重组抗HER2 ScFv/tBid 基因的表达对SGC7901胃癌细胞的促凋亡作用

目的：构建重组抗HER2 ScFv/tBid载体并观察其对胃癌SGC7901细胞的促凋亡作用。 方法： 将重组抗HER2 ScFv/tBid基因克隆入真核表达载体pCMV中,转染SGC7901细胞,用RT-PCR方法检测目的基因在mRNA水平的表达,间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,通过细胞计数检测转染目的基因后对细胞生长的影响,通过检测细胞周期来观察其促凋亡作用。 结果：转染SGC7901细胞后,检测出目的蛋白的表达。细胞计数发现细胞的增殖被明显抑制。细胞周期分析有明显的凋亡峰出现,说明重组抗HER2 ScFv/tBid表达后有促凋亡作用。 结论： 重组抗HER2 ScFv/tBid基因可以在转染的SGC7901细胞中表达,并且可抑制转染细胞的生长,诱导细胞发生凋亡。     

粒酶B与细胞凋亡

粒酶B（GrB)是杀伤性T淋巴细胞（CTL）和自然杀伤细胞（NK）颗粒（granule)中最重要的丝氨酸蛋白酶,通过caspases依赖途径。直接入核途径及不依赖caspases的胞浆途径。启动CTL介导的靶细胞凋亡。     

整合素：一类介导细胞信号转导的膜分子

整合素形成了一个大的蛋白家族,主要介导细胞－基质之间的相互作用,整合素除了熟知的参与粘附功能外,还可通过独特的信号转导途径。影响细胞的增殖,凋亡,分化以及运行,而细胞生理过程的失调常常导致恶性肿瘤的发生。     

两种人粒酶B嵌合基因的表达及对肿瘤细胞的杀伤作用

通过重组PCR构建了抗HER2单链抗体基因、绿脓杆菌外毒素 (PE)转位肽序列和活性型粒酶B(GrBa)基因相融合的sFv2 3e PEⅡ GrBa基因 ,以及N端包含PE部分转位肽序列的PEⅡ GrBa基因 .将这 2种粒酶B嵌合蛋白基因瞬时转染或稳定转染HeLa细胞及SKBR 3细胞 .通过间接免疫荧光、细胞计数、MTT、ELISA等方法 ,观察到细胞浆中表达的PEⅡ GrBa蛋白直接杀伤其表达细胞 ;而sFv2 3e PEⅡ GrBa表达后被分泌至细胞外 ,对产生它的细胞没有杀伤性 ,但能够特异识别并杀伤HER2阳性肿瘤细胞 .结果表明 ,抗肿瘤表面抗原的抗体能够介导靶向识别 ,转位结构域可以辅助效应分子活化、转位至细胞液并杀伤细胞 ,为肿瘤的靶向治疗提供了新的策略 .     

针对uPA的siRNA对人乳腺癌细胞侵袭的抑制作用

目的:通过RNA干涉的方法抑制乳腺癌细胞中uPA的表达,观察uPA的表达抑制后对肿瘤细胞的体外侵袭能力的影响。方法:(1)构建可以表达针对uPA的siRNA的干涉载体,转染高侵袭性人乳腺癌细胞系MDA-MB231,G418抗性筛选,挑选单克隆株;(2)分别通过RT-PCR和WesternBlot的方法检测uPA的表达;(3)平板克隆形成试验检测转染前后肿瘤细胞的克隆形成能力;4BovdenchamberAssay检测肿瘤细胞体外侵袭能力。结果:(1)可以稳定表达针对uPA的siRNA的单克隆株,uPA的表达水平显著下降;(2)转染了针对uPA的siRNA的单克隆株的克隆形成能力降低;(3)转染了针对uPA的siRNA的单克隆株体外侵袭能力与原代细胞MDA-MB231相比明显受到抑制。结论:uPA在人乳腺癌侵袭行为中发挥重要的作用,针对uPA的siRNA可以显著降低uPA的表达,从而抑制肿瘤细胞的侵袭,可望成为抗肿瘤侵袭治疗的一种有效手段。     

人α-型肿瘤坏死因子cDNA在大肠杆菌中的高效表达

人α-型肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF-α)可以在体内或体外特异地杀伤多种肿瘤细胞,并同时具有抗病毒感染及免疫调节活性,是一种非常有前途的抗肿瘤及抗病毒生物制剂。最近,国外用基因工程技术将TNF-α基因克隆并在大肠杆菌及酵母细胞中表达成功。目前,人们正致力于提高其在大肠杆菌中表达产量的研究。据此,我们构建了P_L启动子控制的TNF-α cDNA表达载体,使其在大肠杆菌中获得了高水平表达。     

重构型人caspase-8基因的表达诱导HeLa细胞凋亡

以两种大、小亚基基因次序颠倒的重构型人caspase-8基因的pIRES2-EGFP真核表达载体转染HeLa细胞,用间接免疫荧光染色、免疫细胞化学染色和电镜观察等方法,研究重构型人caspase-8基因在HeLa细胞中的表达及其促凋亡活性.结果显示,两种重构型人caspase-8基因在HeLa细胞中的表达可以有效地诱导HeLa细胞凋亡.     

缅怀一代名师苏成芝教授

我国著名生物化学与分子生物学家、医学教育家苏成芝教授1 91 7年 1 2月出生于辽宁省海城县。 1 941年从满洲医科大学毕业后曾在大连医院任小儿科医生兼生化科研究员 ,从事维生素与营养的研究。1 949年参加革命后历任中国人民解放军西北军区人民医学院生化科主任、第四军医大学训练部副部长兼生化教研室主任、教授 ,在教研室的学科建设和发展及人才培养中起着奠基者和学术带头人的重要作用。他善于将该室的教学、科研和研究生培养工作有机地结合起来 ,促进教学改革 ,推动科研发展 ,同时为我军培养了大批高级科技人才。自1 978年以来共培养了…     

凋亡诱导因子是线粒体内介导核凋亡的最主要蛋白质之一

凋亡诱导因子（apoptosis-inducing factor, AIF）基因定位于X染色体上,其编码产物是一种可直接介导细胞核凋亡的效应分子. 鼠AIF前体蛋白在胞浆中合成后,通过其N端的线粒体定位信号（MLS）有效地穿入线粒体膜间隙,然后在102位甘氨酸处水解掉MLS,其余部分再与黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）结合,并重新折叠成为具有促凋亡潜能的成熟AIF分子,分子质量为57 ku.当凋亡信号刺激时,AIF分子从线粒体释放到胞浆,然后转位到细胞核内,引起染色体核周边凝集和DNA呈大片段断裂（～50 kb）. 该作用不受广谱caspases抑制剂z-VAD.fmk的抑制,也不受Bcl-2过量表达的影响.基因剔除实验表明,AIF蛋白的促凋亡活性是胚胎小鼠形态发生过程中类胚体成腔所必需的,而且是AIF独立作用的结果,可以不依赖caspase-3的活性.因此AIF介导的细胞凋亡可能代表了独立于caspase通路之外的另一条更原始、更保守的凋亡途径.