1 5 8朵 ,长角壁蜂日访花数为 4 35 9朵 ;长角壁蜂个体较大 ,抗低温能力、抗风飞行能力和日访花能力等均较强 ,是较好的苹果梨授粉用昆虫。     

凋亡诱导因子是线粒体内介导核凋亡的最主要蛋白质之一

凋亡诱导因子（apoptosis-inducing factor, AIF）基因定位于X染色体上,其编码产物是一种可直接介导细胞核凋亡的效应分子. 鼠AIF前体蛋白在胞浆中合成后,通过其N端的线粒体定位信号（MLS）有效地穿入线粒体膜间隙,然后在102位甘氨酸处水解掉MLS,其余部分再与黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）结合,并重新折叠成为具有促凋亡潜能的成熟AIF分子,分子质量为57 ku.当凋亡信号刺激时,AIF分子从线粒体释放到胞浆,然后转位到细胞核内,引起染色体核周边凝集和DNA呈大片段断裂（～50 kb）. 该作用不受广谱caspases抑制剂z-VAD.fmk的抑制,也不受Bcl-2过量表达的影响.基因剔除实验表明,AIF蛋白的促凋亡活性是胚胎小鼠形态发生过程中类胚体成腔所必需的,而且是AIF独立作用的结果,可以不依赖caspase-3的活性.因此AIF介导的细胞凋亡可能代表了独立于caspase通路之外的另一条更原始、更保守的凋亡途径.     

重组人凋亡诱导因子基因的构建、表达及其对HeLa细胞的促凋亡作用

凋亡诱导因子（apoptosis-inducing factor, AIF）定位于细胞的线粒体膜间隙.当凋亡信号刺激时,AIF分子从线粒体释放到胞浆,然后转位到细胞核内,引起染色体核周边凝集和DNA呈大片段断裂（～50 kb）.用RT-PCR法分段克隆得到人全长AIF基因,经改造截去其N端线粒体定位信号编码序列,代之以不同长度的绿脓杆菌外毒素(PE)转膜结构域序列.把这些重组基因克隆入pIRES2-EGFP真核表达载体,脂质体法转染HeLa细胞,通过荧光显微镜观察、共聚焦显微镜观察、电镜观察等方法检测了多种重组人AIF基因的表达及其对细胞生长的影响.证明了重组人AIF基因的表达可引起HeLa细胞死亡,为肿瘤的杀伤提供了新的策略.     

高温胁迫下外源NO对高灌蓝莓PSⅡ光化学活性和抗氧化系统的影响

以高灌蓝莓品种‘都克’试管苗移栽到田间6个月的植株为试材,研究了高温胁迫条件下,外源一氧化氮(NO)对高灌蓝莓幼苗生长、PSⅡ光化学活性和抗氧化系统的影响.结果表明:0.2、0.5和1.0 mmol.L-1外源NO供体硝普钠(SNP)处理显著减缓了高温胁迫对高灌蓝莓光合系统Ⅱ(PSⅡ)的抑制,高灌蓝莓PSⅡ最大光化学效率(Fv/Fm)、实际光化学效率(ΦPSⅡ)、光化学猝灭系数(qP)和非光化学猝灭系数(NPQ)下降缓慢,使光合机构免受高温胁迫的伤害;叶片质膜透性和丙二醛含量降低,而超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性升高,从而促进了脯氨酸的积累.适当浓度的SNP能显著缓解高温胁迫对高灌蓝莓植株的伤害,其中0.5 mmol.L-1 SNP的缓解效果最好.     

一种昆虫过冷却点的简易测定装置

在前人的研究基础上改进了利用热敏电阻测定昆虫过冷却点和体液冰点的装置,经检验其准确度与常用的热电偶法基本相同,但其测定成功率较高,使用方便。本装置先录制热敏电阻值变化的全过程,便于随时调出并准确地读出过冷却点与体液冰点的热敏电阻值;开发了操作方便的昆虫夹,明显缩短了测定时间,提高了测定效率,可用于定期的、连续的昆虫过冷却点与体液冰点的批量测定。     

抑癌基因Fhit重组腺病毒的构建表达及其在结肠癌细胞中的生物学功能

目的：构建携带抑癌基因Fhit的重组腺病毒并通过其研究Fhit蛋白对结直肠癌细胞增殖能力的影响。方法：利用PCR方法从人胎肝文库中克隆Fhit基因片段,Fhit基因PCR产物连入T载体构建重组质粒pMD18T-Fhit。测序正确后,将基因片段导入ptrack-CMV穿梭质粒中,构建重组穿梭载体ptrack-CMV-Fhit。将经PmeⅠ 单酶切线性化的ptrack-CMV-Fhit和骨架腺病毒质粒pAdEasy-1共转BJ5183大肠杆菌,使ptrack-CMV-Fhit和pAdEasy-1发生同源重组。经PacI酶切鉴定正确后,将重组腺病毒质粒转染293A细胞获得表达Fhit蛋白的重组腺病毒rAd-Fhit,将获得的重组腺病毒感染结肠癌细胞,采用蛋白印迹法检测外源Fhit蛋白的表达,并进一步观察其对细胞增殖能力的影响。结果：我们成功构建了携带有Fhit基因的重组腺病毒,且能够在结肠癌细胞中成功表达Fhit蛋白。在结肠癌细胞中,Fhit蛋白明显减弱了结肠癌细胞的增殖能力。结论：在结肠癌细胞中,Fhit基因可能扮演抑癌基因的角色,而表达Fhit的重组腺病毒很可能成为一种结肠癌生物治疗的新策略。     

在子宫内膜癌ECC-1中他莫西芬通过mir-585调节PAX2蛋白表达

目的研究在子宫内膜癌ECC-1细胞中他莫西芬（tamoxifen,TAM）对PAX2（pairedbox2）蛋白表达的调节作用,寻找在这-过程中起调节作用的microRNA。方法用他莫西芬刺激ECC-1细胞,Western印迹检测PAX2蛋白表达的变化。利用MicrocosmTargets（miRBaseSequencedatabase）预测了PAX2相关的microRNA。用实时定量的方法检测他莫西芬刺激后ECC-1中PAX2相关microRNA表达的变化,找出差异变化明显的microRNA,合成这些microRNA的mimics,转染人ECC-1细胞中,用Western印迹检测其对PAX2蛋白表达的影响。结果他莫西芬刺激ECC-1细胞系后,Western印迹显示PAX2蛋白表达水平较对照组中等程度上调。实时定量PCR结果显示他莫西芬刺激ECC-1细胞后mir-135b＊,mir-604,mir-585,mir-181c＊表达较对照组明显下调。合成mir-135b＊,mir-604,mir-585,mir-181c＊的mimics并转染人ECC-1细胞后,Western印迹结果显示转入mir-585mimics的ECC-1细胞中PAX2蛋白表达较对照组下调。结论他莫西芬刺激可以引起ECC—1细胞中PAX2蛋白表达水平中等程度上调,通过抑制mir-585的表达减少其对PAX2mRNA翻译的抑制可能是这-调节作用中的部分机制。     

含Arg9的人抗HBsAg单链抗体/ EGFP融合蛋白基因的构建、表达和内化作用的研究

目的：构建、表达和纯化带有转膜结构域Arg9的ScFv14/EGFP融合蛋白, 并对纯化产物的亲和 活性和内化作用进行研究。 方法： 将Arg9的编码序列分别重组到ScFv14/EGFP基因的5'端或3'端或二者之间,将它们分别克隆入原核表达载体pET32a,转化大肠杆菌BL21(DE3)LysS进行诱导表达和纯化,用间接ELISA方法检测表达产物与HBsAg的亲和活性,并用间接免疫荧光检测纯化蛋白的内化活性。 结果：经测序及酶切鉴定证实四种融合基因序列完全正确.SDS-PAGE和Western blot证实四种融合基因成功表达和纯化.间接ELISA检测证实四种融合蛋白均具有HBsAg结合活性,间接免疫荧光检测显示N端带有Arg9的融合蛋白有较强的内化作用,而且不内化进入HBsAg非表达的细胞。 结论：成功构建、表达和纯化了ScFv14/EGFP融合蛋白和三种带有Arg9的ScFv14/EGFP融合蛋白,纯化产物均具有与抗原HBsAg亲和的活性,N端带有Arg9的融合蛋白与靶细胞作用有较强的内化作用。