利用不同稀释剂对长期保存的猪精液质量检测

目的：由于冷冻保存的猪精液在解冻后会出现低成活率和低繁殖率的情况，本项目研究猪精液的低温长期保存和保存后的精子质量评定。方法：本实验选用目前常用的BTS，ANDROHEP，KIEV，ZORLESCO等四种稀释剂，将猪新鲜精液进行稀释（1：1）后分别于17℃保存15天，每天取样对精子的质量进行评价，利用荧光染料Hoechst 33258和SYBR－14／碘化丙碇（PI）分别检测精子死活；利用活体荧光染料JC－1检测精子线粒体活性；利用考马斯亮兰染色检测精子顶体状态；利用金霉素（CTC）检测精子是否获能。结果：SYBR－14／PI和Hoechst 33258两种方法检测精子死活都很灵敏，前检测的活精子比例较后稍高，但都低于JC－1检测的线粒体有活性的精子比例，说明精子线粒体活性损失要慢于质膜完整性的破坏；活精子比例和线粒体活性在保存的前8天都是缓慢减少，获能比例和顶体状态分别在第9－14天和第11天变化较大，利用AN和ZO保存13天，BTS保存10天以及KIEV保存9天的精液中精子的活率，顶体完整率及线粒体有活性的比例仍高于50％，提示这些精液仍可用于人工授精或体外受精，这四种稀释剂保存15天后的精子获能比例接近70％，Hoechst33258,SYBR-14,JC-1，考马斯亮兰检测结果亮度相关。结论：这四种稀释剂对精子的低温保存效果依此为：AN＞ZO＞BTS＞KIEV。