26例新西兰白兔正常骨髓像观察

检测了第四军医大学实验动物中心提供的 2 6只成年健康新西兰白兔的骨髓像 ,对国内不同品种兔骨髓像资料加以补充和丰富。1　材料和方法　按照施新猷所著医学动物实验方法中健康兔的判断标准 ,取 2 6只健康新西兰白兔 ,年龄 8～ 18个月 ,体重1 85～ 3 4 5ｋｇ。常规 3 %戊巴比妥钠 ( 3 0ｍｇ ｋｇ)腹腔内麻醉 ,剪去术区毛发 ,无菌条件下在每只兔左侧胫骨前内侧骨面距胫骨平台 (即胫骨近侧关节面 ) 0 8～ 1 5ｃｍ范围内用骨穿针穿刺抽取 0 2～ 0 4ｍｌ不抗凝骨髓 ,立即涂片 3张做瑞氏染色 ,油镜下计数 5 0 0个有核细胞 ,并鉴定细胞种类及…     

快速显示血细胞及骨髓细胞DNA、RNA的方法

实验对传统的甲绿 派若宁法做了一定的改进 ,使染色时间缩短 ,步骤简化 ,效果良好。并对骨髓和脾造血细胞内ＤＮＡ、ＲＮＡ的定性和定量显示进行了一定的探讨。1.材料和方法1 1　材料 :派若宁Ｙ染液的配制 6%派若宁Ｙ(ＡＭＲＥＳＣＯ分装 ) 1ｍｌ,0 2Ｍ醋酸缓冲液(ｐＨ5 0 ) 8ｍｌ,蒸馏水 8ｍｌ ,优质甘油 1ｍｌ。此过程在磁力搅拌器上进行。 2 %甲绿用 0 1ＭＰＢＳｐＨ7 2溶液配制 ,经三氯甲烷洗脱去影响染色效果的甲紫成分 ,制得较纯的甲绿溶液。1 2　染色方法 :取小鼠股骨 (用ＲＰＭＩ 1640培养液将骨髓冲出 )和脾细胞 ,制成细胞悬液…     

药用植物黄芪离体培养茎尖的包埋脱水法和包埋玻璃化法超低温保存（英文）

为找出一条黄芪种质长期包埋脱水法保存和包埋玻璃化法保存的程序,以来源于黄芪离体生长腋芽的黄芪茎尖并包埋成海藻酸钙珠。随后,在MS+0.75 mol·L~(-1)蔗糖的液体培养基中25℃下预培养5 d后,放于干硅胶上无菌干燥5 h,直至含水量达23.1%(以鲜重为基础)时将材料投入液氮保存。保存1 d后,茎尖在40℃水浴中化冻2~3 min并转入固体培养基上进行再生培养,2周后大约50%的茎尖可再生出芽。黄芪茎尖包埋玻璃化法超低温保存程序也被优化,同样包埋成海藻酸钙凝胶珠的茎尖在MS+1 mg·L~(-1)6-BA+0.05 mg·L~(-1)NAA+0.75 mol·L~(-1)蔗糖的液体培养基中25℃预培养3 d,用2 mol·L~(-1)甘油+0.4 mol·L~(-1)蔗糖装载液25℃装载90 min并再用PVS2在0℃下处理120 min后直接投入液氮。保存1 d后,取出材料在37℃水浴中化冻2~3 min,并用MS+1 mg·L~(-1)6-BA+0.05 mg·L~(-1)NAA+1.2 mol·L~(-1)蔗糖的液体培养基进行10 min的洗涤后转入MS+1 mg·L~(-1)6-BA+0.05 mg·L~(-1)NAA的固体培养基上进行再生培养。茎尖的再生率接近80%。以上两种超低温保存方式均未造成再生植株形态学上的变化。因此,包埋脱水法和包埋玻璃化法两种常规方法对于黄芪茎尖超低温保存来说均具有重要的意义。     

花烛胚性悬浮细胞玻璃化超低温保存条件研究

为建立适宜的花烛(Anthurium andraeanum Lind. )胚性悬浮细胞玻璃化超低温保存技术,采用单因素实验方法对影响玻璃化超低温保存后细胞相对存活率的主要因素进行了研究.结果表明,经玻璃化超低温保存后花烛悬浮细胞的相对存活率与悬浮细胞的继代培养时间、渗透调节剂的种类和浓度及预培养时间、装载液种类和预处理时间、PVS2脱水时间以及超低温保存后的化冻温度均有一定的关系.继代培养3和5 d,细胞的相对存活率较高(约20%);分别以0.3、0.5、0.7 mol·L-1山梨醇和60、80、100、120 g·L-1蔗糖为渗透调节剂预培养0～4 d,以0.5 mol·L-1山梨醇预培养2 d的效果最好,细胞的相对存活率为26.2%;用体积分数25%PVS2预处理15 min,细胞的相对存活率最高(29.0%);分别用体积分数100%PVS2脱水0、5、10、15、20、25和30 min,其中脱水10 min的悬浮细胞相对存活率最高(32.1%);分别在10 ℃、20 ℃、30 ℃、40 ℃、50 ℃和60 ℃水浴条件下进行化冻处理,其中用40 ℃水浴化冻的悬浮细胞相对存活率最高(32.1%).花烛胚性悬浮细胞玻璃化超低温保存和化冻的适宜流程为:将继代培养3～5 d的胚性悬浮细胞团(直径2 mm)在含0.5 mol·L-1山梨醇的1/2MS液体培养基中预培养2 d后,于4 ℃条件下处理24 h,然后先用体积分数25%PVS2室温预处理15 min,再用体积分数100%PVS2 在0 ℃条件下脱水10 min,最后迅速投入液氮中冷冻保存;将经过冷冻保存的细胞置于40 ℃水浴中化冻3 min,用含1.2 mol·L-1蔗糖的1/2MS液体培养基洗涤3次(每次10 min),之后即可进行恢复培养.     

马铃薯（Solanum tuberosum L.）茎尖的超低温保存及其遗传变异的初步观察

研究马铃薯茎尖超低温保存技术的结果表明,4℃低温下锻炼6d,在添加二甲基亚砜（DMSO）和乙酰胺的培养基中预培养5d,60％PVS2于室温下装载30min,0℃下PVS2脱水40min时,茎尖成活率最高（71．6％）,再生植株生长分化正常。进一步对再生植株进行AFLP分析,6对引物组合共扩增出385条带,超低温保存前后的材料之间未见到明显差的异带,但用MSAP技术分析超低温保存前后植株甲基化的结果显示：超低温保存后的材料均有不同程度的甲基化。在扩增的624条带中,处理与否之间完全一致的带型为584条;有变化的带型为40条,处理2（茎尖经过完整的超低温保存过程,区别于处理1,增加了冷冻、解冻和洗涤后恢复培养）有13个位点的甲基化增加,21个位点去甲基化。     

改良皮片4℃低温保存方法在创面二次植皮治疗中的应用研究

目的:探讨改良皮片4℃低温保存方法在创面二次植皮治疗中的应用效果。方法:①动物实验:健康成年豚鼠3只,处死后,取背部皮肤做成32个1 cm×1 cm小皮样,随机分为新鲜皮组、庆大盐水保存组、RPMI保存组,改良RPMI保存组进行4℃保存;1周后测定皮肤活力;②临床实验:观察自2018年10月至2018年12月,二期植皮患者33例,应用改良RPMI 4℃低温保存皮肤二期回植的患者16例,与重新取皮植皮患者17例比较其皮片成活率。结果:动物实验证实:改良RPMI保存组4℃保存组在皮肤储存1周时皮肤平均活力较庆大盐水保存组、RPMI保存组高(P0.05);临床实验证实:改良RPMI保存组与重新植皮的皮片平均成活率没有显著性差别(P0.05)。结论:改良4℃断层皮片低温保存方法可短期内保存皮肤较高的活力,是皮片再利用的一种有效方法。     

豚鼠骨髓巨核细胞集落(CFU-M)和粒细胞集落(CFU-C)的特性

小鼠胸腺细胞条件培养基可促进豚鼠骨髓造血祖细胞在体外琼脂和血浆凝块培养基中形成 CFU-M 和 CFU-C。培养基中种入1×10~4—2×10~5个骨髓有核细胞,在培养7天后 CFU-M 和 CFU-C 形成的数量与种入的骨髓细胞数之间呈线性关系。CFU-M 和 CFU-C 的祖细胞具有很高的辐射敏感性,骨髓细胞体外接受~(60)钴γ线照射后 CFU-M 的计数呈指数下降,其D_0值为92拉德与 CFU-C(D_0=88拉德)相近似。     

桃花粉低温和超低温保存方法比较研究

桃(Prunus persica(L.)Batsch)是我国重要的无性繁殖作物种质资源,目前主要保存于3个国家无性繁殖作物种质圃。随着以茎尖、花粉、休眠芽为保存载体的超低温保存技术的发展,超低温保存已成为无性繁殖作物重要备份保存方式。本研究以15份桃种质花粉为研究对象,开展含水量、回湿处理和保存温度(4℃低温保存和液氮超低温保存)对保存后花粉离体萌发率的影响研究。研究结果:明确了桃种质花粉超低温保存的含水量;揭示了回湿处理对部分桃种质花粉超低温保存产生显著影响;超低温保存后花粉离体萌发率最高可达83%;4℃低温保存和超低温保存比较研究结果表明,超低温保存4年后14份桃种质花粉离体萌发率仍可保持30%以上,11份桃种质花粉离体萌发率与保存前花粉离体萌发率相比无显著变化甚至显著提高,而4℃低温保存的花粉离体萌发率降至0。该研究为国家种质库建立花粉规模化超低温保存提供技术支撑。     

测定红豆杉悬浮细胞中多酚氧化酶活性的反应条件初探

多酚氧化酶 (ＰＰＯ)是导致红豆杉培养细胞褐变的主要因素 ,迄今这一问题尚未得到根本解决。本文初步探讨了不同ｐＨ值和温度 ,以及聚乙烯吡咯烷酮等 4种化合物对红豆杉悬浮培养细胞中ＰＰＯ活性的影响。红豆杉 (Ｔａｘｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ)细胞来自华中理工大学生物工程系。称取 1ｇ细胞加入ｐＨ 6 .8的0 .0 5ｍｏｌ·Ｌ-1磷酸缓冲液中 ,在 4℃下研磨后 ,于 2℃低温离心 (1 5 0 0 0×ｇ) 2 0ｍｉｎ ,取 0 .1ｍｌ上清液 (粗酶液 ) ,以 0 .0 2ｍｏｌ·Ｌ-1邻苯二酚为底物 ,测定多酚氧化酶活性。酶活性以每ｍｉｎ光密度变化 0 .0 0 1为 1个…     

唐菖蒲花粉低温保存过程中的生理生化特征

以唐菖蒲切花栽培品种嫦娥粉花粉为实验材料,比较其花粉各项生理生化指标在-80℃和4℃贮藏过程中(360 d)的变化,以探讨2种保存条件下花粉保存效果出现显著性差异的生理生化原因.结果表明:唐菖蒲花粉在2种保存温度条件下,随保存时间的延长,各项生理生化指标表现出显著差异.与4℃保存处理相比,-80℃保存处理抑制了花粉中MDA的积累,增强了超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)的活性,减轻了花粉膜质过氧化和膜系统受伤害程度,同时提高了花粉可溶性蛋白质和可溶性糖的含量,增强了花粉的抗冻能力,从而使低温保存花粉活力维持在相对较高水平,这或许是-80℃条件下花粉保存效果较好的部分生理生化原因.     

香蕉离体茎尖超低温保存研究

以香蕉(Musaspp.)试管苗为试材,对其离体茎尖小滴玻璃化法超低温保存的影响因素进行了研究。小滴玻璃化法和玻璃化法超低温保存后再生率的差异表明,香蕉更适合用小滴玻璃化法进行超低温保存。香蕉小滴玻璃化法超低温保存的方案如下:试管苗在60g/L蔗糖的MS培养基上培养1~2个月,剥离带有1~2片叶原基的茎尖,室温下装载30m in(可延长至4h),0℃下PVS2处理40~50m in。6个基因型的14个品种的再生率平均为46.9%。通过SSR分子标记检测,再生植株的遗传稳定性没有发生改变。该结果为香蕉种质资源的长期保存提供了理论依据和技术支撑。     

野葛试管苗茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生

对野葛茎尖玻璃化法超低温保存技术的研究结果表明,H号野葛茎尖较佳的保存技术体系是:继代生长30 d的野葛无菌苗置于4℃冰箱炼苗5 d;在无菌条件下切取含1~2个叶原基(1.5~2.5 mm)的茎尖,转至含5% DMSO+5%蔗糖的MS培养基内,置于4℃冰箱预培养1 d;用60%、100% PVS₂(30%甘油+15%乙二醇+15% DMSO+13.7%蔗糖)分别在0℃下过渡和脱水各30 min,随即迅速投入液氮;保存24 h后,在40℃水浴中快速化冻90 s,用含41.1%蔗糖的MS培养液洗涤2次,每次停留10 min;转至再生培养基(MS+6-BA 2 mg/L+NAA 1 mg/L)暗培养7 d,然后光下培养,再生率可达60%以上。再生苗与常温苗形态指标差异不显著。     

DMSO浓度及降温速率对组织工程化真皮超低温保存效果的影响

组织工程化真皮的超低温保存技术是皮肤组织工程的重要组成部分,对皮肤组织库的建立有重要意义。低温保存与低温保护剂的种类、浓度、降温复温程序及低温保护剂的添加与去除方式有着密切的关系。实验目的：研究DMSO浓度及降温速率对组织工程化真皮超低温保存效果的影响。实验方法：以培养一定时间的组织工程化真皮为试材,以不同浓度的DMSO溶液为低温保护液,以不同的降温速率降温保存,以四唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率,辅以光学显微镜和扫描电镜观察分析。实验表明：降温速率为1℃／min,DMSO浓度为1．4mol／L时可获得在实验范围内较高的细胞存活率,为75％,超低温保存后的扫描电镜照片表明其细胞形态最为接近新鲜状态,细胞与支架材料的黏附也很紧密,这与细胞存活率的研究结果有很好的相关性。     

豚鼠骨髓细胞在体内扩散盒培养条件下的增殖和分化

我们研究了豚鼠骨髓细胞在体内扩散盒培养条件下的生长特性。骨髓细胞悬液在体内扩散盒培养中,细胞处于增殖活动,培养后第5天,收集的有核细胞量或增殖性粒系细胞量与最初种入的骨髓有核细胞量之间呈比例关系。骨髓细胞在体内扩散盒血浆凝块培养中,逐渐生成由红系细胞组成的细胞团(CFU-E、BFU-E)和由粒系细胞组成的细胞团(CFU-C)。培养后第7天,CFU-E 和 CFU-C 的生成量分别与种入的骨髓有核细胞量之间呈正比关系。应用体内扩散盒血浆凝块培养技术测定了整体照射条件下豚鼠骨髓CFU-C 和 CFU-E 的辐射敏感性,它们的 D_0值分别为84.2和67.6拉德。     

甘草悬浮细胞的玻璃化法超低温保存研究

以甘草悬浮细胞为材料,进行了超低温保存技术的研究。高产黄酮的甘草悬浮细胞是一种极具价值但又难于保存的材料,为解决甘草细胞超低温保存中存在的关键问题,即如何减少渗透压的突然改变对细胞造成损伤,通过优化预培养时间、细胞年龄、预处理时间、脱水时间、洗涤液蔗糖浓度等影响因素,建立了一套适合于甘草悬浮细胞的保存方法。采用改良的2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法检测,此法存活率可达82.9%。将保存后的细胞进行恢复培养,其恢复生长率可达80.4%。     

应用改良滴冻法超低温保存两种柿属植物的研究

以君迁子（Diospyros lotus L．）和柿（D．kaki Thunb．）组培苗茎尖为试材,对影响超低温保存效果的主要因素,如低温锻炼方式、预培养条件、PVS：（30％甘油＋15％乙二醇＋15％二甲基亚砜＋0．4mol／L蔗糖）处理时间等进行了研究。建立了2种柿属植物的超低温保存程序：（1）切取1cm左右试管苗梢段继代到1／2MS（KNO3和NH4NO3减半）培养基中,交替低温[昼（25±1）℃、夜（4±1）℃]锻炼6周;在含0．5mol／L蔗糖的1／2MS培养基上预培养5d,20℃下装载液（2．0mol／L甘油＋0．4mol／L蔗糖）过渡10min,0℃下PVS2处理1．5h;（2）投入液氮保存;（3）40℃水浴化冻,洗涤5～6次后接种于含1．0mg／LTDZ、0．6g／L可溶性PVP、30g／L蔗糖和7．0g／L琼脂的培养基（作者在优化柿属植物离体培养体系试验中获得）上暗培养1周,转入25℃,1500lx培养室。按照上述程序培养,‘鄂柿1号’、‘湘西甜柿’和君迁子的成活率分别为79．6％、67．4％和60．9％。     

四株草鱼呼肠孤病毒毒株的细胞感染特性比较研究

本文首次对低温保存的三株草鱼呼肠孤病毒GCRV873 、GCRV875、GCRV876与新分离的GCRV991毒株进行了细胞培养与病毒感染特性等比较研究。结果表明 ,GCRV873 、GCRV875、GCRV876在 - 30℃保存 10年后仍然具有一定的感染性 ,其滴度均在 10 2 TCID50 /mL以上 ,略低于从病鱼组织分离的GCRV991毒株的滴价。经传代培养后 ,四株GCRV的毒力逐渐升高 ,并趋于稳定 ;当感染复数 (MOI)为 0 .0 5PFU/cell时 ,测定四株GCRV的滴度均高于 10 8TCID50 /mL ,但略有差异。GCRV873 的滴度最高 ,可达到 6 .4× 10 11TCID50 /mL。连续传代的GCRV毒株在不同温度 (2 8℃、31℃、34℃、37℃、41℃ )条件下 ,均可感染CIK细胞 ;在 2 8℃时 ,感染效价最高 ,随着温度的升高 ,其感染效价逐渐降低     

防风愈伤组织的玻璃化法超低温保存及再生

为避免连续继代造成的愈伤组织变异,探索新的种质资源保存方法,对防风愈伤组织进行了超低温冷冻保存及植株再生研究。以关防风3周龄的愈伤组织为材料,单一变量法研究适宜的玻璃化法超低温保存程序。结果显示:(1)防风愈伤组织超低温保存的最佳方案为:4℃条件下于MS+1.0mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA+5%DMSO的继代培养基中预培养3d,60%PVS2常温装载20min,100%PVS2于2℃脱水45min后直接投入液氮。(2)防风愈伤组织经超低温保存后的相对存活率最高为79.24%,其中预培养和脱水是实现超低温冻存的关键环节,且1.0mol/L蔗糖的MS溶液洗涤、暗培养14d以上有助于冻后愈伤组织恢复生长。研究表明,玻璃化超低温冻存可以作为防风愈伤组织的保存方法,冻后愈伤可以恢复生长并再生成完整植株。     

卵叶泥炭藓茎尖包埋玻璃化法超低温保存研究

该研究通过对脱水时间和化冻温度的探索,检验了包埋玻璃化法在超低温保存湿润生境中苔藓的可能性。结果表明:卵叶泥炭藓无菌苗在4℃条件下预培养3d后,在0℃用60% PVS_2装载30min,PVS_2脱水60min后迅速投入液氮保存,24h后用40℃水浴快速化冻2min再培养,成活率可达42.41%,且再生植株与常温状态下的植株形态指标没有显著性差异。研究认为,包埋玻璃化法超低温保存湿润环境中生长的苔藓植物是可行的。     

顽拗性竹柏种子的贮藏特性?

文章对竹柏( Podocarpus nagi)种子的脱水耐性和贮藏特性进行了研究,结果表明：竹柏种子成熟时初始含水量约为(35±0?7)％,种子对脱水敏感,其最低安全含水量约为(16?86±0?73)％,具有顽拗性种子的典型特征;湿藏和半干藏都可以作为短期保存竹柏种子的方法,且以4℃保存优于15℃保存,但不管种子含水量如何,零下低温保存对竹柏种子都是致命的;半干藏法保存实验中,未进行脱水处理的种子(对照)在4℃贮藏6个月,种子萌发率没有发生明显下降,但贮藏期延长到9个月时,临界含水量的种子萌发力保存最高;不管贮藏介质的含水量高低,也无论贮藏在4℃还是15℃,湿藏种子在9个月的贮藏期内萌发率均没有明显的降低,但当贮藏到12个月时,15℃湿藏种子的萌发率显著高于4℃贮藏的种子,但15℃湿藏的种子在贮藏到3个月时即发现种子在贮藏期间萌发,且随着贮藏介质含水量的升高和贮藏期的延长,萌发的种子增多;竹柏的离体胚经过2h硅胶快速脱水至含水量7％后再冷冻即可获得90％以上的融后存活率,且超低温保存1年的离体胚解冻后,与只保存1周的存活率没有明显差异,表明超低温长期保存竹柏种子是可行的。本研究可以为进一步探究顽拗性种子的短期贮藏和长期保存提供理论基础和基础资料。